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1、1紫金砂体外抗菌活性的研究【摘要】目的紫金砂提取物及其提取部位抗菌活性的研究。方法 95%乙醇提取，系统溶剂萃取分离得到 5 个部位，采用纸片扩散法对提取物及提取部位进行体外抗菌活性研究。结果紫金砂提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌具有抑制作用，氯仿提取部位对大肠杆菌、枯草芽胞杆菌具有抑制作用，正丁醇提取部位对大肠杆菌、绿脓杆菌具有抑制作用。结论紫金砂提取物及提取部位具有抗菌活性。【关键词】紫金砂抗菌活性提取物提取部位Abstract:ObjectiveTostudytheanti-bacterialactivityoftheextractanditsextractivefractionsofA
2、ngelicapolymorphaMaxim.MethodsAngelicapolymorphaMaxim.wasextractedwith95%ethanol.Fivefractionswereobtainedbysystematicallyseparatingtheextracts.Antibacterialeffectinvitrowastestedusingdiskdiffusionmethod.ResultsTheextractshowedantibacterialactivityagainstStaphylococcusaureusandEscherichiacoli.Thechl
3、oroformfractionshowedactivityagainstEscherichiacoliandBacillussubtilis.ThenobutanolfractionshowedactivityagainstEscherichiacoliandPseudomonasaeruginosa.ConclusionTheextractanditsfractionsofAngelicapolymorphaMaxim.haveanti-bacterialactivitives.Keywords:AngelicapolymorphaMaxim.;Anti-bacterialactivity;
4、Extract;Extractivefraction土家族常用中药紫金砂，为伞形科植物当归属植物白根独活（又称拐芹）AngelicapolymorphaMaxim.的根1 。主要分布于湖北、湖南、重庆、陕西省等省区。具有温中散寒、理气止痛的功效。民间一直作为香独活入药，常用其治疗胃痛、腹痛、胸胁痛、风湿关节痛、跌打损伤、毒蛇咬伤等，疗效极佳2 。其化学成分主要为生物碱3 、挥发油4 、香豆素5，6 、甾醇7等。文献报道抗菌植物资源中伞形科较为丰富，这其中又以当归属等植物抗菌活性最强8 。在上述文献工作的基础上，本实验对伞形科当归属植物拐芹的根，即紫金砂进一步进行体外抗菌实验(纸片扩散法9，10
5、)的研究，发现紫金砂初提物及不同萃取部位具有不同的抗菌活性。为进一步活性追踪其化学成分提供了依据和导向。1 器材1.1 仪器N-1001 型旋转蒸发器（日本 EYELA） 、ss-325 型压力蒸气灭菌锅（日本TOMY） 、SPX-1508B 型恒温培养箱（天津泰斯特） 、AL204 万分之一电子天平(METTLWRTOLEDO)、SW-CJ-1F 型超净工作台（苏州净化设备有限公司） 。21.2 药材自采药材，20050709 采于神农架林区木鱼镇。经鉴定为伞形科植物当归属植物拐芹（AngelicapolymorphaMaxim.）的根。1.3 试剂 95%乙醇（武汉化工厂，化学纯） 、石油
6、醚、三氯甲烷、醋酸乙酯、正丁醇等（天津博迪化学试剂分析纯） ；102 型滤纸（杭州新华造纸厂） 。1.4 培养基营养肉汤（北京双旋微生物培养基制品厂） ，琼脂粉（上海惠兴生化试剂有限公司） 。1.5 菌种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和绿脓杆菌由湖北省宜昌市中心医院提供，枯草芽孢杆菌由湖北省宜昌市三峡大学化学与生命科学学院微生物室提供。2 方法与结果2.1 供试液的制备取干燥的紫金砂根，研磨成细粉，过 20 目筛。用 95%乙醇回流提取，提取液减压浓缩得总浸膏。总浸膏用适量水溶解后，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇分别反复萃取。各萃取液及最后水溶液减压回收溶剂，浓缩得不同极性部位浸膏。精密称取所
7、得各部位浸膏 1.00g，依次将浸膏配制成10ml,即 10g/100ml 浓度的药液备用。具体过程及结果见图 1。2.2 固体培养基的制备称取营养琼脂置于三角烧瓶中，用去离子水将其充分溶解，取适量脱脂棉塞住瓶口并用滤纸包扎好放入高压灭菌锅中，121灭菌15min，待冷却到 60后取出，在无菌操作台上倒入一次性培养皿中（培养基直径 60cm,所倒入的琼脂的厚度为 4mm） 。待冷却凝固后放入冰箱中，4保存备用。2.3 菌悬液的制备取 3 只试管，分别倒入等量生理盐水至试管的 1/3 处，于紫外灯下灭菌 20min,然后用无菌棉签蘸取新鲜菌种少量 45 个菌落放入生理盐水充分搅动使细菌分散均匀。
8、校正菌液浓度与标准比浊管相同，即达 015 号麦氏比浊管浊度，所有步骤均在无菌操作台上完成。2.4 纸片的制备将无药纸片（材料：滤纸；直径：6mm）放入高压灭菌锅中，121灭菌 15min，取出后置恒温培养箱中干燥备用。在无菌操作台上用移液器移取 20l 已配制好的药液均匀注入已灭菌的纸片上（每药液做 3 个纸片） ，使药液完全被纸片吸收，待药片上的溶剂挥干后，在紫外灯下灭菌 20min 备用。2.5 提取物的抑菌实验分别用无菌移液管吸取上述制备的 4 种供试菌悬液0.1ml 添加到平板培养基上,用无菌三角玻璃涂布棒涂布均匀,同时用乙醇做空白对照。按无菌操作将预先灭菌烘干并浸蘸提取液的 6mm
9、 滤纸圆片平贴在含菌培养基上,在每只含菌平板上间隔一定的距离贴 3 片,呈三角状排列,共重复 3 次，结3果取平均值。同时用浸有乙醇的滤纸片做空白对照。培养皿倒置在培养箱中，37，培养 2448h，取出测定滤纸片抑菌圈的直径大小，比较抑菌效果。2.6 紫金砂萃取部位的抑菌实验石油醚、氯仿、醋酸乙酯、正丁醇萃取得相应的萃取物，用萃取溶剂作对照，按“2.5”的方法操作，比较抑菌效果。2.7 结果紫金砂乙醇提取物(AP)、石油醚提取部位(APP)、氯仿提取部位(APC)、醋酸乙酯提取部位(APE)、正丁醇提取部位(APB)及水部位(APW)经纸片扩散法测定后,抗菌活性抑菌圈直径的实验结果见表 1。表
10、 1 紫金砂提取物及不同提取部位抑菌环直径（略）由表 1 可知紫金砂 95%乙醇提取物对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌有不同程度的抑制作用,对绿脓杆菌、以及枯草芽孢杆菌无抑制作用。由表 1 结果还可以表明,紫金砂氯仿提取部位对大肠杆菌、枯草芽孢杆菌具有抑制作用，其中对大肠杆菌抑制作用较强，对受试的金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌无抑制作用。紫金砂正丁醇提取部位对大肠杆菌、绿脓杆菌具有抑制作用，其中对绿脓杆菌抑制作用较强，对受试的金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌无抑制作用。其石油醚、醋酸乙酯提取部位只对受试细菌中的枯草芽孢杆菌有一定的抑制作用，对其他 3 种则无抑制效果，而水提取部位对受试的 4 种细菌均无抑制作
11、用。3 讨论紫金砂提取物及提取部位具有的一定抗菌活性。我们将对紫金砂氯仿和正丁醇提取部位的活性成分做进一步的追踪,再进行抗菌活性的测定,最终分离出其具有生物活性的单体成分。同时,该实验为抗菌药物的筛选、抗菌谱的测定、药价测定、提取过程的追踪等提供了可供参考的数据资料，为紫金砂的进一步开发利用提供了一些基础资料。【参考文献】1傅书遐.湖北植物志（3） M.武汉：武汉科学技术出版社，2002：237.2詹亚华.中国神农架中药资源M.武汉：湖北科学技术出版社，1994：418.3PachalyP,Kroll-HorstmannA,SinKS.Angelicastigmin,aneweserineal
12、kaloidfromAngelicapolymorphJ.Pharmazie,2000,55(10):777.4PachalyP,Kroll-HorstmannA,SinKS.Angelicastigmin,aneweserinealkaloidfromAngelicapolymorphaJ.Pharmazie,2000,55(10):777.45米彩峰,王长岱,乔博灵,等.拐芹根化学成分研究J.药学学报,1995,30(12)：910.6HataK,KozawaM,IkeshiroY.OnthecoumarinsoftherootsofAngelicapolymorphaMaxim.(Umbelliferae)J.YakugakuZasshi.1967,87(4)：464.7米彩峰,李富贤,石会丽.拐芹化学成分研究J.西北药学杂志,2003,18(5):207.8李端,周立刚,姜微波,等.伞形科植物抗菌成分的研究进展J.西北农林科技大学学报(自然科学版),2005,33(增刊)：161.9徐叔云，卞如濂，陈修.药理实验方法学，第 3 版M.北京：人民卫生出版社（北京） ，2002：1647.10张彩芳，张爱君.纸片扩散法药敏实验条件的选择J.宁夏医学杂志，2006,28(12):946.
