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1、食品安全地方标准动物性食品中b-受体阻滞剂残留检测液相色谱-串联质谱法（征求意见稿）编制说明一、标准起草的基本情况（包括简要的起草过程、主要起草单位、起草人等）（一）任务来源、主要起草单位、起草人2014年4月, 北京市疾病预防控制中心受北京市卫生计生委的委托，承担食品安全地方标准动物性食品中b-受体阻滞剂残留检测液相色谱-串联质谱法的制定工作，委托项目编号为spaqdfbz-2015-06。为保证标准制订的科学性、适用性，北京市疾病预防控制中心成立标准起草工作组，制定工作方案、明确职责分工、时间进度和有关工作要求。主要起草单位：北京市疾病预防控制中心。主要起草人：范赛、赵榕、吴国华、张楠、刘
2、平、刘伟、李丽萍、柳静、赵海燕、赵旭东、陈忠辉等。（二）简要的起草过程2014年5月，北京市疾病预防控制中心中心实验室抽调技术人员组成标准起草小组，开始制定实验方案，在前期大量文献调查和实验室研究工作的基础上建立检测方法。2014年11月开始开展方法回收率、精密度、测定低限以及线性范围等一系列技术内容的确定研究。2015年5月底形成标准检测方法草案。2015年7月，组织卫生部食品安全风险评估重点实验室、公安部物证鉴定中心、北京市海淀区产品质量监督检验所等3家单位进行了方法的协同性验证试验，验证结果表明方法的各项技术指标满足食品中-受体阻滞剂测定的要求。二、标准的重要内容及主要修改情况本标准在国
3、内为首次制定，对标准方法的范围、原理、试剂材料、仪器设备、分析步骤、分析结果的表述、精密度以及定量限等重要内容进行了规定和说明。（一）目标基质的选择国内外现有研究表明，-受体阻滞剂则被广泛用于动物运输过程中防治由于动物应激而造成的突然死亡，由于该类化合物往往是在动物屠宰前的数小时注射使用的，因此该类化合物相对其他的兽医用药可能对消费者造成的健康风险更大。beta-受体阻滞剂多残留于猪、牛、羊等动物食品中，水平可能存在较大区别。本标准起草小组在前期研究中对北京市居民主要动物性食品（猪、牛、羊）（肉、肝、肾）中-受体阻滞剂的含量进行了初步监测。监测结果显示，未发现-受体阻滞剂在北京市的动物性食品中
4、的残留。因此，对检测步骤和条件进行确证和验证时，研究参考欧盟96/257/EC中规定的相关方法学验证方法，以空白基质加标回收进行了方法学验证。所包选择的动物性食品基质主要包含市面上常见的猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、羊肉这5种食品基质。本标准对上述5种动物性食品中-受体阻滞剂的检测过程进行了规定。经过多家单位的协同性验证试验，证明标准方法的各项技术指标能够满足上述食品中测定的要求。（二）检测方法的选择-受体阻滞剂属于兽药残留的一种，兽药残留多含量通常较低，主要集中在g/kg水平，属于痕量有机污染物。为了保证检测方法具备足够低的检出限，同时考虑到食品基质的复杂性，本标准采用超高效液相色谱-电喷雾串联质
5、谱检测法（UPLC-ESI-MS/MS）对食品中-受体阻滞剂进行测定。该方法综合利用了超高效液相色谱的高分离度特性和电喷雾串联质谱的高灵敏度特性，能够较好的满足食品中痕量-受体阻滞剂测定的需求。此外，为了补偿超高效液相色谱-电喷雾串联质谱检测中可能存在的基质效应以及样品前处理过程中目标物的损失，本标准采用同位素内标稀释法并结合基质标准曲线对-受体阻滞剂的含量进行定量，保证了方法回收率、精密度和线性等指标的良好。（三）试剂纯度和级别的选择本标准规定使用色谱级的水、甲醇及乙腈作为流动相和提取液，所选用的化学品为优级纯。（四）分析条件的优化和选择在对实验条件反复优化的基础之上，本标准对猪肉、猪肝、猪
6、肾、牛肉、羊肉基质样品的提取和净化步骤进行详细了规定，给出了样品上机测定时液相色谱和质谱的参考条件。标准方法中主要技术内容的确定依据如下：在仪器分析条件的优化过程中，通过流动注射50 g/L的以甲醇-0.1%甲酸水溶液（50：50，V/V）为溶剂的单标标准（包括氘代同位素内标），采用ESI+和ESI-模式进行质谱扫描，所有化合物均是在ESI+模式下有良好响应。文献报道的-受体阻滞剂多组分析液相色谱常用的流动相体系有乙酸水溶液-乙腈、0.1%甲酸-乙腈、10 mM乙酸铵缓冲液-甲醇、0.1%磷酸盐缓冲液-乙腈、0.1%甲酸-甲醇等。考虑毒性、环境等因素，本试验选择0.1%甲酸-甲醇为流动相，经过
7、流动相梯度优化后，得到较好的分离效果。并且，待测化合物多为正离子模式，0.1%甲酸-甲醇可以更加容易提供质子，促进目标化合物带电荷，有助于目标物响应的提高，因此，最终选择 0.1%甲酸-甲醇作为流动相。-受体阻滞剂类药物在动物组织中以硫酸轭合物或葡萄糖醛酸轭合物等形式存在，因此样品要先进行水解，使待测物游离或从组织中释放以进行后续的提取。尤其是拉贝洛尔、吲哚洛尔等-受体阻滞剂类药物的轭合物比例较高，必须经水解后进行提取和净化。常用的水解方法主要有酶水解、酸水解和碱水解。本方法依据前期的研究结果，选择了三氯乙酸（TCA）酸解方式进行酸解。同时，动物组织中-受体阻滞剂常用的提取液有0.1 mol/
8、LHCl和0.1 mol/LHClO4。本实验考虑到动物组织样品基质的复杂性和脂肪含量较高等以及-受体阻滞剂的化学稳定性高等特点，采用氧化性更强的三氯乙酸（TCA）溶液做提取液，以在提取过程中达到更好的去除干扰杂质效果，特别是沉淀蛋白的效果要优于盐酸和高氯酸。-受体阻滞剂类化合物多能与H+结合形成阳离子，被MCX柱的填料吸附，从而具有高的选择性和灵敏度，起到较好的净化效果。进行MCX净化后的洗脱液浓缩至干后，先用甲醇涡旋复溶，复溶的溶液中有白色悬浮絮状沉淀，此絮状沉淀应为蛋白等大分子物质，经高速冷冻离心后，将甲醇液浓缩至干用流动相复溶过有机滤膜后近LC-MS测定。采用甲醇沉淀蛋白的这一步骤后，样品在LC-MS上的响应地背景值降低，而且对仪器的污染有所降低。三、国内国际相关标准情况本标准为首次制定。经查阅，目前无相关的国际标准或国外标准。四、其他需要说明的事项无。
