《MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程》由会员分享,可在线阅读,更多相关《MOS-450 圆二色光谱扫描操作规程(5页珍藏版)》请在金锄头文库上搜索。
1、MOS-450圆二色光谱扫描操作规程1. 测量波长小于210nm,需要对仪器进行氮气吹扫处理。打开氮气,调整流量 计流速为16.6L/min,通氮气几分钟。确认ALX-250的电源线插在氙灯的位 置,并且氙灯已对准光路,具体操作见光源的选择操作说明。然后打开 ALX-250光源开关,将氮气流量计流速设为6.6L/min,预热15分钟后,查看 ALX-250面板显示,微调旋钮,将功率确定在150W,光源准备完毕。2. 测量波长大于210nm如果无需氮气吹扫,直接打开ALX-250电源,等待功 率稳定在150W后进行下一步操作。3. 在第一步骤中打开ALX-250的同时,打开MM-450和PMS-
2、450电源,预热15分钟。4.将装有待测样品空白溶液(如水或缓冲盐)的石英池放入样品仓,盖上盖子,(所用的石英池必须经过彻底的清洗,如有残留物将显著干扰测试结果)。5点击电脑桌面上的图标,进入BioKine软件操作主界面。6.点击图1主界面的Device/Scanning Spectrometer,进入光谱扫描界面,如图2。Lim I/ (acquit*图1图27. 在要测量波长的范围内取一个波长数值,输入到图2下方的Ex处,点击Enter 键。这时确认汨理按钮变为,然后点击曲,自动调整HV电压,然 后再点击汕心按钮,锁定此电压值。8. 点击主界面上方的皿联血気3按钮,选择光谱测量方法,如图3
3、。图3Acquisition mode:选择测量模式 CD。Begin(nm):扫描初始波长End(nm):扫描结束波长Scan Repeat :扫描次数Acquisition duration:每个nm的测量持续时间,范围0.05s-20s。圆二色扫描推荐值20s,建议最小大于1 s。ShutterAutomatic mode:选择Always open,挡板处于始终打开的状态。PM gain*10:当在非常低的信号测量,可选择此项,进行信号的增益。CD parameters: CD的灵敏度,根据信号的振幅设置,有四个不同的选项,1000、300、100 和 30 mdeg。其他选项根据需要
4、可以选择。以上参数都设置好后,点击OK按钮,参数设置完成,回到主界面。9. 空白的测量点击图2主界面Blank spectum区域的Record按钮,记录第一步添加的空白 样品谱图,空白谱图显示在主界面中。测量后选择Subtract复选框,将在随 后的样品光谱的测量中扣除空白值。如点击save as可将空白谱保存下来。10. 样品的测量再点击九匕按钮,关闭挡板,取出样品池,将空白样品换成被测样品,然 后再放回到样品支架上,盖好样品仓盖。这时再点击 九匕,打开挡板。重 复之前的第七项步骤,如此时HV大于600V,或PMS-450红色小灯闪烁的 情况,需进行条件优化,如增大狭缝,减小光径,以及降低
5、样品浓度等操作。 如未出现PMS-450红色小灯闪烁的情况,则既可开始测试。点击图2主界 面Acquisition control区域的* I按钮,记录样品的圆二色谱图,此图谱已扣 除空白谱,显示在图2主界面中。11.谱图的数据处理第十步测量的谱图为样品圆二色原始测量图,需要经过数据处理,得到优化 的曲线图,操作如下:选择主界面Analysis菜单,这时界面变为分析界面,选择Tools菜单下的 Smoothing, Savitzky-Golay Smooth 命令,如图 4。图4点击Proceed按钮,这时经计算优化后的曲线出现在界面中。12保存数据选择主界面的File菜单下的Save As出
6、现图5界面。选择要保存文件到哪个文件夹,并给文件命名,选择Save As Text,然后点 击Save按钮,文件保存到指定的文件夹中。此文件可用txt格式打开。13.如果对圆二色数据需要进行蛋白质二级结构分析,进行如下操作:在BioKine软件中选择File菜单的Load data file命令,打开要进行分析的文件,然后选择File菜单的Exprot data to/Dicroprot file命令,如图6,导出数据文件为Dicroprot的文件。图6出现图7所示界面,选择导出数据要保存的文件夹并命名此导出数据,并根 据测量的具体情况填入相应的信息,点击Export按钮,数据导出结束,关闭图7界面。辖?齡懿禁户retired 2M9已江南大学DlcEQpful: pataineteiName ol pioteinLi中I path ImriilCnncefilialianNamefir G 24”Mumtei(n| 讪pj :器mL Mnfemlai jiaoaoExportDo&在http:/dicroprot-pbil.ibcp.fr网站上下载蛋白质二级结构分析软件,然后将 导出的数据在此软件中打开进行相应的二级结构分析。