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1、 ABCD人民医院检验科 程序文件文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容关于发布程序文件的声明生效日期： 第 二 页 共21 页血库作业指导书 文件编号：GGYY-1-XK-0110 第A版编制： 张兵文审核： 张兵文批准： 生效日期：2012年6月1日开阳光正医院检验科2 开阳光正医院检验科 血库作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 目 录生效日期：第 2 页 共20 页目 录序号主 题 内 容 代 号页 号血库作业指导书部分1交叉配血（凝聚胺法和盐水法）GGYY-3-XK-0112ABO血型鉴定（正定型和反定型）GGYY-3-XK-0273Rh血型鉴定GGYY-3-XK-0
2、3114ABO正定型和Rh血型鉴定（微柱凝胶检测法）（微柱凝胶检测法）GGYY-3-XK-04155冰冻血浆解冻箱GGYY-3-XK-0420开阳光正医院检验科血库作业指导书文件编号： 版本/修订号：A/0主题内容 修 订 页生效日期：第 3 页 共20 页 修 订 页序号文件编号页码需更改的内容更改内容批准人批准日期123456789101112131415161718192021 开阳光正医院检验科 血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-02版本/修订号：A/0主题内容交叉配血生效日期： 第 6页 共20 页交叉配血操作规程（凝聚胺法和盐水法）1.目的本规程规定了红细胞交叉配血操作规
3、程，以确保红细胞交叉配血试验准确无误。2.职责血型室工作人员按照此规程进行红细胞交叉配血操作。3.范围本规程适用于红细胞交叉配血。4.原理交叉配血试验系指检查受血者与献血者（或供血者）的抗原及抗体成分是否相容，以及是否含不规则抗体等，以保证安全输血。交叉配血分主侧交叉试验即为患者血清与献血者（或供血者）红细胞的相容性试验；次侧交叉试验，即献血者（或供血者）血浆与患者红细胞的相容性试验。5.材料与设备5.1抗A（B型）、抗B（A型）及抗A、B（O型）分型血清效价1：128。5.2患者血样。5.3献血者（或供血者）血液。5.4设备器材:滴管，试管架，试管（10mm60mm），离心机。5.5试剂:低
4、离子聚凝胺试剂，抗人球蛋白血清。6、检测环境条件:温度：16-30 湿度：25-75。7、方法步骤7.1盐水介质配血法（试管法）。7.1.1步骤抽取受血者静脉血34ml，后分离血浆，并将红细胞配成2红细胞悬液。将献血者（或供血者）血样以同样方法分离血浆，并配制2红细胞悬液。取洁净小试管（10mm60mm）3支，1支标明受血者血浆（PS）献血者（或供血者）细胞（DC）为主侧管，另1支标明献血者（或供血者）血浆（DS）受血者细胞（PC）为次侧管，第3支标明受血者血浆（PS）受血者细胞（PC）为自身对照管。按标记主侧管加受血者血浆2滴，加献血者（或供血者）2红细胞1滴。次侧管加献血者（或供血者）血浆
5、2滴，加受血者2红细胞悬液1滴。自身对照管加受血者血浆2滴，加受血者红细胞悬液1滴。混匀，以1300g离心15秒。轻轻摇动试管，观察结果。冬季室温较低，应将试管保温，以防冷凝集素引起的凝集反应。7.2聚凝胺配血法7.2.1步骤取试管3支，标主次侧，主侧管加病人血清(血浆)2滴，加供血者35红细胞悬液1滴，次侧管反之。自身对照管同盐水配血法。各加LIM0.7ml，混合均匀后，再各加Polybrene溶液2滴，并混合均匀。1300g离心15秒，然后把上清夜倒掉。轻轻摇动试管，目测红细胞有无凝集，如无凝集，则必须重做。最后加入Resuspending2滴，轻轻转动试管混合并同时观察结果。如果在306
6、0秒内凝集散开，代表是由Polybrene引起的非特异性聚集，配血结果相合；如凝集不散开，则为红细胞抗原抗体结合的特异性反应，配血结果不相合。如反应可疑，可进一步倒在玻片上用显微镜观察。7.3抗人球蛋白配血法7.3.1步骤取试管3支，分别标明主侧、次侧和自身对照，主侧管加受血者血清2滴和献血者（或供血者）3红细胞盐水悬液1滴，次侧管加献血者（或供血者）血清2滴和受血者3红细胞悬液1滴，自身对照管同盐水配血法。混合置37水浴致敏30分钟，取出后用生理盐水洗涤3次，倾去上清液。加最适稀释度抗人球蛋白血清2滴， 1300g离心15秒，观察结8.结果分析与报告8.1以上三种配血方法主侧、次侧配血管和自
7、身对照管均无凝集，均无溶血，表示无输血禁忌可以输注。8.2以上三种配血方法主侧和自身对照管均无凝集、均无溶血，而次侧管有一种或三种方法均凝集或均溶血经三洗后可少量输注。8.3以上三种配血方法主侧、次侧配血管均凝集或均溶血，而自身对照均无凝集、均无溶血，表示有输血禁忌不可以输注。8.4以上三种配血方法主侧管均凝集或均溶血，而次侧管和自身对照均无凝集均无溶血，表示有输血禁忌不可以输注。9.注意事项9.1送检血液标本的标识必须与送检单一致，要认真核对。9.2操作过程中必须认真细心，规范操作。9.3 交叉配血试验中发现不配合时，首先要考虑受血者和献血者（或供血者）的ABO定型是否错误，必要时进行Rh血
8、型鉴定及抗体筛检。其次应注意有无特异性同种抗体，或者病人的血清在室温、37或抗球蛋白血清中凝集所有其它红细胞，造成交叉配血的困难，应进一步做有关试验进行鉴定。9.4受血者和献血者（或供血者）的样本，在每次输血之后，在26保存7天。如果病人在输血中发生不良反应时，或在输血后数天内发生迟发性、溶血性反应时，保存病人和献血者（或供血者）的血样就有可能要重做或追加试验，必要时从发生溶血性输血反应的病人重新采取血样与输血前病人血样同时检查比较。9.5聚凝胺法配血时应注意以下问题9.5.1可以用含EDTA之血浆代替血清使用。9.5.2若病人血清(血浆)含肝素，如洗肾患者，须多加46滴Ploybrene溶液
9、以中和肝素。9.5.3试剂使用前请回复室温再行操作。9.5.4加做辅助性抗人球蛋白试验，目的是增加检测抗K的敏感性，对检测其他红细胞抗体无帮助。9.5.5在冬天室温极低的情况下，操作交叉配血试验，某些病人血清中可能含有寒冷凝集素等因素，而导致假阳性的结果出现。若有此怀疑，建议在最后滴入Resuspending时，将试管立即置于37水浴中，轻轻转动试管混合，并在30秒内观察结果。10.支持性文件中国输血技术操作规程血站部分1997版。 开阳光正医院检验科 血库作业指导书文件编号：ABCD-3-XK-03版本/修订号：A/0主题内容血型鉴定生效日期： 第 14 页 共20 页ABO血型鉴定1. 原
10、理根据红细胞上有或无A抗原或/和B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型四种。A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原，AB型红细胞膜上含有A、B抗原，抗A、抗B试剂是分别针对A抗原和B抗原的特异性抗体。可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。所谓正定型，是用已知的抗A、抗B试剂与受检者的红细胞混合时，与抗A试剂发生凝集者即为A型，与抗B分型试剂发生凝集者即为B型，与抗A、抗B试剂均发生凝集者即为AB型，与抗A、抗B试剂均不凝集者即为O型。所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗A或/和抗B。2. 标本采集2.1 标本种类：新抽取的抗凝血或手指末梢
11、血和血清。2.2 标本要求：2.2.1 抗凝剂：如用抗凝血，多主张用EDTA K2（/dL）抗凝。2.2.2 用手指末梢血作血型检测时，最少样品量为100ul，如手指有冻疮，则主张采耳垂血。3. 标本储存：2小时内完成实验，室温放置下不超过8小时，4-8保存不超过48小时。4. 标本运输：室温运输5. 标本拒收标准：细菌污染、溶血标本不能作测定6. 试剂6.1 试剂名称：ABO血型检测试剂6.2 试剂生产厂家：南京华欣药业生物工程有限公司6.3 试剂组成试剂1：抗A分型试剂（蓝色），效价1：128，2-8避光保存，室温放置不宜过久。试剂2：抗B分型试剂（黄色），效价1：128，2-8避光保存，
12、室温放置不宜过久。试剂3：5A、B及O型红细胞盐水悬液，自制。配制方法：分别采取已知A、 B、O三种血型的红细胞，经盐水洗涤3次，以压积红细胞配成不同浓度的红细胞悬液。红细胞悬液的配制悬液浓度（）压积红细胞（滴）盐水（滴）25102011112ml（40）0.8ml（16）0.4ml（8）0.2ml（4）为了防止红细胞悬液敏感性不一致，可随机采取3个或以上的健康成人血液，按A、B、O型分别混合后，按上法制备。7. 操作步骤7.1 玻片法7.1.1 取清洁玻片1张（或白瓷板1块），用肥皂水刷洗后晾干，用蜡笔划出小格，并注明A、B字样。将抗A试剂、抗B试剂各一滴分别滴于玻片（或瓷盘）上A、B处。分
13、别取等体积待检血样（5-10红细胞悬液或全血）于抗A试剂和抗B试剂。7.1.2 另取洁净玻片1张（或白瓷板1块），用蜡笔划成方格，标明A细胞、B细胞和O细胞，用滴管各加受检者血清1滴，再分别用滴管滴加A、B和O型试剂红细胞悬液1滴。7.1.3 用不同的竹签将分型试剂与待检血样调匀，同时不停的摇动玻片（或瓷盘）并观察血型凝集（或溶血）反应。如以玻片做试验时，也可用低倍镜观察结果。7.2 试管法7.2.1 取洁净小试管（内径10mm60mm）2支，分别标上A、B字样，用滴管分别向A管滴加抗A分型试剂1滴。向B管滴加抗B分型试剂1滴。向A、B管各滴加待检血样的5红细胞悬液各1滴，混合。7.2.2 另取洁净小试管（内径10mm60mm）3支，分别标明A、B和O细胞。用滴管分别加入受检者血清1滴于试管底部，再分别以滴管加入
