.实验动物学设计大纲实验名称：C57 BL／6小鼠繁殖性能的观察与研究课题来源：自选设计班级：04级检验本科设计人员：XXX设计日期：2007年5月26日指导教师：XXXX医学院实验技术教研室2007年制一.实验设计的目的意义,实验设计的目的意义，国外研究现状，存在的问题，解决问题的思路目的与意义:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究从而提高其受孕率，到达最正确育种的目的国外研究现状：C57 BL／6小鼠是little于1921年采用遗传学原理，以毛色基因为标记育成的近交系小鼠C BL／6纯系小鼠性成熟早，36日龄雄性附睾精液中有运动的精子，雌鼠在37日龄即可动情排卵、受孕雌鼠在正常情况下，每隔4～5d为一个性周期，发情后2～3h即可排卵妊娠期为19～21d，哺育期为20～22d雌鼠产后还可出现一次动情期，即分娩后24h排卵，此时交配可受孕，俗称“血配〞，出现边哺育边妊娠的现象。
现有研究说明交配季节在各种有关生殖的实验非常重要,一般应在春秋二季节进展因小鼠怕热畏寒，而这季节温度比拟适宜，动物的受孕率较高假设在夏冬季实验，动物房室温应控制在(222)℃研究说明温度、光照、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大当温度低于10℃时，C BL／6纯系小鼠受孕率极低，胚胎获取常失败光照、温度、噪音、湿度、营养等因素对小鼠性周期影响很大当噪音高于80分贝时，小鼠烦躁不安，打架撕咬，几乎没有交配现象；当空气相对湿度低于30％时，小鼠脱毛现象严重，同时可使雌鼠受孕率降低，产仔数下降,为提高其产仔成活率现目前主要有两种方法：“预接触〞和“超数排卵〞预接触〞：在交配前2d，将1只雄鼠放入5cm5cm5em的封闭栅栏筐中，把筐放在装有8只雌鼠的鼠笼雌鼠和雄鼠这样生活2d，第3d晚放出雄鼠，雌雄交配超数排卵〞(superovulation)：用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进展，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.我们通常将裸鼠的裸基因〔nu〕导入C57 BL小鼠过杂交，互交，回交的方式来获得大批量的裸鼠。
但由于其繁殖能力低给实验动物的研究带来了极大的困难存在的问题：不能很好把握好小鼠性周期四个时期的特征及确认性周期的动情期,从而对实验结果的判断有一定的影响. 但其繁殖率较低，给实验动物的研究带来了困难解决问题的思路：通过产仔成活率来判断其繁殖性能,采用阴道涂片及阴道的检查的方法,判断其动情期,用来指导其动物交配观察其产仔成活的数量,应用统计学方法分析实验结果参考文献[1] 郝荣耀．实验动物学．：第二军医大学，1999．93[2] 管原七郎(原著)，志超等(译)．哺育动物发育工程实验方法．：大学1992．71～77．[3] 袁伯俊，王治乔．新药l临床前平安性评价与实践、：军事医学科学，1997．128 132[4] 文书，钟欣，邱立明．低湿度对实验小鼠繁殖的影响．赣南医学院学报，2003，3：358．[5] 敬方．动物实验方法学．：人民卫生，2001．174．Observation and Study on the Productive Capacity of C57 BL／6 MouseZHANG Jian ，WU Xian—jin ，Ma Lan ，HU Hao ，QUAN Qing-li。
1．Biotechnology Department，Huaihua University，Htmihua，418008，China)(2、Monzwlonal Antibody Technology Center ofYunnan University，Kunming，650091，China)Abstract：To improve the rate of fertilization， the productive capacity of C57 BL／6 mouse was studied and the resultsshowed that it was important to characterize the estms among sexual cycles．The quality of zygotes obtained by natural二、实验设计方案〔实验设计目标,拟解决的主要问题, 实验动物设计,实验专业设计，实验统计设计,实验方法设计，可行性分析,预期结果，实验设计工作时间安排〕〔一〕实验设计目标，拟解决的关键问题设计目标:通过对C57 BL／6小鼠的繁殖性能的研究,找出影响其受孕率上下的主要因素,从而用来指导其育种繁殖.提高产仔成活率.拟解决的关键问题:怎样把握好小鼠性周期的特征,准确确认性周期的动情期〔二〕实验设计1、实验动物设计〔遗传背景，微生物学质量，育种繁殖，饲养管理，动物模型，实验动物学技术〕1.1遗传背景:1921年Little用Abby Lathrop的小鼠株，近亲交配，育成数个近交系动物，以57号雌鼠与52号雄鼠交配为起源者标为c c ，中毛色固定为巧克力色者称为C BR；毛色固定为黑色者称为c BL，其亚系有C BL／6、C 7 BL／6J、C57 BL／6N等。
C57 BL／6对Graftfi白血球因子较敏感，肿瘤自发率较低约为60%，细胞免疫力随增龄较前降低，繁殖率较低1.2微生物学质量:清洁级(CLA)C57BL/6小鼠，雌雄各半1.3 C57 BL／6小鼠育种繁殖1.3.1繁殖方法:近交繁殖，1.3.2初始动物的选择：挑选一对或几对具有育种目标要求的性状的全同胞兄妹1.3.3性别鉴定：1、雄鼠的生殖器距肛门较远2、雄鼠生殖器与肛门之间长毛3、雄鼠的生殖器较雌鼠大4、雌鼠乳头较雄鼠明显1.3.4性成熟期: 35-55日龄；实配年龄：60日龄左右；成熟时体重：20克以上1.3.5发情鉴定:看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口开且呈枯燥状态，可确认为动情期雌鼠同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠1.3.6配种：动情前期交配 1.3.7交配形式:近亲繁殖〔全同胞兄妹交配〕1.3.8妊娠诊断：摸胎法、阴道涂片法、外形涂片法、直肠检查法1.3.9育种代数：作为亲本的全同胞兄妹〔初始动物〕记为0代，按雌雄1：1进展交配，所生后代记为第1代，从中又选留满意的一对或几对全同胞兄妹作亲本，按雌雄1：1进展交配，以此类推，直到20代以上1.3.10个体选择：选择留繁殖力强，生活力强,目标形状优良的个体1.3.11 保种方法：修饰平行线系统1.3.12 扩大繁殖生产方法：交通信号灯方法1.4 饲养管理: C57 BL／6小鼠的饲养应在开放系统的动物房进展,由于光照能刺激小鼠性激素的分泌,对雌鼠性周期有一定的影响作用,因而采用12h:12h明暗光照, 采用无毒塑料笼具，垫料选用具良好吸湿性、无毒性、无异味、尘埃少的材料如电刨花，一般所有的笼具、垫料、饲料、饮水等都得经过灭菌消毒,温度控制在20-25℃,保持鼠房空气相对湿度45%-60%,噪音<60dB,四季都应进展通风换气,饲养的时候需用专用小鼠饲料,可在粉状饲料中添加高脂牛奶,饲料中含4%-8%的粗脂肪时, C57 BL／6小鼠可获得较好的繁殖效果,此外它对维生素的要求也较高,适时在饲料中加些新鲜的胡萝卜片,可显著提高其受孕率.2、实验专业设计通过光照.温度.噪音.湿度.营养等因素对小鼠性周期的影响研究,采用自然交配法与超数排卵法,确定最正确的条件,提高其受孕率,增加产仔成活率.3、实验统计设计采用平均值(x)标准差(s),两两组间比拟用t 检验, 各组间比拟用方差分析，利用统计学软件进展结果分析。
4．实验动物方法设计：小鼠实验组〔自然交配〕对照组〔超数排卵法交配〕观察产仔数观察产仔数5．实验技术方法：5.1.C57 BL／6纯系小鼠的选择:选用性成熟未交配过的小鼠进展,雌性生育年龄60-70天,体重20-25克.雄鼠生育年龄为60-70天,体重20-30克.5.2. 确认小鼠性周期动情期：选择适龄雌雄小鼠，交配前查看雌鼠外阴和阴道口，当外阴充血肿胀、阴道口开且呈枯燥状态，可确认为动情期雌鼠同时可作阴道涂片观察，涂片上有大量角化上皮细胞和少量有核上皮细胞，细胞分散未成团成堆，即为动情期雌鼠观察阴道涂片的组织细胞学变化和阴道口的变化情况，可确定动情期的不同阶段5.3.动物交配与受孕动物的检查：将已确定为动情期的雌鼠分成实验组和对照 两组，实验组采用自然交配的方式按雌雄1：1比例晚8:o0点合笼，次日清晨做阴道涂片和阴栓的检查，对照组采用超数排卵法交配的方式，用孕马血清促性腺激素(PMSG)，结合人绒毛膜促性腺激素(HCG)进展，中午12：00点向雌鼠腹腔注射PMSG 10U，48h后再腹腔注射HCG10U，当天晚8o0点与雄鼠1：1合笼.阴道涂片检查：镜检发现精子，那么为阳性，记为孕期0．5d。
阴栓检查：检查雌鼠阴道有无阴栓，必要时用眼科镊子插入阴道，撑开阴道口，查看有无阴栓有阴栓者确定为受孕．记为孕期0．5d5.4.动物交配与妊娠的识别:小鼠交配后，在雌鼠阴道口形成一种白色阴栓，外形为“Y〞字形，外表有细横纹，“叉状〞段连接阴道深部小鼠阴栓一般在交配后12～24h自动脱落常把阴栓的有无作为判断是否交配的重要标志.识别小鼠是否妊娠，可通过观察C ，BL／6小鼠的动情周期是否消失，观察阴道粘膜的色泽、粘液性状、阴道口径变化情况等加以判断.5.5. 统计：约19-21天后产下幼仔观察并统计其数量〔三〕可行性分析：3．1此实验操作简便,实验指标易于观察.3．2 小鼠易获得,易饲养〔四〕预期效果:在适宜的实验环境下，实验组的小鼠的受孕率较高，产仔率也较高〔五〕实验设计工作时间安排： 实验工程工作时间安排实验小鼠的选择30min确认小鼠的动情周期20min小鼠交配与受孕检查12h小鼠的妊娠繁殖19-21d三、完成实验的条件1、仪器设备情况：棉签, 载玻片, 眼科镊子2、实验动物来源: C57 BL／6小鼠雌雄各200只,体重20-30克,年龄60-70天从大学华西医学中心购置，C57 BL／6小鼠25元/只。
3、药品试剂来源：生理盐水,甲苯胺蓝教研室评审意见1、 实验设计是否合理,可否到达预期目标2、 实验设计和技术路线安排是否恰当3、 实验条件是否具备实验技术教研室 年 月 日- 。