临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室验收要求和要点验收要求和要点验收要求和要点验收要求和要点 宁夏回族自治区人民医院宁夏回族自治区人民医院宁夏回族自治区人民医院宁夏回族自治区人民医院临床医学检验诊断中心临床医学检验诊断中心 杜宗孝杜宗孝 2016.082016.082临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室临床基因扩增检验实验室申报及验收程序申报及验收程序申报及验收程序申报及验收程序二级以上医院二级以上医院 填写填写临床基因扩增检验实验室设置申请书临床基因扩增检验实验室设置申请书 省卫计委医政处省卫计委医政处 相应的卫生行政部门相应的卫生行政部门省临床检验中心初步技术审核省临床检验中心初步技术审核 合格者开始试运行（三个月），同时报省卫计委备案合格者开始试运行（三个月），同时报省卫计委备案 验收合格后，授予验收合格证书（证书有效期五年）验收合格后，授予验收合格证书（证书有效期五年）（省级医疗机构）（省级医疗机构）（地、市（地、市(县县)级医疗机构）级医疗机构）3 验收依据验收依据验收依据验收依据n医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法 卫办医政发卫办医政发2010194号号n临床临床基因扩增检验基因扩增检验实验室实验室（血血站核酸站核酸检测检测）工作工作导导则则n临床基因扩增检测实验室技术验收报告临床基因扩增检测实验室技术验收报告 4为什么要进行验收？为什么要进行验收？为什么要进行验收？为什么要进行验收？n方法敏感n技术要求高n存在问题多n假阴性、假阳性n不规范n人员素质5验收要达到的目的验收要达到的目的验收要达到的目的验收要达到的目的n保证检测质量保证检测质量n防止实验室污染防止实验室污染n建立建立LAB内部质量管理内部质量管理模式模式n尝试强制性实验室认可尝试强制性实验室认可67 质量管理的内涵质量管理的内涵质量管理的内涵质量管理的内涵n写你所做的写你所做的n做你所写的做你所写的n记录你已做的记录你已做的n分析你已做的分析你已做的8 PCR PCR 实验室区域设计原则实验室区域设计原则实验室区域设计原则实验室区域设计原则 原则上应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标原则上应当设置以下区域：试剂储存和准备区、标本制备区、扩增区、扩增产物分析区。
本制备区、扩增区、扩增产物分析区 这这4个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各个区域在物理空间上必须是完全相互独立的，各区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全区域无论是在空间上还是在使用中，应当始终处于完全的分隔状态，不能有空气的直接相通的分隔状态，不能有空气的直接相通 根据使用仪器的功能，区域可适当合并例如使用根据使用仪器的功能，区域可适当合并例如使用实时荧光实时荧光PCR仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采仪，扩增区、扩增产物分析区可合并；采用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析用样本处理、核酸提取及扩增检测为一体的自动化分析仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并仪，则标本制备区、扩增区、扩增产物分析区可合并 9 PCR PCR实验室的空气流向实验室的空气流向实验室的空气流向实验室的空气流向 临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂临床基因扩增检验实验室的空气流向可按照试剂储存和准备区储存和准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区扩增产物分析区扩增产物分析区进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域可进行，防止扩增产物顺空气气流进入扩增前的区域可按照从试剂储存和准备区按照从试剂储存和准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区扩增扩增产物分析区方向空气压力递减的方式进行。
可通过安装产物分析区方向空气压力递减的方式进行可通过安装排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现排风扇、负压排风装置或其他可行的方式实现10PCRPCR实验室工作基本原则实验室工作基本原则实验室工作基本原则实验室工作基本原则n进入各工作区域应当严格按照单一方向进行进入各工作区域应当严格按照单一方向进行n 各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的各工作区域必须有明确的标记，不同工作区域内的 设备、物品不得混用设备、物品不得混用n不同工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）不同工作区域使用不同的工作服（例如不同的颜色）工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出工作人员离开各工作区域时，不得将工作服带出n实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区实验室的清洁应当按试剂贮存和准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区扩增产物分析区的方向进行不同的实验扩增产物分析区的方向进行不同的实验区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染区域应当有其各自的清洁用具以防止交叉污染 PCRPCR实验室工作基本原则实验室工作基本原则实验室工作基本原则实验室工作基本原则n工作结束后，必须立即对工作区进行清洁实验台表面工作结束后，必须立即对工作区进行清洁。
实验台表面应可耐受次氯酸钠等化学物质的消毒清洁作用实验台应可耐受次氯酸钠等化学物质的消毒清洁作用实验台表面的紫外照射应当方便有效由于紫外照射的距离和表面的紫外照射应当方便有效由于紫外照射的距离和能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外能量对去污染的效果非常关键，因此可使用可移动紫外灯（灯（254nm波长），在工作完成后调至实验台上波长），在工作完成后调至实验台上6090cm内照射由于扩增产物仅几百或几十碱基对内照射由于扩增产物仅几百或几十碱基对（bp），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段），对紫外线损伤不敏感，因此紫外照射扩增片段必须延长照射时间，最好是照射过夜必须延长照射时间，最好是照射过夜n实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作实验室的安全工作制度或安全标准操作程序，所有操作符合符合实验室生物安全通用要求实验室生物安全通用要求（GB19489-2008）12 PCRPCR实验室技术验收内容实验室技术验收内容实验室技术验收内容实验室技术验收内容n实验室设置和设备实验室设置和设备n设施和环境设施和环境n人员人员n设备管理和质控物设备管理和质控物 n检测过程检测过程 n标本管理标本管理 n记录记录 n报告报告 n质量控制质量控制 n抱怨抱怨 等十章共三十七条等十章共三十七条附件1 临临床基因床基因扩扩增增检验实验检验实验室技室技术验术验收表收表序号 验 收 内 容 验 收 意 见符合 基但本有符缺合陷不符合缺此项暂不需考核 评论与说明1实验实验室室设设置和置和设备设备1.1实验实验室的室的规规范化分区范化分区:原原则则上上应应分分为为四个区四个区,但如使用全自但如使用全自动扩动扩增增检测仪检测仪,区域可适当合区域可适当合并并1.2各工作区的明确各工作区的明确标记标记1.3实验实验室室应应配配备备开展开展临临床基因床基因扩扩增增检测检测所需的所有所需的所有仪仪器器设设备备（包括（包括质质控物）。
保控物）保证证临临床基因床基因扩扩增增检验实验检验实验室室管理管理办办法法和和临临床基因床基因扩扩增增检验实验检验实验室工作室工作导则导则的的有关要求得到有关要求得到满满足本片来自本片来自李金明教授李金明教授 临床基因扩增实验室设置的一般原则临床基因扩增实验室设置的一般原则临床基因扩增实验室设置的一般原则临床基因扩增实验室设置的一般原则n各区独立n注意风向n因地制宜n方便工作 “ “十六字口诀” ”本图来自李金明教授本图来自李金明教授 15 理想的理想的理想的理想的PCRPCR实验室设置实验室设置实验室设置实验室设置A A产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区16产物分析区产物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间缓冲间专用走廊专用走廊工作流向工作流向扩增区扩增区标本制备区标本制备区试剂准备区试剂准备区 理想的理想的理想的理想的PCRPCR实验室设置实验室设置实验室设置实验室设置B B本图来自李金明教授本图来自李金明教授 17试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩 增增 及及 产产物分析区物分析区门门门门门门门门空气流向空气流向空气流向空气流向 +空气流向空气流向+试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩 增增 及及 产产物分析区物分析区门门门门门门门门空气流向空气流向空气流向空气流向 空气流向空气流向本图来自李金明教授本图来自李金明教授 18走廊走廊走廊走廊试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增和产扩增和产物分析区物分析区空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向空气流向其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室其他实验室本图来自李金明教授本图来自李金明教授 门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩增增及及产产物分析区物分析区门门门空气流向空气流向空气流向空气流向+空气流向空气流向+本图来自李金明教授本图来自李金明教授 本图来自李金明教授本图来自李金明教授 门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩增区扩增区产物分析区产物分析区外走廊外走廊门门门门门门门门试剂准备区试剂准备区标本制备区标本制备区扩扩增增及及产产物物分析区分析区外走廊外走廊门门门门门门门门AB错错误误的的设设置置21 临床标本的接收临床标本的接收 n应在四个测定区域之外的地方或适合的地方。
应在四个测定区域之外的地方或适合的地方n接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从接收的标本应收集在原始容器中，不能接收从其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本其它检测如生化、免疫检验等分出来的标本 n在在核核酸酸提提取取时时，由由基基因因扩扩增增检检验验实实验验室室人人员员将将标本带入至标本制备区标本带入至标本制备区23 试剂储存和准备区试剂储存和准备区试剂储存和准备区试剂储存和准备区 n功能：贮存试剂的制备、试剂的分装和扩增反应混合液的准备，以及离心管、吸头等消耗品的贮存和准备n试剂准备区的仪器设备主要有冰箱、微量加样器、混匀器、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔加样器应定期校准24 标本制备区标本制备区标本制备区标本制备区n功能：核酸（RNA、DNA）提取、贮存及其加入至扩增反应管对于涉及临床样本的操作，应符合生物安全二级实验室防护设备、个人防护和操作规范的要求25 标本制备区标本制备区标本制备区标本制备区 n标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜标本制备区内的仪器设备主要有生物安全柜 、加样器、加样器、高速台式冷冻离心机、水浴箱和高速台式冷冻离心机、水浴箱和/ /或加热模块、混匀器、或加热模块、混匀器、冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤冰箱、可移动紫外灯、专用工作服和鞋、消耗品（带滤芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔。
加样芯吸头、一次性手套等）、专用记录本和记录笔加样器应定期校准如需处理大分子器应定期校准如需处理大分子DNADNA，应当具有超声波，应当具有超声波水浴仪 n加热模块和水浴应使用加热模块和水浴应使用已经校准的温度计已经校准的温度计定期对所设置定期对所设置的温度进行校准的温度进行校准 1.6扩扩增区增区 (a) 核酸扩增仪;(b)微量加样器； (c)可移可移动动紫外灯紫外灯；(d)专用工作服和工作鞋；(e)消耗品（带滤心吸头、一次性手套等）；(f)专用实验记录本、记号笔等27 扩增区扩增区扩增区扩增区n功能：功能：cDNA合成、合成、DNA扩增及检测扩增及检测n扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环扩增区的主要仪器就是核酸扩增热循环仪，该仪器需进行校准。