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1、葛根提取物技术要求本技术要求的编写格式是按GB/T标准化工作导则的有关规定编辑。本技术要求检验方法引用了中华人民共和国药典2010年版一部；GB/T ; GB ; GB/T ;GB/T ； GB/T ； GB/T等国家标准，以保证检验数据的准确性。本技术要求的附录A、附录B均为规范性附录。1范围本技术要求适用于以豆科植物野葛P ueraria lobata （Willd. ） Ohwi葛）为原料 的干燥根（习称野经加工制成的提取物。2规范性引用文件本技术要求中引用的文件对于本技术要求的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用 于本技术要求。凡是不注日期的引用文件，其最新版本
2、（包括所有的修改单）适用于本技术要求。GB T食品中总碑及无机不巾的测定GB食品中铅的测定GB/T 食品中铜的测定GB/T 食品中镉的测定GB/T 食品中总汞及有机汞的测定GB/T食品中有机氯农药多组分残留量的测定GB食品卫生微生物学检验GB食品卫生微生物学检验GB食品卫生徽生物学检验GB食品卫生微生物学检验GB食品卫生微生物学检验GB食品卫生微生物学检验GB食品卫生微生物学检验中华人民共和国药典菌落总数测定大肠菌群测定沙门氏菌检验志贺氏菌检验金黄色葡萄球菌检验溶血性链球菌检验霉菌和酵母菌计数2010年版一部3技术要求制法取葛根，粉碎成粗粉，加30%乙醇加热回流提取两次，每次2小时，第一次加1
3、0倍量，第二次加8倍量，滤过，合并滤液，滤液于60c减压浓缩至相对密度为（室温）的清膏，放冷，加乙醇使含醇量为70峪静置12小时，取上清液，减压回收乙醇，并浓缩至稠膏，干燥，即得。感官要求：应符合表1规定。表1感官要求项目要求色泽淡黄色至棕黄色、色泽均匀。滋味及气味具有本品应有的气味、味微甜。性状干燥均匀的粉末。杂质无肉眼可见杂质。功效成分：应符合表2规定。表2功效成分项目指标葛根素（GiHoQ）（以干燥品计）/ （ mg/g）其它异黄酮总量（大豆甘、染料木昔、大豆素和染料木素）（以干燥品计）/ （ mg/g）葛根素与其它异黄酮总量（大豆甘、染料木昔、大豆素和染料木素）的比值理化指标：应符合表
4、3规定。表3理化指标项目指标薄层鉴别应符合规定水分/%炽灼残渣/%铅(以 Pb 计)/ ( mg/kg)镉(以 Cd 计)/ ( mg/kg)神(以 As 计)/ ( mg/kg)汞(以 Hg 计)/ ( mg/kg)铜(以 Cu 计)/ ( mg/kg)20/( mg/kg)滴滴涕/( mg/kg)特征图谱应符合规定微生物指标：应符合表4规定。表4微生物指标项目指标菌落总数/ （cfu/g ）1000大肠菌群/ ( MPN/100g40霉菌 / (cfu/g )25酵母菌/ (cfu/g )25沙门氏菌不得检出志贺氏菌不得检出金黄色葡萄球菌不得检出溶血性链球菌4检验方法不得检出感观检验 取适
5、量试样，置于白瓷板上，在自然光下，用肉眼观察其色泽、性状、杂质，闻其气味，用温开水漱口，品尝其滋味。功效成分检验按规范性附录A规定的方法测定。理化检验4. 3.1 薄层鉴别 取本品0.lg,加甲醇10ml,超声处理20分钟，滤过，滤液作为供试品溶液。另取葛根对照药材0. 8g,加甲醇10ml,放置2小时，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇使溶解，作为对照药材溶液。再取葛根素对照品，加甲醇制成每1ml含lmg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（中国药典2010年版一部附录W B ）试验，吸取上述三种溶液各10 PL分别点于同一硅胶G薄层板上，使成条状，以三氯甲烷-甲醇-水（7:）为展开剂，展开，取出，
6、晾干，置紫外光灯（365nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱和葛根素对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光条斑。4. 3.2水分:按中华人民共和国药典2010年版一部附录K H （第一法）测定，不得过%4. 3.3炽灼残按中华人民共和国药典2010年版一部附录K J测定，不得过外 GB食品中铅的测4. 3.4铅：按定规定的方法测定。4. 3.54. 3.6镉：按碑:按GB/TGB/T食品中镉的测定规定的方法测定。食品中总的及无机种的测定规定的方法测定。4. 3.7汞：按GB/T食品中总汞及有机汞的测定规定的方法测定。4. 3.8铜：按GB/T食品中铜的测定规定的方法测定。4. 3.9
7、按GB/T食品中有机氯农药多组分残留量的测定规定的方法测定。4.3. 10特征图谱按规范性附录B规定的方法测定。微生物检验4. 4. 1菌落总数：按食品卫生微生物学检验 菌落总数测定规定的方法测定。4. 4.2大肠菌群：按食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定规定的方法测定。4. 4.3霉菌和酵母菌:GB食品卫生微生物学检验 霉菌和酵母菌计数规定的方法测定。4. 4.4沙门氏菌：按食品卫生徽生物学检验 沙门氏菌检验规定的方法测定。4. 4.54. 4.6志贺氏菌：按金黄色匍萄球菌:食品卫生微生物学检验 志贺氏菌检验规定的方法测定。按GB食品卫生微生物学检验金黄色葡萄球菌检验规定的方法测定。溶血性链
8、球菌检验规定的 方法测定。4.4.7溶血性链球菌：按GB食品卫生微生物学检验5贮藏 密封，置凉暗干燥处。附录A（规范性附录） 功效成分的检验葛根素与其它异葛根素、其它异黄酮总量（大豆昔、染料木甘、大豆素和染料木素）黄酮总量（大豆昔、染料木昔、大豆素和染料木素）的比值的测定原理用60%乙醇作为溶剂，超声提取试样中的葛根素、大豆昔、染料木昔、大豆素和染料木素，经高效液相色谱柱（Gs）分离，紫外检测器（UV检测，根据色谱峰的保留时间定性，峰面积外标法定量，测定试 样中葛根素、其它异黄酮（大豆甘、染料木昔、大豆素和染料木素）的含量，并计算葛根素与其它异黄酮总量（大豆 昔、染料木昔、大豆素和染料木素）的
9、比值。试剂A. 2. 1 水：纯化水。A.2.2 甲醇、色谱纯。A.2.3乙月青：色谱纯。A.2.4乙酸铁：分析纯。A.2.5冰乙酸：分析纯。A.2.6 乙醇：分析纯。L乙酸铉（pH ）:称取乙酸铁1.54g,加水约900ml,搅拌使溶解，用冰醋酸调节pH值至，用水稀释至1000ml,摇匀，即得。 A. 2.8 葛根素、大豆昔、染料木甘、大豆素和染料木素对照品：由中国药品生物制品 检定所提供。 仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器。超声波清洗器。分析步骤A41 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AichromBond-AQ G18x 250mm 5 ,或相当者）；以乙月青为流
10、动相A,以L乙酸筱溶液（用冰乙酸调pH值至）为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为ml/min ;检测 波长为260nn。理论板数按葛5000 o根素峰计1问/.、时间（min）A (%B ( %算应不低20-3080-70于307030-4870524852482052802080400-2cri-A4?日囹-MU*o-ouu10.0115.020A. 4. 3溶液的制备A43. 1对照品混合溶液的制备取葛根素、大豆甘、染料木甘、大豆素和染料木素对照品各适量，精密称定，加甲醇制成每和染料木1ml中含葛根素Img大豆昔、染料木昔、大豆素 素的混合溶液，摇匀，即得对照品混合溶液。A. 4
11、. 3. 2供试品溶液的制备取本品约501ng精密称定，置25ml量瓶中，加60虬醇适量，超声处理30分钟，放冷至室温，加60与乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。A. 4.4标准曲线的制备分别精密量取对照品混合溶液、八，置10ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，得对照品系列溶液。分别精密吸取对照品系列溶液各10 P1,注入液相色谱仪，记录色谱图，以对照品溶液浓度(Pg/ml )为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。A. 4.5精密吸取供试品溶液 10 P 1,注入液相色谱仪，记录色谱图，按标准曲线法以峰面积计算，即得。A. 4. 6计算CX 25X=WX( 1-M)式中：X一
12、试样中单一成分的含量，mg/g ;g/ml ；C一从标准曲线上求得供试品溶液中相应成分的浓度，PW取样量，mgM一水分，%计算结果保留至小数点后一位。A. 4.7允许差同一样品两次测定，相对平均偏差不得超过（规范性附录）特征图谱原理用60与乙醇作为溶剂，超声提取试样中的特征成分，经高效液相色谱柱（Cis）分离，紫外检测器（UV检测，根据参照物色谱峰的保留时间，计算各特征峰的相对保留时间。试剂水：纯化水。甲醇、色谱纯。乙懵：色谱纯。乙酸铁：分析纯。冰乙酸：分析纯。乙醇：分析纯。L乙酸铉（pH ）:称取乙酸钱1.54g,加水约900ml,搅拌使溶解，用冰醋酸调节pH值至，用水稀释至1000ml,摇
13、匀，即得。葛根素由中国药品生物制品检定所提供。仪器高效液相色谱仪，带紫外检测器。超声波清洗潜分析步骤色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂（AichromB on d-AQ CIS X 250mm 5或相当者）；以乙睛为流动相A,以L乙酸核溶液（用冰乙酸调pH值 至）为流动相B,按下表中的规定进行梯度洗脱；流速为min;检测波长为260门0。理论板 数按葛根素峰计算应不低于5000o时间(min)A (%B (%203080703070304870524852482052-808020溶液的制备参照物溶液的制备取葛根素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含葛根素img摇的溶
14、液，摇匀，精密量取2ml,置10ml量瓶中，加60%乙醇稀释至刻度，取本品 匀，即得。供试品溶液的制备50mg,精密称定，置50ml量瓶中，加60%乙醇适量，超声处理30分钟，放冷至室温，加60%乙醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法 分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各10 PI,注入液相色谱仪，测定,即得。结果判断：供试品特征图谱中应有5个特征峰，与参照物峰相应的峰为S峰，计算各特征峰与S峰的相对保留时间，其相对保留时间应在规定值的 5%之内。规定值为：（峰S）、（峰2）、（峰3）、（峰4）、（峰 5）。300-200-40-对照特征图谱峰1 （峰S）:葛根素 峰2:未知 峰3:大豆昔 峰4:染料木首 峰5
