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1、溶菌酶,一、概述 二、来源 三、作用机制 四、应用与发展前景 五、分离提纯,溶菌酶又称胞壁质酶或N-乙酰胞壁质聚糖水解酶是一种能水解致病菌中黏多糖的碱性酶。溶菌酶相对分子质量为14.6X103，由129个氨基酸组成的单肽链蛋白质，含有4对二硫键。溶菌酶分子近椭圆形，它的构象比较复杂，螺旋仅占25%，在分子的一些区域有伸展着的片层构象。,概述,溶菌酶能专一性的作用于目的微生物的细胞壁,而不能作用于其它物质,是一种无毒、无害、安全性很高的盐基水解蛋白酶。白色或微白色冻干粉，溶于水，不溶于乙醚和丙酮，PI为11.0-11.35，最适pH值6.5。酸性介质中可稳定存在，碱性介质中易失活；96， pH值
2、为3条件下，15min后活力保持87%。1%水溶液在281.5nm处的吸光系数为26.4。储存条件：2-8C 。不会因为有机溶剂的处理而失活，当转移到水溶液中时，溶菌酶的活力可全部恢复。,返回,来源,最早对溶菌酶的研究起于 1907年发表的枯草芽孢杆菌中的溶解子,1922年，在人的唾液、眼泪中存在有能够溶解细胞壁杀死细菌的酶,因而被命名为溶菌酶。1937年从卵蛋白中分离出溶菌酶晶体,揭开了研究溶菌酶的历史篇章。1965年,英国的菲利普等用X衍射法对溶菌酶进行研究分析,第一个完全弄清了溶菌酶的立体结构。,在人体中，溶菌酶在细胞分泌液，如唾液、眼泪以及其他一些体液中广泛存在；也存在于线粒体中的细胞
3、质颗粒体中。,返回,作用机制,溶菌酶是从鸡蛋清中提炼的，蛋清里的溶菌酶可以保护胚胎在发育过程中免受细菌的感染。溶菌酶溶解细菌是通过水解细菌细胞壁多糖的糖苷键。 注：（敏感细菌革兰氏阳性细菌(gram-positive bacteria)的细胞壁多糖是N-乙酰氨基葡糖（N-acetylglucosamine, NAG）-N-乙酰氨基葡糖乳酸（N-acetylmuramic acid, NAM）的共聚物，其中的NAG及NAM通过-1，4糖苷键而交替排列。溶菌酶对于破坏G+细菌的细胞壁较G-细菌强。 ）,溶菌酶是一种葡糖苷酶，作用底物是几丁质。 溶菌酶的内部几乎全部是非极性的(nonpolar) 。
4、疏水的相互作用在溶菌酶的折叠构象中起重要作用。在溶菌酶分子的表面，有一个比较深的裂缝，其大小恰好能容纳多糖底物的6个单糖，这是溶菌酶的活性部位。活性部位所在的裂缝(cleft)正好被6个糖残基所装满，水解部位只能发生在D-E之间。,返回,应用,溶菌酶在食品工业中的应用,替代有害人体健康的化学防腐剂（如苯甲酸及其钠盐等），以达到延长食品货架期的目的 溶菌酶可以作为婴儿食品的添加剂，主要用于牛乳的“人乳化”（尤其在欧洲）。 溶菌酶是一种无毒、无害的高盐基蛋白质，且具有一定的保健作用，有抗感染和增强抗生素作用效力，促进血液凝固及止血作用，有组织再生作用。可以在保健食品中添加一定量以提高保健效果。,溶
5、菌酶在医药中的应用,复合溶菌酶对MRSA及中间型抗万古霉素金黄色葡萄球有显著的杀菌效果,是治疗烧伤创面感染的用药选择之一。 溶菌酶能抑制口腔龋齿的生长,抑制菌体糖酵解和产酸,溶菌酶对预防龋齿有一定作用。 溶菌酶参与机体内多种免疫反应,在机体正常防御和非特异性免疫中具有重要作用。 溶菌酶在治疗疱疹 、肿瘤方面有促进效用作用.,溶菌酶 裂解细菌，释放大量噬菌体,在畜牧业上的应用,溶菌酶作为饲料添加剂它与甘氨酸和聚合磷酸盐等配合使用，具有良好的防腐作用 。 溶菌酶对仔猪腹泻有防治作用 。 溶菌酶作为一种基因工程新药，在奶牛乳房炎的治疗上逐渐的被应用，以便减少抗生素的大量残留 。,在生物工程中的应用,
6、溶菌酶具有破坏细菌细胞壁结构的功能,以溶菌酶处理革兰氏阳性细菌可得到原生质体,因此溶菌酶是基因工程、细胞工程、发酵工程必不可少的工具酶。,眼泪中的溶菌酶能杀死细胞壁,返回,溶菌酶的分离与提纯,溶菌酶的纯化,离子交换层析法：离子交换层析（IEC）是基于待分离物质的酸碱性、极性等差异，它们与离子交换剂的亲和力不同，通过离子之间的吸附和脱吸附而将各组分依次从层析柱中洗脱下来，从而达到分离目的。 聚丙烯层析柱、 CM Sepharose FF（快速羧甲基琼脂糖凝胶）、 0.5 M NaCl洗脱溶菌酶、用考马斯亮蓝G-250检测杂蛋白的洗脱情况。,琼脂糖凝胶 OCH2COO-,NaCl,琼脂糖凝胶 OCH2COO- Na+,END,
