实验五实验五 花粉发芽试验和花粉发芽试验和生活力的测定生活力的测定 指导教师：姜喜指导教师：姜喜2014.6.19 学习和掌握果树发芽学习和掌握果树发芽试验和花粉生活力测试验和花粉生活力测定的技术定的技术花 粉一、实验目的一、实验目的 n果树杂交工作中，往往会遇到父母本花期不遇，必须采果树杂交工作中，往往会遇到父母本花期不遇，必须采集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉及其生活力如何，必须集花粉短暂贮藏，经贮藏的花粉及其生活力如何，必须经过测定，以保证杂交效果经过测定，以保证杂交效果n正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活正常条件下花粉在雌蕊上萌发的能力，就是花粉的生活力n花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果花粉生活力的高低直接影响植物授粉、受精乃至坐果二、实验原理二、实验原理 1 1、材料、材料: : 正在开花的植株花粉2 2、器具、器具: : 盖玻片 载玻片 培养皿 滴管 镊子 解剖针 吸水纸 水浴锅 恒温箱 天平 烧杯 玻棒 电炉 普通显微镜3 3、药品、药品: : 蒸馏水 硼酸 蔗糖 琼脂 联苯胺 α-奈酚 碳酸钠 过氧化氢 磷酸氢二钠 磷酸二氢钾 氯化三苯基四氮三、实验材料与用具三、实验材料与用具 配置培养基配置培养基（（ 1%琼脂琼脂+0.01%硼酸硼酸+ 5%-20%蔗糖蔗糖 ）） 煮沸溶化煮沸溶化用玻棒分装与凹玻片中用玻棒分装与凹玻片中 播撒花粉播撒花粉置于培养皿中置于培养皿中20-25℃恒温培养数小时恒温培养数小时 保持湿度保持湿度 镜检计数镜检计数 四、实验方法与步骤四、实验方法与步骤（一）花粉发芽试验（一）花粉发芽试验 Ø显微镜显微镜Ø隔一定时间检查一次隔一定时间检查一次Ø随机调查随机调查5 5个视野，若发现花粉已发芽时，就记录花粉粒总个视野，若发现花粉已发芽时，就记录花粉粒总数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内。
数和发芽数，算出平均值，将观察结果填入表内 Ø花粉发芽的标准：以花粉管伸长超出花粉直径为准若花粉花粉发芽的标准：以花粉管伸长超出花粉直径为准若花粉发芽率在发芽率在5%5%以下，为极弱，不能采用以下，为极弱，不能采用Ø花粉发芽率花粉发芽率= =发芽花粉总数发芽花粉总数/ /花粉总数花粉总数* *100100★ 优点：能够统计出百分率，准确度高★ 缺点缺点：操作相对复杂，而且花粉发芽条件与实际不完全相符易受培养基配方的影响导致结果的偏差 【【注意事项注意事项】】1.不同种类植物的花粉萌发所需温度、蔗糖和硼酸浓度不同，应依植物种类而改变培养条件2.此法也可用于观察花粉管在培养基上的生长速度以及不同蔗糖浓度，离体时间，环境条件等因素对花粉活力的影响3.不是所有植物的花粉都能在此培养基上萌发，本法适用于易于萌发的植物花粉活力的测定 4 h密密集集24 h 1 过氧化物酶法：过氧化物酶法： 具有生活力的花粉含有活跃的过氧化物酶此酶能利用过氧化氢使各种多酚及芳香族胺发生氧化而产生颜色，依据颜色可知花粉有无活性实验中甲液成分为联苯胺，α-萘酚、碳酸钠，乙液成分为过氧化氢H2O2 + 酚 醌 +H2O过氧化氢酶过氧化氢酶 （无色） （红色、玫瑰红色）（二）花粉生活力的测定 将适量花粉置于载玻片上先滴1滴甲液，再滴1滴乙液 充分反应显微镜下镜检计数，红色的为有活力的花粉★优点：染色法用时短，见效快★优点：颜色判断易受个人因素影响，导致结果有较大差别。
【【注意事项注意事项】】滴加甲液和乙液后，会产生大量的气泡，待气泡基本消失后方可观察统计生活力的方法同前 TTC即2、3、5-三苯基四唑氯化物主要原理在于检验花粉呼吸过程中脱氢酶的活性2、3、5-氯化三苯基四氮唑(TTC)的氧化状是无色的，被氢还原时成红色的TTF有活力2 TTC法： （1）取少量花粉放在载玻片上，并在花粉上滴上1~2滴配制液，用玻璃棒混合盖上盖玻片2）将载玻片置于恒温箱中（35~40℃）约15~20分钟3）在显微镜下观察：凡具有生活力的花粉呈红色，部分丧失生活力的呈淡红色，无色的是死的和不育的花粉粒4）观察和测定结果：每片观察3个视野，并统计具有生活力的花粉的百分率 以碘－碘化钾溶液（ 0.3g 碘＋ 1.3g 碘化钾溶于 100ml 蒸馏水）染色后于显微镜下观察 有活力无活力3、、碘－碘化钾法法 Ø1、将培养基法和染色法两种方法测得的结果列表记录，并计算花粉的生活力Ø2、比较测定花粉生活力三种方法的优缺点Ø3、绘制一花粉粒发芽形态图五、结果与分析五、结果与分析 花粉发芽试验观察记载表花粉发芽试验观察记载表品种品种品种品种培养培养培养培养基配基配基配基配方方方方视野视野视野视野1 1 1 1视野视野视野视野2 2 2 2视野视野视野视野3 3 3 3花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数( ( ( (个）个）个）个）发芽发芽发芽发芽数数数数( ( ( (个）个）个）个）萌发萌发萌发萌发率率率率(%)(%)(%)(%)花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数( ( ( (个）个）个）个）发芽发芽发芽发芽数数数数( ( ( (个）个）个）个）萌发萌发萌发萌发率率率率(%)(%)(%)(%)花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数 ( ( ( (个）个）个）个）发芽数发芽数发芽数发芽数( ( ( (个）个）个）个）萌发萌发萌发萌发率率率率(%)(%)(%)(%)1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 花粉活力测定观察记载表花粉活力测定观察记载表品种品种品种品种染色染色染色染色方法方法方法方法视野视野视野视野1 1 1 1视野视野视野视野2 2 2 2视野视野视野视野3 3 3 3花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数( ( ( (个）个）个）个）染色染色染色染色数数数数( ( ( (个）个）个）个）生活生活生活生活力力力力(%)(%)(%)(%)花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数( ( ( (个）个）个）个）染色染色染色染色数数数数( ( ( (个）个）个）个）生活生活生活生活力力力力(%)(%)(%)(%)花粉花粉花粉花粉总数总数总数总数 ( ( ( (个）个）个）个）染色数染色数染色数染色数( ( ( (个）个）个）个）生活生活生活生活力力力力(%)(%)(%)(%)1 1 2 2 3 3 4 4 5 5 。