-传递窗验证案Validation protocol of the delivery windows 编号Code：.klcfilter.版本Version：编写Prepared by:日期Date:审核人日期 Reviewed by Data.klcfilter.批准Approved by:日期Date:变更记录Change Log版本号Version变更描叙Description变更细节Section changed批准日期Release Date目录Contents1简介22实施方案23验证小组成员24仪器及用具25菌株和培养基26安装确认27运行确认28性能确认29再验证210修改事项211相关SOP212附件21 简介传递窗是一种干净室的辅助设备，主要用于干净区与干净区之间，干净区与非干净区之间小件物品的传递，以减少干净室的开门次数，使干净室的污染降低到最低程度。
传递窗安装有紫外灯，物品经紫外线照射消毒后进入干净区紫外线是一种电磁辐射，波长190～350nm，其中以253.7nm的杀菌力最强，可使DNA链上相邻嘧啶碱基之间形成二聚体，抑制DNA的复制，导致突变或死亡紫外线的杀菌力与紫外线强度、照射时间、温度和湿度等因素有关本案包括该设备的安装确认、运行确认和性能确认等容在确认过程中出现任偏差，必须及时解决偏差之后再进展下一步确实认实施容时间安排安装确认运行确认性能确认2 实施方案3 验证小组成员部门XX职责QA负责验证案、验证报告的批准负责验证案、验证报告的审核QC负责验证案、验证报告的审核，指导和监视案的实施负责验证案、验证报告的起草，参加案的实施负责验证案、验证报告的审核，协助案的实施4 仪器及用具名称型号或规格校验单位校验编号有效期细菌培养箱GNP-9270型市计量所霉菌培养箱SHP-150型市计量所数显式温湿度计DWS508D市计量所紫外线强度测定仪TN-2254市计量所净化工作台HS-1300-V型——————电动混匀器G560E——————移液器0.5～10ul移液器100～1000ul5 菌株和培养基名称批号生产厂家营养琼脂培养基改进马丁琼脂培养基营养肉汤培养基改进马丁培养基金黄色葡萄球[CMCC〔B〕26003]枯草芽孢杆菌[CMCC〔B〕63501]大肠杆菌[CMCC〔B〕44102]白色念珠菌[CMCC〔F〕98001]6 安装确认由供给商技术人员作为主要安装人员，工程部人员协助安装。
安装过程中对装置及其工作状态进展检查假设确认过程中发现因为紫外灯管不符合要求而造成偏差，工程部人员负责紫外灯管的申购与更换将安装确认结果记录于附件1和附件2确认工程描叙工作环境确认传递窗应安装在非干净区〔培养室〕与干净区〔干净走廊〕之间非干净区温度应为18℃～27℃；相对湿度应为40%～80%电源确认设备的电源应正确连接，工作电源：AC 〔22022〕V装置确认确认紫外灯管功率紫外灯管应正常，无损坏，匹配，严密连接传递窗侧门垫圈应配套、密合、完好传递窗部与紫外灯管外表应清洁，外表无尘土传递窗外表材质应为不锈钢，平整光洁耐磨备件确认是否有一样型号规格的紫外灯管备用7 运行确认运行确认在安装确认之后进展，假设安装确认出现偏差，须在解决偏差之后进展通过对传递窗进展试运行，以证明设备各项技术参数和功能能到达本公司设定要求将运行确认结果记录于附件3和附件47.1 SOP确认：确认是否有传递窗使用的SOP，作为传递窗使用操作的技术支持与指导验证全过程必须格按照此SOP对传递窗进展操作7.2 设备操作功能确认：逐项确认各项操作功能，结果均应符合要求7.3 互锁确认:两侧门设有互锁装置，确保两侧门不能同时处于开启状态。
7.4 辐照强度测定：开启紫外灯5min后，用中心波长为253.7nm的紫外线强度测定仪在灯管下垂直中心操作面处测量其辐照度值〔uW/cm2〕普通型或低臭氧型直管紫外灯，新灯管的辐照度值应为：功率10W，≥65uW/cm2 ；功率15W，≥145 uW/cm2 使用中的灯管其辐照度值：功率10W，≥45uW/cm2 ；功率15W，≥100 uW/cm2 ，低于此值者应予以更换7.5 紫外强度分布：开启紫外灯5min后，在传递窗底部测量中央及四角5个位置的紫外线强度〔uW/cm2〕，确定紫外线强度最弱位置以紫外线强度最弱位置到达所需照射剂量的时间作为消毒合格时间干净区①②③④⑤ 5非干净区8 性能确认确认紫外灯对细菌及其芽孢和真菌的杀灭效果性能确认在运行确认之后进展，假设运行确认出现偏差，须在偏差解决之后进展8.1 培养基的制备8.1.1 营养琼脂培养基配：营养琼脂培养基粉 31.0g纯化水 1000ml 配制：称取营养琼脂培养基粉置适宜容器中，按配比例参加纯化水，水浴加热使溶解，调pH至7.10.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃15分钟。
8.1.2 改进马丁琼脂培养基配：改进马丁琼脂培养基粉 42.0g纯化水 1000ml 配制：称取改进马丁琼脂培养基粉，按配比例参加纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.40.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃20分钟8.1.3 营养肉汤培养基配：营养肉汤培养基 20g纯化水 1000ml 配制：称取营养肉汤培养基20克，加1000ml纯化水，加热溶解，加热至沸，冷却至常温，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌121℃15分钟8.1.4 改进马丁培养基配：改进马丁培养基粉 28.0g纯化水 1000ml 配制：称取改进马丁培养基粉，按配比例参加纯化水，水浴加热使溶解，调pH至6.40.2，分装于适宜容器，置高压灭菌器灭菌115℃20分钟8.2 菌悬液的制备8.2.1 接种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中,30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改进马丁培养基中,23～28℃培养18～24小时8.1.1 细菌芽孢悬液的制备：8.1.1.1 取枯草芽孢杆菌增菌液适量至营养琼脂培养基斜面，使菌液布满营养琼脂培养基斜面，30～35℃培养5～7天。
用接种环取菌样少涂于玻片上，固定后以改进芽孢染色法染色，并在显微镜〔油镜〕下进展镜检当芽孢形成率达95％以上时，即可进展以下处理否那么，应在室温下放置一定时间，直至到达上述芽孢形成率后再进展以下处理8.1.1.2 取适量无菌水于营养琼脂培养基斜面，以L棒轻轻推刮下菌苔吸出第一批洗下的菌悬液，再取适量无菌水于营养琼脂培养基斜面，重复洗菌一遍将第一和第二批洗下的菌悬液集中于一含玻璃珠的无菌三角烧瓶，振摇5min，打碎菌块，使成均匀的芽孢悬液8.1.1.3 将芽孢液放于80℃水浴中10min〔或60℃，30min〕，以杀灭剩余的细菌繁殖体待冷至室温后，保存于4℃冰箱中备用有效使用期为半年8.2 稀释液1％蛋白胨—PBS溶液：取磷酸二氢钾1.36g、磷酸氢二钠2.83g、蛋白胨10.0g，加水1000ml，微温溶解，分装，置高压灭菌器121℃30分钟灭菌8.3 菌片的制备8.3.1 试验中使用的菌片是以菌液滴加于载体上制成〔1.0cm1.0cm的不锈钢片〕所用载体染菌前应进展脱脂处理脱脂法如下：①将载体放在含肥皂的水中煮沸30min；②纯化水洗净；③纯化水煮沸10min；④用纯化水漂洗至pH呈中性；⑤晾干备用。
8.3.2 载体经灭菌后使用滴染法染菌将灭菌载体平放于灭菌平皿，每个载体滴注10ul菌悬液，用10ul移液器接灭菌塑料吸头，滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体外表滴染菌液后，染菌载体可置超净台上晾干后使用8.3.3 每个菌片的染菌量即回收菌量应为1105～5106cfu/片8.4 载体定量消毒试验8.4.1 取4种菌染菌载片各4个开启紫外灯5min后，将16个染菌载片平放于无菌平皿，水平放于紫外线强度最弱的位置处照射，于4个不同间隔时间〔15min、30 min、45 min、60min〕各取出1个染菌玻片，分别投入4个盛有10ml稀释液的试管中，用电动混匀器震荡20s或振打80次，洗脱载片上的菌体8.4.2 取洗脱液或其稀释液1ml，作平板倾注细菌放30～35℃培养48小时做活菌计数，真菌放23～28℃培养72小时做活菌计数8.4.3 阳性对照，除不做照射处理外，操作同上8.4.4 杀灭对数值计算杀灭对数值〔KL〕＝对照组活菌浓度对数值-试验组活菌浓度对数值8.4.5 消毒合格时间在照射强度最弱处，对细菌及其芽孢和真菌的杀灭对数值≥3所需的时间即为消毒合格时间其它传递窗，确定最弱照射强度后，根据所需照射剂量确定消毒合格时间。
照射剂量〔uWs/cm2 〕＝紫外线照射强度〔uW/cm2〕时间〔s〕将性能确认结果记录于附件59 再验证9.1 传递窗构造或紫外灯管安装位置发生改变时，需进展再验证9.2 假设无任改变或偏差时，每6个月对该系统进展紫外灯强度确认10 修改事项在实施过程中，如果案需要修改，必须提交书面报告，阐述修改的原因、修改的容，并经过相关部门及QA的认可修改后的案同先前执行的案一起归档11 相关SOP编号文件名称微生物实验室管理物品进出微生物检验室微生物检验区的清洁消毒培养基的配制细菌的接种、传代和保存高压灭菌微生物数量的测定12 附件编号附件名称附件1安装确认记录1〔微生物室〕附件2安装确认记录2〔无菌室〕附件3运行确认记录1〔微生物室〕附件4运行确认记录2〔无菌室〕附件5性能确认记录案完毕〔请注明来源：.klcfilter.〕. . word.zl-。