医院检验中心脑脊液检验操作规程（1）标本处理1．标本送验必须及时，收到标本后应立即检验久置可致细胞破坏，影响细胞计数及分类检查；葡萄糖分解使含量降低；病原菌破坏或溶解2．细胞计数管应避免标本凝固，遇高蛋白标本时，可用EDTA盐抗凝2）一般性状检查主要观察颜色与透明度，可记录为水样透明、白雾状浑浊、微黄浑浊、绿黄浑浊、灰白浑浊等脓性标本应立即直接涂片进行革兰染色检查细菌，并应及时接种培养基1）红色：如标本为血性，为区别蛛网膜下腔出血或穿刺性损伤，应注意：(1)将血性脑脊液试管离心沉淀(1500r／min)，如上层液体呈黄色，隐血试验阳性，多为蛛网膜下腔出血，且出血的时间已超过4h如上层液体澄清无色，红细胞均沉管底，多为穿刺损伤或因病变所致的新鲜出血2)红细胞皱缩，不仅见于陈旧性出血，在穿刺外伤引起出血时也可见到因脑脊液渗透压较血浆高所致2）黄色：除陈旧性出血外，在脑脊髓肿瘤所致脑脊液滞留时，也可呈黄色黄疸患者的脑脊液也可呈黄色但前者呈黄色透明的胶冻状3）米汤样：由于白(脓)细胞增多，可见于各种化脓性细菌引起的脑膜炎4）绿色：可见于绿脓杆菌、肺炎链球菌、甲型链球菌引起的脑膜炎5）褐或黑色：见于侵犯脑膜的中枢神经系统黑色素肉瘤。
3）潘氏(Pandy)球蛋白定性试验[原理]脑脊液中球蛋白与苯酚结合，可形成不溶性蛋白盐而下沉，产生白色浑浊或沉淀[试剂]5％苯酚溶液：取纯苯酚25m1，加蒸馏水至500m1，用力振摇，置37℃温箱内1—2天，待完全溶解后，置棕色瓶内保存[操作]取试剂2—3m1，置于小试管内，用毛细滴管滴入脑脊液l一2滴，衬以黑背景，立即观察结果[结果判断]阴性：清晰透明，不显雾状极弱阳性(土)：微呈白雾状，在黑色背景下，才能看到弱阳性(十)：灰白色云雾状阳性(2十)：白色浑浊强阳性(3十)：白色浓絮状沉淀最强阳性(4十)：白色凝块[临床意义]正常时多为阴性有脑组织和脑膜疾患时常呈阳性反应，如化脓性脑膜炎、结核性脑膜炎、梅毒性中枢神经系统疾病、脊髓灰白质炎、流行性脑炎等脑出血时多呈强阳性反应，如外伤性血液混入脑脊液中，亦可呈阳性反应4）细胞计数1）细胞总数[器材及试剂]1．细胞计数板；2．红细胞稀释液(配法同血液红细胞稀释液)[操作]1．对澄清的脑脊液可混匀后用滴管直接滴入计数池，计数10个大方格内红、白细胞数，其总和即为每μl的细胞数再换算成每升脑脊液中的细胞数如细胞较多，可计数一大格内的细胞×10，即得每μl脑脊液中细胞总数。
如用升表示，则再乘以102．浑浊或带血的脑脊液可用血红蛋白吸管吸取混匀的脑脊液20μl，加入含红细胞稀释液0．38m1的小试管内，混匀后滴入计数池内，用低倍镜计数4个大方格中的细胞总数，乘以50，即为每μl脑脊液的细胞总数2）白细胞数1．非血性标本：小试管内放入冰乙酸1—2滴，转动试管，使内壁沾有冰乙酸后倾去之，然后滴加混匀的脑脊液3—4滴，数分钟后，混匀充入计数池，按细胞总数操作中的红、白细胞计数法计数2．血性标本：将混匀的脑脊液用1％冰乙酸溶液稀释后进行计数为剔除因出血而来的白细胞数，用下式进行校正每μl脑脊液内白细胞校正数＝每μl脑脊液内白细胞未校正数每μl脑脊液内内红细胞数×每μl血液内白细胞-──────────────────────每μl血液内红细胞[参考值]正常人脑脊液中无红细胞，仅有少量白细胞成人：(0—8)×106/L儿童：(0一15)×106/L多为淋巴细胞及大单核细胞，两者之比约为7：3，偶见内皮细胞[附注]1．计数应及时进行，以免脑脊液凝固，使结果不准确2．细胞计数时，应注意新型隐球菌与白细胞的区别前者不溶于乙酸，加优质墨汁后可见不着色的荚膜3．计数池用后，应用75％乙醇消毒60min。
忌用苯酚消毒，因有损计数池的刻度3）细胞分类<1>．直接分类法：白细胞计数后，将低倍镜换为高倍镜，直接在高倍镜下根据细胞核的形态分别计数单个核细胞(包括淋巴细胞及单核细胞)和多核细胞，应数100个白细胞，并以百分率表示若白细胞少于100个，应直接写出单核、多核细胞的具体数字<2>．染色分类法：如直接分类不易区分细胞时，可将脑脊液离心沉淀，取沉淀物2滴，加正常血清l滴，推片制成均匀薄膜，置室温或37℃温箱内待干，进行瑞氏染色后用油镜分类如见有不能分类的细胞，应另行描述报告，如脑膜白血病或肿瘤时4)、临床意义1．中枢神经系统病变的脑脊液，细胞数可增多，其增多的程度及细胞的种类与病变的性质有关2．中枢神经系统病毒感染、结核性或霉菌性脑膜炎时，细胞数可中度增加，常以淋巴细胞为主3．细菌感染时(化脓性脑膜炎)，细胞数显著增加，以中性粒细胞为主4．脑寄生虫病时，可见较多的嗜酸性粒细胞5．脑室或蛛网膜下腔出血时，脑脊液内可见多数红细胞5)细菌直接涂片检查临床怀疑流行性脑脊髓膜炎或化脓性脑脊髓膜炎时，应作细菌学涂片检查操作如下：1．将脑脊液立即离心沉淀，取沉淀物涂片2张2．涂片应在室温中，或置37℃温箱中干燥，切勿以火焰烘烤。
3．经火焰固定后，一张涂片用亚甲蓝染色30s，另一张作革兰染色4．注意细胞内外的细菌形态，报告时应予以描述6)真菌检查-新形隐球菌检查[操作]1．取脑脊液，以2000r／min离心10min，以沉淀物作涂片，加阿利新兰染液l滴，混合，加盖玻片检查2．先用低倍镜检查，如发现有新形隐球菌，内部结构清晰，用高倍镜仔细观察结构，新形隐球菌直径5—20μm，可见明显的厚膜，并有出芽的球形孢子[报告方式]涂片找到“隐球菌属”。