《HIV-BED原理和方法》由会员分享，可在线阅读，更多相关《HIV-BED原理和方法（23页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、HIV-1 BED-CEIA 检测方法及原理,陈 玲 2010年12月,时间,反应指标,怎样检测HIV-1新发感染?,HIV新发感染的检验方法,HIV-1 BED-CEIA检测法,2001 年，“美国CDC艾滋病免疫和诊断室”评估了16 种基于不同抗体和原理的HIV-1新近感染检测方法，发现新近感染者与既往感染者相比，各种抗体滴度均较低；其中gp41 抗体滴度在新近感染者和既往感染者中的差别最大，两者的滴度区间几乎没有重叠，新近感染者的gp41 抗体亲和力低于既往感染者，从而认为gp41 抗体能够区分新近感染者和既往感染者，并且酶联免疫实验操作相对简单、效果也较理想，因此该室着手开发基于gp4
2、1 抗体的HIV-1 新近感染检测的酶联免疫方法 2002年，Parekh 等首次系统地介绍BED-CEIA，他们依据人体感染HIV-1 后，体内HIV-1 特异IgG 占人体总IgG 的比例随感染时间增长而逐渐上升的原理，采用酶联免疫吸附方法设计出BED-CEIA，以区分新近感染者和既往感染者，这种方法采用HIV-1 特异的B、E和D亚型gp41 抗原决定序列所合成的分支肽，因此命名为BED-CEIA,HIV-1 BED-CEIA方法的理论依据,人体感染HIV-1 后，体内HIV-1 特异IgG 占人体总IgG 的比例随感染时间增长而逐渐上升 感染早期特异性HIV-IgG 所占比例较低，随时
3、间其比例逐渐增大 通过测验HIV-IgG的比例的多少从而确定新近感染情况,HIV-1 BED-CEIA检测原理,将多亚型gp41抗原肽包被反应板 竞争性捕获血浆样本中HIV或非HIV的IgG的比例HIV-IgG and 非HIV-IgG 间接地测量特异性HIV-IgG 在总IgG所占比例 低于临界值的样本可以归到早期感染样本之列,BED-CEIA实验原理图,血浆/血清 (1/100) (1 h/37o C),BED-生物素肽段 (gp41) (1 h/37o C),链亲和素-过氧化物酶 (90 min/37o C),TMB底物 (15 min/25o C),包被羊抗人IgG抗体,分支的多亚型合
4、成肽 (gp41-IDR),DQQLLGIWGCSGKLICTTA-C4-K-C4-G-OH,DQQLLGIWGCSGKHICTTN-C4-K,DQKFLGLWGCSGKIICTTA-C4-K,D C4,D-(Biotin),D C4,BED新发感染的窗口期,从标准酶联法检测抗体阳性开始至预先设定的BED方法的光密度值（OD-n：可以区分新发感染和长期感染的临界值）所需要的时间,COMMERCIAL KIT,BED检测流程,初始检测: 96 孔板上4对照85样本,初筛结果,确认检测: 96孔板 上4对照28 个重复检验三次的样本,确证结果,新近感染率计算方法,新近感染率计算方法,新近感染率计算方法,新近感染率计算方法,BED: 发生血清阳转后 OD-n 的变化,判定点 0.8 / 窗口期168 天,FP,FN,TN,TP,BED可能将下列人群误判为近期感染,HIV阴性者 AIDS病人 正在接受HAART的病人 HIV-2型感染者 高球蛋白血症,BED 总结,BED 方法是一种专门用于人群新发感染率研究的实验方法 我国的BED方法窗口期为168天 该方法的检测结果只能用于人群新发感染率估计，不适用于个人诊断，结果不能反馈回个体或其监护人或看管场所 所用样本为HIV-1阳性样本,谢谢！,
