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1、word生物化学实验复习题：1. 试述旋光法测定淀粉含量的实验原理。在加热与稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同谷物淀粉的比旋光度是不同的。其在171195之间，因此可用旋光法测定粗淀粉的含量。2. 淀粉含量测定的方法有几种？比拟各方法特点。淀粉是由多个葡萄糖缩合而成的多糖，测定淀粉的方法主要有酸水解法、酶水解法和旋光法等。1、酸水解法：面粉经乙醚除去脂肪，乙醇除去可溶性糖类后，用酸水解淀粉为葡萄糖，按复原糖测定方法测定复原糖含量，再折算为淀粉含量。2、酶水解法：面粉经除去脂肪与可溶性糖类后，其中淀粉用淀粉酶水解成双糖，再用盐酸将双糖水解成单糖，最后按复原糖测定，
2、并折算成淀粉。3、旋光法：在加热与稀盐酸的作用下，淀粉水解并转入盐酸溶液中。在一定的水解条件下，不同面粉淀粉的比旋光度是不同的。其淀粉的比旋光度在171195之间，因此可用旋光法测定淀粉的含量。3.参加50ml 1%HCl混成浆状不能有结块沸水浴中准确加热15min先加1ml 30% ZnSO4混匀再加1ml 15%亚铁氰化钾混匀移至100ml容量瓶中加水定容混匀后过滤弃去最初15ml收集其余滤液。取滤液20ml置于旋光管中，先用1%HCl 调节旋光仪“0点，然后将样品溶液放入旋光仪中测4. 写出计算粗淀粉含量的公式并说明各符号的含义。5. 试述凯氏定氮法测定蛋白质含量的实验原理。含氮的有机物
3、与浓硫酸共热时，其中的碳、氢二元素被氧化成二氧化碳和水，而氮如此转变成氨，并进一步与硫酸作用生成硫酸铵。 浓碱可使消化液中的硫酸铵分解，游离出氨，借水蒸汽将产生的氨蒸馏到一定浓度的过量硼酸溶液中，硼酸吸收氨后使溶液中氢离子浓度降低，然后用标准无机酸滴定，直到恢复溶液中原来氢离子浓度为止，最后根据所用标准酸的摩尔数相当于待测物中氨的摩尔数计算出待测物中的总氮量。6. 蛋白质含量测定的方法有几种？比拟各方法特点。定氮法,双缩尿法Biuret法、Folin酚试剂法Lowry法和紫外吸收法.考马斯亮蓝法Bradford法.凯氏定氮 灵敏度低,适用于0.1.0mg氮,误差为 2 费时10小时 将蛋白氮转
4、化为氨,用酸吸收后滴定 非蛋白氮可用三氯乙酸沉淀蛋白质而别离 用于标准蛋白质含量的准确测定；干扰少；费时太长双缩脲法Biuret法 灵敏度低 20mg 中速 2030分钟 多肽键碱性Cu2紫色络合物 硫酸铵；Tris缓冲液；某些氨基酸 用于快速测定,但不太灵敏；不同蛋白质显色相似紫外吸收法 较为灵敏 50100mg 快速 10分钟 蛋白质中的酪氨酸和色氨酸残基在280nm处的光吸收 各种嘌吟和嘧啶；Folin酚试剂法Lowry法 灵敏度高 5mg 慢速 4060分钟 双缩脲反响；磷钼酸磷钨酸试剂被Tyr和Phe复原 硫酸铵；Tris缓冲液；甘氨酸；各种硫醇 消耗时间长；操作要严格计时；颜色深浅
5、随不同蛋白质变化考马斯亮蓝法(Bradford法) 灵敏度最高 5mg 快速515分钟 考马斯亮蓝染料与蛋白质结合时,其lmax由465nm变为595nm 强碱性缓冲液；SDS 最好的方法；干扰物质少；颜色稳定； 颜色深浅随不同蛋白质变化7. 简述凯式定氮法测定蛋白质的关键步骤。1、消化：在电子天平上称取小麦粉0.2000g-0.4000g 置于凯氏试管底部加混合混合催化剂0.5g和3ml浓硫酸置于消化炉中高温加热至淡绿色透明2h左右取出放入通风橱至不冒白烟，向其中加20ml水，并移至100ml容量瓶定容即得样品消化液。同时每4组8人做1空白实验：0.5g混合催化剂+3ml浓硫酸置于凯氏试管中
6、放入消化炉加热至淡绿色1h左右冷却后加水移入100ml容量瓶中定容得空白消化液。2.蒸馏与吸收：吸取10ml 2%的硼酸于三角瓶中加4d甲基红-溴甲酚绿混合指示剂。将其置于冷凝管下端并使管尖插入液面以下，再吸取5ml消化液从漏斗上方参加蒸馏室用水洗两次，并参加10ml 40%NaOH后水封注意：勿使漏斗玻杆取下以防漏气，然后打开通气阀进展加热蒸馏，直至吸收液由紫红色变成绿色，计时蒸馏3min先移去吸收液再停止加热以防倒吸。3. 滴定：用0.01mol/L HCl 滴定吸收液由绿色退去变红色为止，记下耗去标准盐酸的体积(V1.V0)。8. 写出计算蛋白质含量的公式并说明各符号的含义。9. 试述淀
7、粉酶活力测定的实验原理。淀粉酶主要包括-淀粉酶和-淀粉酶两种。-淀粉酶可作用于淀粉中的-1,4-糖苷键，生成葡萄糖、麦芽糖、麦芽三糖、糊精等复原糖，-淀粉酶可从淀粉的非复原性末端进展水解，生成麦芽糖。淀粉酶催化产生的这些复原糖能使3,5-二硝基水酸复原，生成棕红色的3-氨基-5-硝基水酸。淀粉酶活力的大小与产生的复原糖的量成正比。用标准浓度的麦芽糖溶液制作标准曲线，用比色法测定淀粉酶作用于淀粉后生成的复原糖的量，以单位重量样品在一定时间生成的麦芽糖的量表示酶活力。淀粉酶存在于萌发后的禾谷类种子中，其中主要是-淀粉酶和-淀粉酶。两种淀粉酶特性不同，-淀粉酶不耐酸，在pH3.6以下迅速钝化。-淀粉
8、酶不耐热，在7015min钝化。根据它们的这种特性，采用加热的方法钝化-淀粉酶，测出-淀粉酶的活力。在非钝化条件下测定淀粉酶总活力-淀粉酶活力+-淀粉酶活力，再减去-淀粉酶的活力，就可求出-淀粉酶的活力。10. 淀粉酶活力测定的方法有几种？比拟各方法特点。11. 简述淀粉酶活力测定的关键步骤淀粉酶活力测定-淀粉酶活力测定吸取原液1ml于具塞试管中70保温15min用于钝化-淀粉酶加1ml 1%淀粉置于40水浴中保温5min加1% 3.5一二硝基水酸2ml 沸水加热5min后加水至20ml混匀测A1用1#管调零总酶活力测定吸取稀释液1ml于具塞试管中加1ml 1%淀粉40保存5min参加1% 3
9、.5一二硝基水酸2ml沸水加热5min后加水至20ml混匀测A2用1#管调零12. 写出计算淀粉酶活力大小的公式并说明各符号的含义。13. 试述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的实验原理。聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质相对分子质量的方法，主要是根据各蛋白质组分的分子大小和形状以与所带净电荷多少等因素所造成的电泳迁移率的差异。 在聚丙烯酰胺凝胶系统中，参加一定量的十二烷基硫酸钠SDS，使所有蛋白质颗粒外表覆盖一层SDS分子，导致蛋白质分子间原有的电荷差异消失，此时，蛋白质分子的电泳迁移率主要取决于它的分子量大小。当蛋白质的分子量在15000200000之间时，电泳迁移率与分子量的对数呈直线关系。
10、14. 试比拟已做实验测定蛋白质分子量方法的异同点。SDS-PAGE 超速离心 凝胶过滤 粘度法 生物质谱技术15. 简述SDS-PAGE法测定蛋白质分子量的关键步骤。1. 电泳槽的安装：取两块玻璃板将带玻璃条的板高板放置桌面上在上面放置“U型橡胶条最后将凹槽玻璃板低板压在高板上，置于电泳槽，用锲子压紧。2. 凝胶液的制备与灌装：配置20ml凝胶液：在小烧杯中依次参加5ml 30%凝胶储液，10ml PH 7.2 凝胶缓冲液(用前混匀再取)，2ml 1%TEMED，2.6ml重蒸水，0.4ml 10%过硫酸铵混匀后立即沿高板侧倒凝胶液于两板之间直至低板上沿插上梳子置于35C培养箱中放置15mi
11、n，待胶凝后取下“U条重新将胶板放置于电泳槽向外槽加三分之一槽深电极缓冲液向槽参加电极缓冲液没过低板最后拔出梳子。3. 加样：用微量进样器参加10l标准蛋白于中间胶槽其余槽参加10l如下样品牛血清蛋白绿豆别离蛋白4. 电泳：连接电极线，高板外侧接正极，低板侧槽接负极，打开电源调电流120mA电泳2h当指示剂前沿超过二分之一胶长时停止5. 剥胶：取下胶板倒去电极缓冲液测量指示剂迁移距离和染色前胶长，然后将胶板置于水龙头下方冲玻板四周直至胶与玻璃板别离6. 染色与固定：将胶板放入染色盒向其中参加0.1%考马斯亮蓝R250使其浸没置于摇床上染色过夜7. 脱色：用10%乙酸溶液脱色至谱带清晰，测定脱色
12、后胶长与各谱带迁移距离。16. 写出电泳法测定蛋白质分子量的计算公式并说明各符号的含义。17. 试述赖氨酸含量测定的实验原理蛋白质中赖氨酸的含量是谷物品质的主要指标之一。由于动物与人类不能合成，须从食物中得以补充，为此培育高含量赖氨酸的谷物，对于提高营养价值有重要意义。本实验分别用茚三酮溶液显色法和染料结合法，测定小麦种子中赖氨酸含量。谷物蛋白中赖氨酸残基有自由的NH3与茚三酮试剂可发生颜色反响，生成紫红色物质，其颜色深浅与赖氨酸残基的数目成正相关，而其它氨基酸没有自由氨基，不能发生这一反响。选用碳原子数目与赖氨酸一样的亮氨酸，配成标准溶液，做出标准曲线，可用以测定谷物蛋白赖氨酸的含量。18.
13、 氨基酸含量测定的方法有几种？比拟各方法特点。常用的有,半定量法：纸层析法；定量法：HPLC柱前衍生化法.19. 简述测定赖氨酸的关键步骤。1.标准曲线的制作每2组4人做1标准曲线2、样品的处理与测定：在电子天平上称取小麦粉10mg于具塞试管底部加1ml 2% 碳酸钠于80水浴中保温提取10min加2ml茚三铜试剂80水浴中保温30min后冷却至室温加5ml 95%乙醇和5ml蒸馏水充分混匀后转移至离心管中3000转/分 离心3min离心前必须平衡取上清液测A以1号管调零20. 写出计算赖氨酸的公式并说明各符号的含义。21. 试述甲醛滴定法测定氨基氮的实验原理。常温下甲醛能迅速与氨基酸的氨基结
14、合生成亚羟甲基化合物，使上述平衡右移促使NH3+释放H+，从而使溶液酸度增加，滴定终点移至酚酞的变色域pH值9.0左右，根据滴定终点时所消耗标准碱的量即可算出反响体系中存在的游离氨基即氨基氮的含量如果样品为一种的氨基酸，即可算出该氨基酸的含量。如果样品为未知氨基酸或几种氨基酸的混合物，如此只能算出其氨基氮的含量。 22. 简述甲醛滴定法测定氨基氮的关键步骤。氨基酸溶液中氨基酸含量的测定:取3只三角瓶编号2ml 1% 甘氨酸2ml 1% 甘氨酸2ml 水空白均加5ml 水和5ml中性甲醛用前加2滴 0.5% 酚酞滴加0.1mol/LNaOH调至淡红色，与4滴 0.5%酚酞混匀分别记下耗去标准碱的
15、体积(V1.V2.V0 23. 写出甲醛滴定法测定甘氨酸的公式并说明各符号的含义。24. 试述纸上层析法别离氨基酸的实验原理。纸层析是以滤纸作为惰性支持物的分配层析，滤纸纤维上的OH具有亲水性，因此能吸附一层水作为固定相，而通常把有机溶剂作为流动相。有机溶剂自上而下流动，称为下行层析；自下而上流动，称为上行层析。流动相流经支持物时与固定相之间连续抽提，使物质在两相之间不断分配而得到别离。25. 氨基酸别离的方法有几种？比拟各方法特点。氨基酸的别离提纯方法主要有沉淀法、离子交换法、萃取法、电渗析等离子交换法，根据氨基酸是两性电解质这一特征,以与目的氨基酸与杂质氨基酸pK、pI值的差异,利用离子交换树脂对各种氨基酸吸附能力的不同对氨基酸进展别离纯化。离子交换法的别离步骤主要包括树脂的处理、装柱、平衡、加样、洗脱等步骤沉淀法，沉淀法是历史最悠久的别离纯化方法，目前仍在工业上发挥着重大的作用。氨基酸工业中常用沉淀法有等电点沉淀法，特殊试剂沉淀法和有机溶剂沉淀法。沉淀法原理是根据某些氨基酸可以与某些有机或者无机化合物结合而形成沉淀，可以利用这种性质向溶液中参加特定的沉淀剂，使目标氨基酸沉淀，与其他氨基酸别离
