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1、牛乳蛋白质的牛乳蛋白质的 提取与鉴定提取与鉴定一、实验目的:一、实验目的:了解蛋白质的化学性质;掌握蛋白质的提取方法和鉴定理。二、实验原理:二、实验原理: 牛乳中含丰富的蛋白质(水分87.8%、脂肪3.5%、蛋白质3.1%、乳糖4.9%、灰分0.7%、能量29.kg/100kg),其中主要是酪蛋白。酪蛋白在牛乳中约占总蛋白量的5/6。 2 2、酪蛋白鉴定的原理、酪蛋白鉴定的原理酪蛋白中含有酪氨酸残基,酪氨酸残基的R基团为: 含酚羟基,可与米伦试剂反应先生成白色絮状沉淀,继续反应生成红色沉淀。 蛋白中还含有含硫氨基酸(胱氨酸、半胱氨酸和蛋氨酸),在碱性溶液中水解后可与醋酸铅反应生成黑色的铅盐 三
2、、操作步骤(一)酪蛋白的制备新鲜牛奶、醋酸纳缓冲液各5ml 40 分别加热至同样温度 上清液:保留做鉴定(烧杯)(三)边加边摇混匀 5min 沉淀 加4ml95%的乙醇 离心5分钟 上清液:弃去 沉淀:做鉴定3000r/min离心(二)酪蛋白的性质鉴定1、溶解度 取3支试管+ 0.1M NaOH、 0.2M HCl、 10%NaCl各2ml+少许酪蛋白振荡观察溶解快慢。2、米伦反应 1ml H2O 少许酪蛋白 观察 10滴米伦试剂。加热(三)乳清中可凝固性蛋白质鉴定: 将第一次离心所得的上清液徐徐加热,出现蛋白质沉淀(球蛋白、清蛋白)。 四、实验结果 五、讨论二、常用生化仪器使用 离心机 离心
3、技术(centrifugal technique):根据颗粒作匀速圆周 运动时受到一个外向的离心力的行为而发展起来 的一种分离技术。 离心技术应用很广,诸如分离出化学反应后的沉淀物,天然的生物大分子、无机物、有机物,在生物化学以及其它的生物学领域常用来收集细胞、细胞器及生物大分子物质。离心机种类按用途: 有分析用、制备用及分析-制备分; 按结构特点: 有管式、吊蓝式、转鼓式和碟式等; 按转速: 有为常速(低速)、高速和超速三种。实验室用普通低速离心机实验室普通离心机使用方法1.将离心机放在坚实而平整的工作台上;2.在适用的离心管中加入样品,必须对称配重,否则会损坏离心机;3.按离心机转头的离心管位置刻度所对应孔插入,放下离心机顶盖;4.检查确认调速钮处于最低速位置;5.打开电源开关,调速到需要的转速;6.选择工作时间,调“选时”钮到需要的位置。7.离心完成,离心机自然停止。 2、离心机使用注意事项 (1)严禁各种液体和杂物进入离心工作室,那样会损坏主机; (2)仪器电源线应有良好的接地,以免发生意外; (3)离心机工作时不要打开顶盖; (4)电压的高低以及不稳定现象直接影响本机的转速(但不会损坏电机)。对转速要求较高的使用场合,请使用稳压装置,使运转速度稳定。