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病毒中和试验测定法

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病毒中和试验测定法_第1页
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病毒中和试验测定法1 .固定病毒稀释血清法(a法)本法用于抗血清的中和价试验需先滴定病毒 毒价,试验时将其稀释成每一单位剂量含 200个TCI心,再将待检血清倍比稀释 加等量200个TCIQo/ml的病毒液,混匀后37 C1h,每一稀释度接种24孔细胞 培养板4孔,每孔5%C0®养箱培养一定时间后,记录出现 CPE孔数,以不出 现CPE>和接种数的比为中和比值按 Karber法计算中和价其公式如下:Log TCID50=L+d ()(TCID50用对数计算,L为病毒最低稀释度的对数 d为组距,即稀释系数,在 10倍系列稀释则为-1 , S为各组CPE与接种数比值之和)50%中和试验举例血清稀释稀释度对数1/10-11/201/401/801/1601/320廿接种剂量含病毒100TCID50 或100LD50 或 100EID50 或 100ID50中和比值4/44/44/44/42/40/4L=-1 , d=, S=4/4+4/4+4/4+4/4+2/4=代入Karber公式:LogND0= -1 —*该抗血清ND0(半数中和单位)为,即1/160, 则其中和价为160 ND50/ml ,可以简写成160。

2 .固定血清稀释病毒法(B法)本法用于测定抗血清的中和指数将病毒原液 10倍系列稀释,分列于2排无菌管,第一排加等量正常血清(对照组);第二排 加待检血清(中和组),混匀后,置37C1h,分别接种细胞板孔(或鸡胚、实验 动物)进行培养,记录 CPE(鸡胚、动物死亡数),计算TCID50 (或LD50),按下 式计算中和指数中和组TCID50 (或LD5中和指数=对照组TCID50 (或LD5查反对数,即得该待检血清的中和指数通常中和指数 >50者判为阳性,10-49 为可疑, <10 者为阴性例如:对照组滴度的 LD50=中和组滴度的 LD50=中和指数 =10 中和指数的对数 Log=Log100=一般来说,以10倍稀释进行滴度测定,Log10=1因此小于10 (1 则是有意义的 . 。

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