不同内切酶对识别位点以外最少保护碱基数目的要求 PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表1 酶寡核苷酸序列切割率％2 hr20 hrAcc IGGTCGACCCGGTCGACCGCCGGTCGACCGG000000Afl IIICACATGTGCCACATGTGGCCCACATGTGGG0>90〉900>90>90Asc IGGCGCGCCAGGCGCGCCTTTGGCGCGCCAA〉90〉90〉90〉90>90〉90Ava ICCCCGGGGCCCCCGGGGGTCCCCCGGGGGA50>90>90>90>90〉90BamH ICGGATCCGCGGGATCCCGCGCGGATCCGCG10〉90〉9025〉90〉90Bgl IICAGATCTGGAAGATCTTCGGAAGATCTTCC075250〉90>90BssH IIGGCGCGCCAGGCGCGCCTTTGGCGCGCCAA005000〉90BstE IIGGGT（A/T）ACCC010BstX IAACTGCAGAACCAATGCATTGGAAAACTGCAGCCAATGCATTGGAACTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT02525050>90Cla ICATCGATGGATCGATCCCATCGATGGCCCATCGATGGG00〉905000>9050EcoR IGGAATTCCCGGAATTCCGCCGGAATTCCGG>90〉90〉90>90〉90〉90Hae IIIGGGGCCCCAGCGGCCGCTTTGCGGCCGCAA>90>90〉90>90〉90>90Hind IIICAAGCTTGCCAAGCTTGGCCCAAGCTTGGG00100075Kpn IGGGTACCCGGGGTACCCCCGGGGTACCCCG0>90>900〉90〉90Mlu IGACGCGTCCGACGCGTCG025050Nco ICCCATGGGCATGCCATGGCATG050075Nde ICCATATGGCCCATATGGGCGCCATATGGCGGGGTTTCATATGAAACCCGGAATTCCATATGGAATTCCGGGAATTCCATATGGAATTCCC000075750000>90>90Nhe IGGCTAGCCCGGCTAGCCGCTAGCTAGCTAG0101002550 PCR设计引物时酶切位点的保护碱基表2酶寡核苷酸序列切割率％2 hr20 hrNot ITTGCGGCCGCAAATTTGCGGCCGCTTTAAAATATGCGGCCGCTATAAAATAAGAATGCGGCCGCTAAACTATAAGGAAAAAAGCGGCCGCAAAAGGAAAA0101025250101090〉90Nsi ITGCATGCATGCACCAATGCATTGGTTCTGCAGTT10〉90〉90〉90Pac ITTAATTAAGTTAATTAACCCTTAATTAAGG000025〉90Pme IGTTTAAACGGTTTAAACCGGGTTTAAACCCAGCTTTGTTTAAACGGCGCGCCGG0007502550>90Pst IGCTGCAGCTGCACTGCAGTGCAAACTGCAGAACCAATGCATTGGAAAACTGCAGCCAATGCATTGGAACTGCAGAACCAATGCATTGGATGCAT010>90〉900010>90〉900Pvu ICCGATCGGATCGATCGATTCGCGATCGCGA010002510Sac ICGAGCTCG1010Sac IIGCCGCGGCTCCCCGCGGGGA0500>90Sal IGTCGACGTCAAAAGGCCATAGCGGCCGCGCGTCGACGTCTTGGCCATAGCGGCCGCGGACGCGTCGACGTCGGCCATAGCGGCCGCGGAA0101005075Sca IGAGTACTCAAAAGTACTTTT10752575Sma ICCCGGGCCCCGGGGCCCCCGGGGGTCCCCCGGGGGA0010〉90101050>90Spe IGACTAGTCGGACTAGTCCCGGACTAGTCCGCTAGACTAGTCTAG101000>90〉905050Sph IGGCATGCCCATGCATGCATGACATGCATGCATGT001002550Stu IAAGGCCTTGAAGGCCTTCAAAAGGCCTTTT>90〉90〉90>90〉90>90Xba ICTCTAGAGGCTCTAGAGCTGCTCTAGAGCACTAGTCTAGACTAG0>9075750〉90〉90〉90Xho ICCTCGAGGCCCTCGAGGGCCGCTCGAGCGG0101002575Xma ICCCCGGGGCCCCCGGGGGCCCCCCGGGGGGTCCCCCCGGGGGGA02550>90075>90>90。