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1、酸序列，推测相应的核苷酸序列，并获取基因。经表达的蛋白质，要对其进行生物功能鉴定。答案(1)氨基酸序上述专利摘要，本发明中所用的人胰岛素基因是采用的方法获得，获得的目的基因与人体细胞中胰岛素基因的碱基绿体DNA与原核生物DNA结构类似。(4)分离定律适应于有性生殖过程中细胞核遗传，故叶绿体转基因不遵的大肠杆菌在含有IPTG和Xgal的培养基上会形成蓝色菌落，重组菌中LacZ基因被SHH基因插入后实用文案单元十 现代生物科技专题课时考点 40 基因工程的工具与操作程序三年高考真题演练1. 某一质粒载体如图所示，外源 DNA插入到 Ampr或 Tetr 中会导致相应的基因失活( Ampr表示氨苄青
2、霉 素抗性基因， Tetr 表示四环素抗性基因) 。有人将此质粒载体用 BamH酶切后，与用 BamH酶切获得的 目的基因混合，加入 DNA连接酶进行连接反应，用得到的混合物直接转化大肠杆菌，结果大肠杆菌有的 未被转化，有的被转化。被转化的大肠杆菌有三种，分别是含有环状目的基因、含有质粒载体、含有插 入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌。回答下列问题：(1) 质粒载体作为基因工程的工具，应具备的基本条件有_( 答出两点即可) ，而作为基因表达 载体， 除满足上述基本条件外， 还需具有启动子和终止子。(2) 如果用含有氨苄青霉素的培养基进行筛选，在上述四种大肠杆菌细胞中，未被转化的和仅含环状 目的基
3、因的细胞是不能区分的， 其原因是_；并且_和_的细胞也是不能区分的， 其原因是_。在上述筛选的基础上，若要筛选含有插入了目的基因的重组质粒的大肠杆菌的单菌落，还需使用含 有_的固体培养基。(3) 基 因工 程 中 ，某些 噬 菌 体 经 改 造 后 可 以作 为 载 体 ，其 DNA 复制 所 需 的 原 料来 自 于 _。2. 植物甲具有极强的耐旱性， 其耐旱性与某个基因有关。若从该植物中获得该耐旱基因， 并将其转移到 耐旱性低的植物乙中，有可能提高后者的耐旱性。回答下列问题：(1) 理论上，基因组文库含有生物的_基因；而 cDNA文库中含有生物的_基因。(2) 若要从植物甲中获得耐旱基因，
4、 可首先建立该植物的基因组文库，再从中_出所需的耐旱 基因。(3) 将耐旱基因导入农杆菌， 并通过农杆菌转化法将其导入植物_的体细胞中， 经过一系列的 过程得到再生植株。要确认该耐旱基因是否在再生植株中正确表达，应检测此再生植株中该基因的 _，如果检测结果呈阳性， 再在田间试验中检测植株的_是否得到提高。(4) 假如用得到的二倍体转基因耐旱植株自交，子代中耐旱与不耐旱植株的数量比为 3 1 时， 则可 推测该耐旱基因整合到了_( 填“同源染色体的一条上”或 “同源染色体的两条上”) 。3. 在应用农杆菌侵染植物叶片获得转基因植株的常规实验步骤中， 不需要的是( )A.用携带目的基因的农杆菌侵染
5、植物细胞B.用选择培养基筛选导入目的基因的细胞C.用聚乙二醇诱导转基因细胞的原生质体融台D.用适当比例的生长素和细胞分裂素诱导愈伤组织生芽4. 下列有关人胰岛素基因表达载体的叙述，正确的是( )A.表达载体中的胰岛素基因可通过人肝细胞 mRNA反转录获得B.表达载体的复制和胰岛素基因的表达均启动于复制原( 起) 点标准文档重组Ti质粒导入农杆菌时，可以用处理农杆菌，使重组Ti质粒易于导入。(3)将含有重组Ti质粒的农杆菌交选用的是二倍体甘蓝体细胞与其配子细胞，所以融合后符合育种条件的植物细胞中有3个染色体组。(3)用于入血清、血浆等。植物组织培养所用培养基为固体培养基，不需要加入血清、血浆等，
6、但需加入植物激素，A项正是性状。为获得产奶量高且适宜本地生长的母牛，根据现有类型，最佳杂交组合是，后代中出现这种母牛的概率是实用文案C.借助抗生素抗性基因可将含胰岛素基因的受体细胞筛选出来D.启动子和终止密码子均在胰岛素基因的转录中起作用5. 下列关于基因工程技术的叙述，正确的是( )A.切割质粒的限制性核酸内切酶均特异性地识别 6 个核苷酸序列 B.PCR 反应中温度的周期性改变是为了 DNA聚合酶催化不同的反应C.载体质粒通常采用抗生素合成基因作为筛选标记基因D.抗虫基因即使成功地插入到植物细胞染色体上也未必能正常表达6. 人血清白蛋白(HSA)具有重要的医用价值， 只能从血浆中制备。 下
7、图是以基因工程技术获取重组 HSA(rHSA)的两条途径。(1) 为获取 HSA基因， 首先需采集人的血液，提取_合成总 cDNA， 然后以 cDNA为模板，采用 PCR技术扩增 HSA基因。下图中箭头表示一条引物结合模板的位置及扩增方向，请用箭头在方框内标出另 一条引物的位置及扩增方向。(2) 启动子通常具有物种及组织特异性， 构建在水稻胚乳细胞内特异表达 rHSA的载体， 需要选择的 启动子是_( 填写字母，单选) 。标准文档A.人血细胞启动子C.大肠杆菌启动子B.水稻胚乳细胞启动子D.农杆菌启动子(3) 利 用 农 杆 菌 转 化 水 稻 受 体 细 胞 的 过 程 中 ， 需 添 加
8、酚 类 物 质 ， 其 目 的 是 _。(4) 人体合成的初始 HSA多肽，需要经过膜系统加工形成正确的空间结构才能有活性。与途径相比， 选择途径获取 rHSA的优势是_。(5) 为证明 rHSA具有医用价值， 须确认 rHSA与_的生物学功能一致。7. 下表是几种限制酶识别序列及其切割位点，图 1、图 2 中标注了相关限制酶的酶切位点，其中切割位 点相同的酶不重复标注。请回答下列问题：(1) 用图中质粒和目的基因构建重组质粒，应选用_两种限制酶切割，酶切后的载体和目的基 因片段，通过_酶作用后获得重组质粒。为了扩增重组质粒， 需将其转入处于_态的大肠后者的作用是维持培养液(基)的pH值。(3
9、)在构建基因表达载体(重组载体)时必须使用限制性核酸内切酶度低，全能性易表达；据题干可知PLBs类似于愈伤组织，外植体形成愈伤组织所经过的过程为脱分化；(2)(3)生产药物时可用微生物做受体细胞，则应采用Ca2处理，使受体细胞处于感受态(或容易吸收周围D基因工程中的构建基因表达载体，人酪蛋白基因即为目的基因，目的基因可从基因文库中获取，基因文库包括实用文案杆菌。(2) 为了筛选出转入了重组质粒的大肠杆菌，应在筛选平板培养基中添加_，平板上长出的菌 落，常用 PCR鉴定，所用的引物组成为图 2 中_。(3) 若 BamH酶切的 DNA末端与 Bcl 酶切的 DNA末端连接，连接部位的 6 个碱基
10、对序列为_， 对于该部位，这两种酶_( 填“都能”、 “都不能”或“只有一种能”) 切开。(4) 若用 Sau3A切图 1 质粒最多可能获得_种大小不同的 DNA片段。8. GDNF 是一种神经营养因子，对损伤的神经细胞具有营养和保护作用。研究人员构建了含 GDNF基因的 表达载体( 如图 1 所示) ，并导入到大鼠神经干细胞中，用于干细胞基因治疗的研究。请回答：(1) 在分离和培养大鼠神经干细胞的过程中， 使用胰蛋白酶的目的是_。(2) 构建含 GDNF基因的表达载体时，需选择图 1 中的_限制酶进行酶切。(3) 经酶切后的载体和 GDNF基因进行连接，连接产物经筛选得到的载体主要有 3 种
11、： 单个载体自连、GDNF基因与载体正向连接、 GDNF基因与载体反向连接( 如图 1 所示) 。为鉴定这 3 种连接方式，选择 Hpa 酶和 BamH 酶对筛选得到的载体进行双酶切， 并对酶切后的 DNA片段进行电泳分析，结果如图 2 所示。图中第_泳道显示所鉴定的载体是正向连接的。(4) 将正向连接的表达载体导入神经干细胞后，为了检测 GDNF基因是否成功表达，可用相应的 _与提取的蛋白质杂交。当培养的神经干细胞达到一定密度时，需进行_培养以得到更多 数量的细胞，用于神经干细胞移植治疗实验。9. 嗜热土壤芽孢杆菌产生的 葡萄糖苷酶(BglB) 是一种耐热纤维素酶， 为使其在工业生产中更好地
12、应 用，开展了以下试验： . 利用大肠杆菌表达 BglB 酶(1)PCR 扩增 bglB 基因时，选用_基因组 DNA作模板。(2) 下图为质粒限制酶酶切图谱。bglB 基因不含图中限制酶识别序列。为使 PCR扩增的 bglB 基因重 组进入该质粒， 扩增的bglB 基因两端需分别引入_和_不同限制酶的识别序列。注：图中限制酶的识别序列及切割形成的黏性末端均不相同。标准文档养层细胞，提取DNA为模板；然后用位于Y染色体上的性别决定基因(即SRY基因)的一段核苷酸序列作引物以内的细胞，目的是保持细胞正常的。2n（1）受精卵是胚胎发育的开端，图中的卵细胞达到时期，才具备受精分被充分吸收利用，因此利
13、用了物质循环再生的生态工程原理。答案(1)呼吸作用ATP(2)黑麦草叶绿素含此方法的受体细胞多是。（3）重组DNA导入受体细胞后，筛选含有基因表达载体受体细胞的依据是。（4）胚实用文案(3) 大肠杆菌不能降解纤维素，但转入上述建构好的表达载体后则获得了降解纤维素的能力，这是因 为_。两年模拟试题精练1. 叶绿体转基因技术是将外源基因整合到叶绿体基因组中，该技术能有效改良植物的品质。请回答：(1) 转基因技术的核心步骤是_，完成该步骤所需要的酶有_。(2) 将植物体细胞处理得到原生质体，再通过_或_法，将目的基因导入原生质体，使 原生质体再生出细胞壁之后，通过_技术培养可得到相应的转基因幼苗。(
14、3) 来自原核生物中有重要价值的外源基因，无需改造和修饰就可在叶绿体中高效表达，就此分析， 原因是_。(4) 对大多数高等植物而言 ，与传统的细胞核转基因相比，叶绿体转基因更稳定 ，其遗传方式 _( 答 “遵循”或“不遵循”) 分离定律，不会随_( “花粉”或 “卵细胞”) 传给后代，从 而保持了_( “父本”或 “母本”) 的遗传特性。2. 下图 1 显示了某 DNA片段的部分碱基序列和长度(bp 表示碱基对) 以及其中含有的目的基因 D。 图 2 表 示一种质粒的结构和部分碱基序列。现有 Msp、 BamH、 Mbo 、Sma 共 4 种限制性核酸内切酶， 它们 识别的碱基序列和酶切位点分别为
