N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量的测定方法

QB/T XXXXXXXXX9附录A（规范性）N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量的测定方法A.1 紫外检测器法（仲裁法）A.1.1 试剂和溶液a）乙腈：色谱纯。b）N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品（纯度98%）。c）超纯水。d）磷酸缓冲液：称取3.5 g磷酸氢二钾溶于900 mL水中，加0.25 mL氨水，用磷酸调pH至7.5，并定容至1000 mL。e）稀释液：乙腈:水=50:50。A.1.2 仪器与设备a）高效液相色谱仪，紫外检测器。b）分析天平。c）超声波发生器。d）过滤器。A.1.3 分析步骤A.1.3.1 溶液制备标准储备液：精确称取 N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品 0.1 g(精确至 0.0001 g)，置于 100 mL 容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀，经 0.22 m 滤膜过滤，25静置 4 h，待用。供试品液：精确称取烘干的 N-乙酰-D-氨基葡萄糖试样 0.1 g（精确至 0.0001g)于 100 mL 容量瓶中，用稀释液溶解并定容至刻度，摇匀，经 0.22 m 滤膜过滤，25静置 4 h，待用。A.1.3.2 参考色谱条件如下：a）色谱柱：氨基柱（4.6 mm150 mm，3 m），或等效色谱柱；b）流动相：乙腈：磷酸缓冲液（75:25，V/V），混合后超声10min；c）流速：1.5 mL/min；d）检测波长：195 nme）进样量：10 L；f）测定温度：35。A.1.3.3 测定分别吸取标准储备液和供试品液，在上述参考色谱条件下测定。A.1.3.4 计算试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖的含量按式（A.1）计算：=100%（A.1）式中：w试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖的含量，单位为（%）；Ai试样溶液的峰面积；QB/T XXXXXXXXX10As标准溶液的峰面积；Cs标准溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）；Ci样品溶液的浓度，单位为毫克每毫升（mg/mL）。A.1.3.5 精密度计算结果保留两位小数。试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，两次平行测定结果的绝对差值不应大于算术平均值的 10%。A.2 蒸发光散射检测器法A.2.1 试剂和溶液a）乙腈：色谱纯。b）N-乙酰-D-氨基葡萄糖标准品（纯度98%）。c）超纯水。A.2.2 仪器和设备a）高效液相色谱仪，蒸发光散射检测器。b）分析天平。c）超声波发生器。A.2.3 分析步骤A.2.3.1 溶液制备标准储备液：精确称取 N-乙酰-D-氨基葡萄糖对照品 0.1 g(精确至 0.0001 g)，置于 100 mL 容量瓶中，加超纯水适量，超声溶解并定容至刻度，摇匀，待用。供试品液：精确称取烘干的供试品 0.1 g(精确至 0.0001g)，置于 100 mL 容量瓶中，加超纯水适量，超声溶解并定容至刻度，摇匀，待用。A.2.3.2 参考色谱条件如下：a）色谱柱：氨基柱（4.6 mm250 mm，5 m），或等效色谱柱；b）流动相：乙腈：水（80：20，V/V）；c）气体流速：1.2 L/min；d）流速：0.8 mL/min；e）进样量：10 L；A）测定温度：25。A.2.3.3 测定分别吸取标准储备液和供试品液，注入液相色谱仪测定，记录N-乙酰-D-氨基葡萄糖的面积。以进样量的对数值ln(m)为横坐标，峰面积的对数ln(A)为纵坐标，以外标两点法对数方程计算供试品中目标物的质量。A.2.3.4 计算试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量按式（A.2）计算：=100%（A.2）式中：w试样中N-乙酰-D-氨基葡萄糖含量的含量，单位为（%）；m根据外标两点法对数方程计算出的注入色谱仪的目标物的质量，单位为（g）；试样溶液中氨基葡萄糖盐酸盐的浓度，单位为微克每毫升（g/L）；V试样溶液的进样体积，单位为毫升（L）。A.2.3.4 精密度计算结果保留两位小数。QB/T XXXXXXXXX11试验结果以平行测定结果的算术平均值为准，两次平行测定结果的绝对差值不应大于算术平均值的10%。_