油红O染色所需试剂： 蓝色：暂时可不做 红色：需准备的10% 胎牛血清的RM1640完全培养液，无胎牛血清的RM1640培养液，oxLDL① 法：PMA ，4% 多聚甲醛，丙二醇，0.5% 油红O的丙二醇溶液（0.5g油红O+100ml丙二醇），PBS② 法： 异丙醇，油红O原液，蒸馏水（简便）油红O储备液配制：油红O 0.5g异丙醇（含量98%） 100ml用前以40% 水稀释，混合后静置10分钟，过滤，即可染色所需仪器：6孔板，盖玻片，移液枪，吸管，显微镜盖玻片常规处理：自来水冲洗-泡酸过夜-纯水洗涤-酒精浸泡过夜（可免）-晾干-热压灭菌若为新盖玻片：直接用酒精加盐酸泡-纯水洗涤-晾干-热压灭菌注：纯水洗后，竖着放，在超净台里吹干，就不至于有水印细胞爬片准备：（1）如果使用载玻片或盖玻片，必须在使用之前灭菌可以一次灭菌并贮存在无菌状态下如果使用少量的盖玻片，用金属镊子夹住盖玻片，在70%乙醇中浸泡，然后在火焰上烤干要轻轻地镊取，以防破裂为了方便起见，可以将盖玻片浸泡于70%的乙醇中，使用时放在火焰上处理。
2）在无菌状态下，把干燥的玻片放于适当的培养皿中盖玻片可以用金属镊子镊取（3）将悬浮的细胞放入组织培养皿中，培养至少24小时，让细胞贴附在玻片上要想得到一个较好的结果，在加细胞时，密度应低，以防细胞密度过高4）如果细胞数目有限，可把细胞悬液直接滴在玻片上，静置4小时后再轻轻加入培养液通过这种方式，大部分细胞将粘附于玻片上，然后再培养约24小时，使细胞适当扩增此时，取出载玻片或盖玻片可进行固定油红染色步骤：1.建模：（无菌操作）取对数生长期的细胞，分为正常组和模型组，调整细胞浓度为106个/mL，接种于6孔培养板（预先放有无菌盖玻片），每孔2mL正常组含160nmol/L的PMA的RM1640基础培养液中培养24h，贴壁后轻轻吸去上清液，换含无胎牛血清的RM1640培养液，静止24h目的：诱导单核细胞分化为巨噬细胞）模型组含160nmol/L的PMA的RM1640基础培养液中培养24h，贴壁后轻轻吸去上清液，换含无胎牛血清的RM1640培养液，并加入终浓度为80mg/L的oxLDL，共同孵育48h，即得泡沫细胞模型2.染色：建模结束后，用PBS冲洗盖玻片3次，每次5min，① 冰冻的4% 多聚甲醛固定5 min，PBS 洗一次；置于丙二醇中固定5 min；轻轻吸去丙二醇，加入0.5% 油红O的丙二醇溶液，置60℃ 烤箱中染色15 min；用85% 丙二醇冲洗5 min，再用PBS 洗三次，置显微镜下观察并摄像。
② 50% 异丙醇固定1min， 油红O染色液染色10min，蒸馏水冲洗3次，每次1min，60%异丙醇分化5min，水洗5min，苏木精染液染色5min，水洗30min，干燥封片；或Mayer苏木素浅染核；1%盐酸水稍分化；水漂洗10分钟促蓝把周围水分抺干置显微镜下观察并摄像注意事项：油红染色时应避免试剂挥发过多，否则易形成背景沉淀染色结果不能长期保存，应尽快观察及照相低密度脂蛋白的分离取未加抗凝剂的健康人新鲜全血超速离心提取LDL正常人血浆LDL采用序列超速离心法制备取未加抗凝剂的健康人新鲜全血200ml，室温下静置1h，弃血凝块，以4℃、5000转/分离心30min，获血清112ml，加入NaN3 22.4mg、10% EDTA 0.56ml防腐、防氧化血清在离心机上做序列超速离心用密度为1.368的液体调整血清密度为1.019然后4 ℃、30000转/min离心18h，吸出上层乳白色液体（VLDL）及次层淡黄色液体（IDL）；收集下层液体140ml，用1.368密度的液体调整密度为1.063， 4℃、40000转/min离心24h，吸出上层黄色液体，即LDL ox-LDL的制备：血清LDL的制备方法参考文献进行改进。
根 据 天 然 LDL ( n-LDL ) 的 密 度 (d =11006 ～11063 g/ml) ,采用一次性超速密度梯度离心法从血清中分离LDLLDL在 4℃、含 0.01% EDTA的PBS中透析48h（有的72h）,经琼脂糖电泳显示为单一蛋白条带将 n-LDL置于4℃ PBS溶液中透析24h（有的36h），去除 EDTA、溴化钾 (KBr)等杂质后，37℃下于含 10μmol /L CuSO4的PBS溶液(pH=7.2)中透析12h（有的20h）,进行氧化修饰ox-LDL置于含 0.01% EDTA的PBS中，4℃透析 24 h，终止氧化超滤除菌 ，Bradford法测定蛋白含量 ,调整浓度至1g/L用于实验通过测定硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)的量来确定 LDL的氧化程度，即每 mg LDL蛋白中 MDA的含量该文按说明书操作，测得新鲜 LDL、ox-LDL的MDA分别为 2.30及21.20μmol/g。