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1、观察细胞骨架试验汇报 篇一：洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察试验汇报洋葱鳞片叶表皮细胞的细胞骨架观察试验汇报吴若自然科学大类 16307110316 单周四 119 2021/11/17一、试验目标:1. 掌握用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法。2. 认识细胞骨架的形态，联络细胞骨架的功效。二、试验原理：细胞骨架是指真核细胞中的蛋白纤维网架体系。广义的细胞骨架包含细胞核骨架、细胞质骨架、细胞膜骨架和细胞外基质。依据蛋白质纤维的直径、组成成份和组装结构的不一样可分为微丝、微管和中间纤维。细胞骨架对于维持细胞的形态结构及细胞运动、物质运输、能量转换、信号传导和细胞分裂等有主要的作用。本试验采
2、取去垢剂TritonX-100 的缓冲液处理植物材料时，可将细胞的膜结构和大部分蛋白质抽提掉，但细胞骨架系统的蛋白却被保留下来，后者用考马斯亮蓝R250 染色，在光学显微镜下可见一个网状结构。三、操作步骤：1. 取洋葱内皮表层膜1cm2(可多取两片)左右置于含2mlPBS液的小皿中湿润5min后，吸去PBS2. 向小皿中加入1.5mlTritonX-100(1%)，浸没20min后，吸走TritonX-1003. 向小皿中加入2mlMbuffer浸没置于摇床上5min，反复两次后，吸走Mbuffer4. 向小皿中加入105ml戊二醛（3%），浸没30min后，吸走戊二醛5. 向小皿中加入2ml
3、PBS，浸没置于摇床上5min，反复两次6. 取出表皮平铺于载玻片上，滴加100微升，静置100min后吸收染料7. 向表面滴加蒸馏水洗涤后用纸巾洗去液体，反复两次8. 盖上盖玻片，擦去残余液体，用光学显微镜观察并拍照统计四、试验结果：图所表示，洋葱内表皮细胞轮廓清楚可见，细胞壁及其分界显著可见。可观察到线性纤维交织而成的网状结构，同一细胞内各处骨架密集度不均匀，细胞核区域纤维较密集，蓝色较重。调整显微镜焦距可观察到细胞不一样横切面的网络结构的改变，表明细胞骨架以三维立体结构的形式分布在整个细胞内。五、思索题：1. 简述细胞质骨架的基础类型及结构特征 答：微管：中空的圆筒状结构，直径为18nm
4、25nm，组成微管的关键成份是微管蛋白。这种蛋白有两个亚基，即，亚基它们成螺旋形排列。进化高度保守。 微丝：由肌动蛋白组成的直径约为7nm的骨架纤维，单体形式的球形肌动蛋白聚合形成纤维形肌动蛋白，在微丝结合蛋白的辅助作用下形成微丝高级结构，行使功效。中间纤维：中空的骨状结构，直径介于微管微丝之间，含有显著的组织细胞特异性，基础结构为一个中央螺旋杆状区辅以两侧大小和化学组成不一样的端区。2. 本试验观察到的蓝色纤维关键是哪种细胞骨架？答：应为微丝和中间纤维。3. 考马斯亮蓝染色方法的优缺点。答：优点：反应相对快速，其结合物在室温下1h内保持稳定，试剂配置简单，操作简便。缺点：用于不一样蛋白质测定
5、时有较大的偏差，仍有部分物质干扰此法的测定。六、试验讨论：1. 观察和分析细胞骨架的意义？答：细胞骨架是细胞结构的主要组成部分，也是细胞行为和功效的主要调整系统，观察和分析细胞骨架的性质和改变将帮助我们更加好地认识和研究细胞性质、功效和机制。2. 考马斯亮蓝是一个理想的细胞骨架染料吗？本试验的优点和缺点是什么？答：不是，特异性荧光染料可能更加好。本试验优点是反应相对快速，其结合物在室温下1h内保持稳定，试剂配置简单，操作简便。缺点是无法直观分辨微管，微丝和中间纤维等。篇二：试验四 细胞骨架观察试验五 细胞骨架观察2021.04.20一、试验目标了解用光学显微镜观察植物细胞骨架的原理及方法，观察
6、光学显微镜下细胞骨架的网状结构。二、试验原理细胞骨架（cytoskeleton）是指细胞质中纵横交错的纤维网络结构，按组成成份和形态结构的不一样可分为微管（MT，2025nm）、微丝（MF，57nm）和中间纤维（IF，811nm）。它们对细胞形态的维持、细胞的生长、运动、分裂、分化和物质运输等起主要作用。光学显微镜下细胞骨架的观察多用1% Triton X100（聚乙二醇辛基苯基醚，是一个非离子型表面活性剂或称去污剂）处理细胞，可使细胞膜和细胞质中的蛋白质和全部脂质被溶解抽提掉，而细胞骨架系统的蛋白质不受破坏被保留，经戊二醛固定，考马斯亮兰R250（Coomassie brilliant bl
7、ue R250是一个蛋白质染料）染色后，用光学显微镜观察，能够见到一个网状结构，即是细胞骨架结构。微管不够稳定，其它类型纤维太细，无法分辨，只能观察到由微丝组成的微丝束（40nm）为网状结构。M缓冲液使细胞骨架中的微丝保持稳定，在M缓冲液中，其中咪唑是缓冲剂EGTA 和EDTA螯合 Ca离子，溶液并提供Mg离子，在低钙条件下，骨架纤维保持聚合状态而且较为舒张，便于观察。三、试验仪器、材料和试剂（一）仪器、用具： 光学显微镜，镊子，剪刀，试管，载玻片，盖玻片，培养皿，烧杯。（二）材料：新鲜洋葱鳞茎。（三）试剂：12考马斯亮蓝R250染色液：0.2g考马斯亮蓝R250粉加入甲醇46.5mL、冰醋酸
8、7mL、蒸馏水46.5mL。2磷酸缓冲液(pH 6.8)：0.2149g Na2HPO412H2O、0.0816g KH2PO4 加入100ml 蒸馏水。3M缓冲液(pH7.2)50mmolL咪唑，50mmol/L)氯化钾、0.5mmolL氯化镁、1mmol/L 乙二醇(a-氨基乙基)醚四乙酸、0.1mmol/L乙二胺四乙酸； 1mmolL巯基乙醇，调至pH 7.2。41%Trion X-100(聚乙二醇辛基苯基醚)：0.5ml 100TritonX-100加入M缓冲液49.5ml。53%戊二醛：6mL25戊二醛加入磷酸缓冲液44mL。四、试验方法和步骤1用镊子撕取洋葱鳞叶内侧的表皮若干片 约
9、1cm2大小若干片)，置于50mL烧杯中，加 入pH6.8磷酸缓冲液，使其下沉；2吸去磷酸缓冲液，用1Triton X100 处理20min。3吸去Triton X100，用M缓冲液洗3 次，每次5min。4用3戊二醛固定30min。5磷酸缓冲液(pH 6.8)洗3次，每次5min。60.2%考马斯亮蓝R250染色10min。7蒸馏水洗2次，然后将样品置于载玻片上,加盖玻片，于一般光学显微镜下观察。8假如染色效果好，则可依次用50乙醇、70%乙醇，95乙醇、正丁醇、二甲苯处理样品，各5min，然后将样品平展于载玻片上，加 一滴中性树胶，盖上盖玻片封片，制成永久切片。五、结果光学显微镜下洋葱内表
10、皮细胞的轮廓清楚可见（图），细胞壁及其分界显著。1010倍镜下可粗略观察到细胞内粗细不等的蓝色纤维、团块形成的网状结构。同一细胞内各处骨架的密集度不均匀，细胞核区域的纤维相对密集，蓝色浓重，甚至分辨不出网络结构，另外可见细胞壁区域有零星蓝色纤维分布；相邻细胞的密集程度基础一致，但有少数细胞有较大不一样。1040倍镜下可清楚观察到蓝色的网状结构确实由线性纤维交织成，纤维间的结合点稍膨大。细胞边缘骨架较稀疏，但可见由和胞壁相同走向的纤维形成的细胞质膜的轮廓，和细胞内部的纤维经过纵向的纤维相连。相邻细胞有纤维穿过胞间的细胞壁。调整显微镜焦距可观察到细胞不一样横切面的网络结构的改变，表明细胞骨架以三维
11、立体结构的形式分布在整个细胞内。篇三：细胞生物学试验汇报试验一：细胞的形态观察及其大小测量一、试验目标：1、经过对原核和真核多种形态细胞的光学显微镜观察，了解细胞的形态及其显微结构；2、学习显微测量的方法，对细胞的大小有一直观认识。二、试验材料和仪器：小白鼠肝细胞切片；鸡血红细胞；蚕豆叶片横切片；一般光学显微镜；目镜测微尺；镜台测微尺；载玻片；盖玻片。三、试验步骤：(一)细胞形态观察l、动物细胞的观察（1）人肝细胞切片：在显微镜下仔细观察肝细胞的形态结构。（2）鸡血细胞涂片的观察：观察血细胞的组成；红细胞、白细胞、血小板的形态特点。2、植物细胞的观察（1）取蚕豆叶片横切片的观察：注意表皮细胞和
12、叶肉细胞的基础结构。（二）细胞的大小和测量1、卸下目镜的上透镜，将目镜测微尺刻度向下装在目镜的焦平面上，再旋上目镜的上透镜。2、将镜台测微尺刻度向上放在镜台上夹好，使测微尺分度在视野中央。调焦至能看清镜台测微尺的分度。3、小心移动镜台测微尺和转动目镜测微尺(如目镜测微尺分度模糊，可转动目镜上透镜进行调焦)，使两尺左边的一直线重合，然后由左向右找出两尺另一次重合的直线。4、统计两条重合线间目镜测微尺和镜台测微尺的格数。按下式计算目镜测微尺每格等于多少m：镜台测微尺的格数目镜测微尺每格的微米数= 10目镜测微尺的格数四、试验结果：1、目镜校正：40倍显微镜目镜测微尺每格的微米数=17/70=0.2
13、42、细胞大小的测量：五、作业和思索：1、血细胞按含量高低，关键含有：红细胞，白细胞，血小板。白细胞最大，红细胞次之，血小板最小。红细胞：关键的功效是运输氧。 白细胞：关键饰演了免疫的角色，当病菌侵入人体时，白细胞能穿过毛细血管壁，集中到病菌入侵部位，将病菌包围，吞噬。血小板：止血过程中起着主要作用。细胞形态见下图。2、植物细胞通常比动物细胞大部分。形态图见下。3、在不一样放大倍数下，测定的细胞大小基础一致，但有部分偏差。放大倍数越大，在视野中相同实际距离下的两点视野距离更大，而更轻易测量正确。试验二：PAS（Periodic Acid Schiff）反应显示糖原和其它多糖物质一、试验目标1、
14、熟悉PAS法原理及操作步骤；2、观察PAS反应的染色结果，并观察多糖在组织细胞中的分布。二、试验原理多糖是由多个单糖分子缩合脱水而生成的化合物。部分不溶性的多糖组成植物和动物的骨架，如植物的纤维素和动物的甲壳素，通常称为结构多糖。另部分多糖在生物体内作为能量贮存，如淀粉（植物）和糖元（动物），在需要时能够经过生物体内酶系统的作用分解，释放出单糖。三、试验用具：过碘酸酒精溶液、Schiff试剂、亚硫酸水溶液、苏木精溶液、二甲苯、100%乙醇+二甲苯（1：1）。梯度乙醇溶液：100，95，90，80，70，50各两份，一份用于脱腊复水，一份用于脱水。载玻片 、盖玻片、染色缸、显微镜 、小烧杯、胶头滴管、镊子、刀片、土豆；小鼠肝细胞石蜡切片。四、试验步骤:（一）土豆切片的观察制作土豆徒手切片过碘酸处理1530min70%乙醇1min schiff 试剂15min 亚硫酸水漂洗23次 蒸馏水漂洗 镜检（二）小鼠肝细胞切片的观察取鼠肝石蜡切片 二甲苯脱蜡约 10min 二甲苯+100%乙醇（3 min）梯度乙醇脱二甲苯，在各浓度乙醇（100，95，90，80，70，50）中约 23 min 过碘酸 氧化 1530 min 蒸馏水漂洗 Schiff 试剂 1530 min 亚硫酸水漂洗 23 次 蒸馏水漂洗 苏木精染色 10 min 流水
