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1、抗生素类药物的分析-第一页，共六十九页。一、化学结构与性质一、化学结构与性质链霉胍链霉胍 + 链霉糖链霉糖 + N-甲基甲基-L-葡萄糖胺葡萄糖胺1.链霉素链霉素 第二页，共六十九页。2.巴龙霉素巴龙霉素 巴龙胺巴龙胺+巴龙二糖胺巴龙二糖胺巴龙胺巴龙胺(苷元苷元)巴龙二糖胺巴龙二糖胺(糖糖)第三页，共六十九页。3.庆大霉素庆大霉素 绛红糖胺绛红糖胺+ 2-脱氧链霉胺脱氧链霉胺 + 加洛糖胺加洛糖胺 庆大霉素庆大霉素C1 R=H R1、R2=CH3 庆大霉素庆大霉素C2 R=R2=H R1=CH3 庆大霉素庆大霉素C1a R、R1、R2=H 庆大霉素庆大霉素C2a R=CH3 R1= R2=H主
2、要成分主要成分第四页，共六十九页。奈替米星奈替米星（netilmicin）脱氧链霉胺脱氧链霉胺（氨基糖）（氨基糖）绛红糖胺绛红糖胺（氨基糖）（氨基糖）加洛糖胺加洛糖胺第五页，共六十九页。理化性质理化性质结构相似结构相似 理化性质相似理化性质相似1.溶解度与碱性溶解度与碱性碱性碱性: 碱性中心碱性中心链霉素链霉素 3 3个个庆大霉素庆大霉素 5 5个个多与硫酸成盐多与硫酸成盐溶解性溶解性:水溶性水溶性多羟基化合物多羟基化合物易溶于水，不溶于乙醇、氯仿。易溶于水，不溶于乙醇、氯仿。2个强碱性胍基（个强碱性胍基（PKa=11.5）1个甲胺基（个甲胺基（PKa=7.7）第六页，共六十九页。2.旋光性旋
3、光性结构中氨基糖的手性碳原子结构中氨基糖的手性碳原子.庆大霉素、巴龙霉素等均有旋光性。庆大霉素、巴龙霉素等均有旋光性。硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素50mg/ml水溶液水溶液第七页，共六十九页。结合较弱结合较弱结合较强结合较强3.苷的水解与稳定性苷的水解与稳定性第八页，共六十九页。链霉素链霉素 pH57.5时稳定时稳定过酸过碱则水解。过酸过碱则水解。庆大霉素、奈替米星庆大霉素、奈替米星对光、热空气均稳对光、热空气均稳定。定。 水溶液水溶液 pH212时稳定。时稳定。4. 紫外吸收紫外吸收庆大霉素、庆大霉素、奈替米星等奈替米星等无无UV吸收吸收第九页，共
4、六十九页。 (二二)鉴别试验鉴别试验1.茚三酮反应茚三酮反应 ChP：硫酸庆大霉素、硫酸核糖霉素：硫酸庆大霉素、硫酸核糖霉素氨基糖苷结构氨基糖苷结构 具有羟基胺类和具有羟基胺类和 氨基酸的性质氨基酸的性质+第十页，共六十九页。2. Molisch试验试验 五碳糖和六碳糖的特征反应五碳糖和六碳糖的特征反应五碳糖氨基糖苷化合物五碳糖氨基糖苷化合物六碳糖氨基糖苷化合物六碳糖氨基糖苷化合物H+浓浓H2SO4/HCl-萘酚萘酚/蒽酮蒽酮红紫色或蓝紫色红紫色或蓝紫色硫酸核糖霉素硫酸核糖霉素 0.1%蒽酮蒽酮/浓浓H2SO4蓝色蓝色蓝绿色蓝绿色第十一页，共六十九页。红紫红紫色色羟甲基糠醛羟甲基糠醛( (含六
5、碳糖结构氨基糖苷类含六碳糖结构氨基糖苷类酸性水解产物酸性水解产物) )蓝紫蓝紫色色第十二页，共六十九页。坂口反应坂口反应麦芽酚反应麦芽酚反应N-甲基葡萄甲基葡萄糖胺反应糖胺反应链霉素水解产物反应链霉素水解产物反应第十三页，共六十九页。N甲基葡萄糖胺反应甲基葡萄糖胺反应(ElsonMorgan反应反应)乙酰丙酮乙酰丙酮OH-吡咯衍生物吡咯衍生物对二甲氨基对二甲氨基苯甲醛苯甲醛H+樱桃红色樱桃红色 第十四页，共六十九页。(缩合缩合)第十五页，共六十九页。红色红色对二甲氨基苯甲醛对二甲氨基苯甲醛H+第十六页，共六十九页。例例 硫酸新霉素硫酸新霉素 Ch.P（2010） 【鉴别鉴别】（1）取本品约）取
6、本品约10mg，加水，加水1ml溶解溶解后，加盐酸溶液（后，加盐酸溶液（9100）2ml，在水浴中加热，在水浴中加热10分钟，加分钟，加8%氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液2ml与与2%乙酰丙酮乙酰丙酮水溶液水溶液1ml，置水浴中加热，置水浴中加热5分钟，冷却后，加对分钟，冷却后，加对二甲氨基苯甲醛试液二甲氨基苯甲醛试液1ml，即显樱桃红色。，即显樱桃红色。第十七页，共六十九页。麦芽酚反应麦芽酚反应链霉糖特有反应链霉糖特有反应分子重排分子重排六元环六元环脱脱N甲基葡萄糖胺甲基葡萄糖胺脱链霉胍脱链霉胍H+硫酸铁铵硫酸铁铵H+ Fe3+分子重排分子重排麦芽酚麦芽酚第十八页，共六十九页。第十九页，共六十九页
7、。坂口反应（坂口反应（SakaguchiSakaguchi反反应应）链霉胍特有反应链霉胍特有反应（或或-萘酚萘酚）加入尿素使颜色稳定加入尿素使颜色稳定可比色测定可比色测定硫酸链霉素硫酸链霉素0.5mg0.5mg，加水，加水4ml4ml溶解后，加氢氧化钠溶解后，加氢氧化钠试液试液2.5ml2.5ml与与0.10.1的的 8 8羟基喹林的乙醇溶液羟基喹林的乙醇溶液1ml1ml，放冷至约，放冷至约1515，加次溴酸钠试液，加次溴酸钠试液3 3滴，即显滴，即显橙红色。橙红色。第二十页，共六十九页。坂口反应坂口反应+OH-第二十一页，共六十九页。硫酸盐反应硫酸盐反应H+TLC法法 硫酸链霉素和硫酸庆大霉
8、素鉴别硫酸链霉素和硫酸庆大霉素鉴别色谱条件特点色谱条件特点：吸附剂吸附剂: 硅胶硅胶展开剂：氯仿展开剂：氯仿甲醇甲醇浓氨水浓氨水显色剂：茚三酮或碘蒸气显色剂：茚三酮或碘蒸气第二十二页，共六十九页。HPLC法鉴别法鉴别BP硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素据色谱图中庆大霉素据色谱图中庆大霉素C1、C2 、C1a、C2a的的保留时间鉴别。保留时间鉴别。光谱法鉴别光谱法鉴别1.IRChP鉴别妥布霉素鉴别妥布霉素 USP 鉴别硫酸庆大霉素。鉴别硫酸庆大霉素。2.UVBP硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 饱和结构饱和结构 240330nm无吸收无吸收第二十三页，共六十九页。例例 【鉴别鉴别】HPLC法法 Ch.P（201
9、0） 硫酸依替米星硫酸依替米星 硫酸卡那霉素硫酸卡那霉素 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 硫酸奈替米星硫酸奈替米星 硫酸阿米卡星硫酸阿米卡星 硫酸庆大霉素硫酸庆大霉素 硫酸西索米星硫酸西索米星 硫酸巴龙霉素硫酸巴龙霉素 妥布霉素妥布霉素第二十四页，共六十九页。三、特殊杂质检查及组分分析三、特殊杂质检查及组分分析（一）链霉素杂质（一）链霉素杂质链霉素链霉素B（甘露糖链霉素）活性低（甘露糖链霉素）活性低来源：来源： 反应中间体残留反应中间体残留 TLC（对照品法）（对照品法）BP（2000）甘露糖链霉素甘露糖链霉素D-甘露糖对照品甘露糖对照品D-甘露糖甘露糖水解水解TLC展开、显展开、显色，比较色，比较
10、( 3.0%)方法方法 ：HPLC法法 (ChP 2010)第二十五页，共六十九页。(二二)、硫酸奈替米星中的有关物质检查、硫酸奈替米星中的有关物质检查特殊杂质：西梭米星特殊杂质：西梭米星来源：合成原料残留来源：合成原料残留方法：方法： TLC对照品法与高低浓度对照法同对照品法与高低浓度对照法同时控制杂质限量时控制杂质限量(三三)、庆大霉素庆大霉素C组分的测定组分的测定C组分比例组分比例不一致不一致发酵菌种不同发酵菌种不同工艺差别工艺差别第二十六页，共六十九页。对微生物的活性无明显差异对微生物的活性无明显差异不同的不同的C组分组分毒副作用和耐药性不同毒副作用和耐药性不同ChP JPBP USP
11、规定控制各组分的规定控制各组分的相对百分含量相对百分含量方法：柱前衍生化方法：柱前衍生化离子对离子对HPLC法法庆大霉素无庆大霉素无UV吸收吸收Gentamycin-NH2+ OPA+HSCH2COOHmax = 330nm第二十七页，共六十九页。1-烷基硫代烷基硫代-2-烷基异吲哚衍生物烷基异吲哚衍生物max = 330nm第二十八页，共六十九页。HPLC条件条件色谱柱：色谱柱：ODS流动相：水流动相：水冰醋酸冰醋酸甲甲醇醇(25:5:70)配制的配制的0.02mol/L庚烷磺酸钠溶液庚烷磺酸钠溶液检测波长检测波长: 330nm计算计算: 峰面积归一化法峰面积归一化法规定规定 C1 2040
12、% C1a 1030% C2a + C2b+ C2 4060%第二十九页，共六十九页。庆大霉素庆大霉素C组分的测定实验条件的讨论组分的测定实验条件的讨论1、OPA的作用是什么？的作用是什么？2、冰醋酸的作用是什么？、冰醋酸的作用是什么？3、庚烷磺酸钠的作用是什么？、庚烷磺酸钠的作用是什么？第三十页，共六十九页。（四）硫酸盐测定（四）硫酸盐测定剩余滴定法剩余滴定法空白滴定空白滴定第三十一页，共六十九页。四、含量测定四、含量测定1.免疫分析法免疫分析法2.微生物检定法（各国药典普遍采用）微生物检定法（各国药典普遍采用）利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反利用抗生素在琼脂培养基内的扩散作用量反应平
13、行线原理的设计，比较标准品与供试品应平行线原理的设计，比较标准品与供试品两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以两者对接种的试验菌产生抑菌圈的大小，以测定供试品效价的一种方法。测定供试品效价的一种方法。第三十二页，共六十九页。3.HPLC法法优点优点: 高灵敏度、专属性高灵敏度、专属性 广泛应用于抗生素稳定性研究及体内分析广泛应用于抗生素稳定性研究及体内分析氨基糖苷类一般无吸收氨基糖苷类一般无吸收 柱前柱前( (后后) )衍生化衍生化【含量测定含量测定】 Ch.P规定方法规定方法 微生物检定法微生物检定法 盐酸大观霉素，硫酸新霉素，硫酸链霉素，盐酸大观霉素，硫酸新霉素，硫酸链霉素， 硫酸核糖霉素
14、，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸庆大霉素，硫酸核糖霉素，硫酸奈替米星，硫酸阿米卡星，硫酸庆大霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龙霉素，硫酸西索米星，硫酸巴龙霉素， 硫酸小诺霉素硫酸小诺霉素 HPLC 法法 硫酸依替米星，硫酸卡那霉素硫酸依替米星，硫酸卡那霉素 第三十三页，共六十九页。生物样品中氨基糖苷类分析的原则生物样品中氨基糖苷类分析的原则1、OPA、FMOC-Cl、FDNB柱前衍生化柱前衍生化反应反应重要意义：重要意义：2、样品预处理：、样品预处理：（1）离子对试剂）离子对试剂（2）固相萃取柱）固相萃取柱3、柱前衍生化反应是否完全需要考查、柱前衍生化反应是否完全需要考查第三十四页，共六十九页。第
15、四节第四节 四环素类抗生素四环素类抗生素结构上具有氢化骈四苯环，结构上具有氢化骈四苯环，统称为四环素族抗生素统称为四环素族抗生素一、基本结构与化学性质一、基本结构与化学性质化学结构化学结构: 四骈苯或萘骈萘的衍四骈苯或萘骈萘的衍生物。取代基不同而构成不同的生物。取代基不同而构成不同的四环素四环素.name R R R R四环素四环素 TC H OH CH3 H金霉素金霉素 CTC Cl OH CH3 H土霉素土霉素 OTC H OH CH3 OH脱氧土霉素脱氧土霉素 DOTC H H CH3 OH第三十五页，共六十九页。 多西环素多西环素 （DOTC）（doxycycline）（脱氧土霉素）（
16、脱氧土霉素）（强力霉素）（强力霉素）第三十六页，共六十九页。A环环B环环C环环D环环二甲氨基二甲氨基N(CH3)2酚酚羟羟基基酰酰胺基胺基CONH2酮酮基与基与烯烯醇基共醇基共轭轭双双键键系系统统酮酮基与基与烯烯醇基共醇基共轭轭双双键键系系统统第三十七页，共六十九页。结构特点与分析方法之间的关系结构特点与分析方法之间的关系1.共轭双键，刚性共轭双键，刚性结构：具有紫外吸结构：具有紫外吸收，可产生荧光，收，可产生荧光，可进行可进行鉴别和含量鉴别和含量测定测定。 2具有酚羟基、烯醇基：具有酚羟基、烯醇基：可发生三氯化铁反应、可发生三氯化铁反应、可与金属离子络合，用可与金属离子络合，用于于鉴别鉴别。 3.具有手性碳原子：具具有手性碳原子：具旋光性，用于旋光性，用于鉴别鉴别。 第三十八页，共六十九页。理化性质理化性质1.酸碱性与溶解度酸碱性与溶解度两性两性: 酚羟基、烯醇羟基酚羟基、烯醇羟基 弱酸性弱酸性 二甲胺基二甲胺基 弱碱性弱碱性1.与酸、碱均能成盐与酸、碱均能成盐2.强酸或强碱中溶解度强酸或强碱中溶解度3.游离组分在水中溶解度很小游离组分在水中溶解度很小溶解度溶解度:第三十九页，共六十
