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1、保健食品中总黄酮、总皂甙、粗多糖的测定附录A（规范性的附录）保健食品中总黄酮的测定A.1 试剂A.1.1 聚酰胺粉A.1.2 芦丁标准溶液： 称取5.0g芦丁，加甲醇溶解并定容至100mL，即得50g/mL。A.1.3 乙醇 分析纯。A.1.4 甲醇 分析纯。A.2 分析步骤A.2.1 试样处理：称取一定量的试样，加乙醇定容至25mL，摇匀后，超声提取20min，放置，吸取上清液1.0mL，于蒸发皿中，加1g聚酰胺粉吸附，于水浴上挥去乙醇，然后转入层析柱。先用20mL苯洗，苯液弃去，然后用甲醇洗脱黄酮，定容至25mL。此液于波长360nm测定吸收值。同时以芦丁为标准品，测定标准曲线，求回归方程
2、，计算试样中的总黄酮含量。A.2.2 芦丁标准曲线： 吸取芦丁标准溶液：0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL于10mL比色管中，加甲醛至刻度，摇匀，于波长360nm比色。求回归方程，计算试样中总黄酮含量。A.3 计算和结果表示： 式中：X：试样中总黄酮的含量，mg/100g；A：由标准曲线算得被测液中总黄酮量，gM：试样质量，gV1：测定用试样体积，mLV2：试样定容总体积，mL计算结果保留二位有效数字。此方法选自保健食品检验与评价技术规范（2003年版）附录B（规范性的附录）保健食品中总皂甙的测定B.1 试剂B.1.1 Amberlite-XAD-2 大孔树脂，Sigma 化学公司
3、、U.S.AB.1.2 正丁醇 分析纯。B.1.3 乙 醇 分析纯。B.1.4 中性氧化铝 层析用，100-200目。B.1.5 高氯酸 分析纯。B.1.6 冰乙酸 分析纯。B.1.7 香草醛溶液 称取5g香草醛，加冰乙酸溶解并定容至100mL。B.1.8 人参皂甙Re 购自中国药品生物制品检定所。B.1.9 人参皂甙Re标准溶液：精确称取人参皂甙Re标准品0.020g，用甲醇溶解并定容至10.0mL，即每毫升人参皂甙Re2.0mg。B.2 仪器B.2.1 比色剂B.2.2 层析柱B.3 实验步骤B.3.1 试样处理B.3.1.1 固体试样：称取1.000g左右的试样（根据试样含人参量定），置
4、于100mL容量瓶中，加少量水，超声30min，再用水定容至100mL，摇匀，放置，吸取上清液1.0mL进行柱层析。B.3.1.2 液体试样：含乙醇的补酒类保健食品，吸取1.0mL试样（假如浓度高、或颜色深，需稀释一定体积后再取1.0mL）进行柱层析。B.3.2 柱层析：用10mL注射器做层析管，内装3cm Amberlite-XAD-2 大孔树脂，上加1cm中性氧化铝。先用25mL70%乙醇洗柱，弃去洗脱液，再用25mL水洗柱，弃去洗脱液，精确加入1.0mL已处理好的试样溶液（见B.3.1），用25mL水洗柱，弃去洗脱液，用25mL70%乙醇洗脱人参皂甙，收集洗脱液于蒸发皿中，置于60水浴挥
5、干。以此作显色用。B.3.3 显色：在上述已挥干的蒸发皿中准确加入0.2mL5%香草醛冰乙酸溶液，转动蒸发皿，使残渣都溶解，再加0.8mL高氯酸，均匀后移入5mL带塞刻度离心管中，60水浴加热10min，取出，冰浴冷却后，准确加入冰乙酸5.0mL，摇匀后，以1cm比色池与560nm波长处与标准管一起进行比色测定。B.3.4 标准管：吸取人参皂甙Re标准溶液（2.0mg/mL）100l放蒸发皿中，放在水浴挥干（低于60），或热风吹干（勿使过热），以下操作从“B.3.2柱层析”起，与试样相同。测定吸光度值。计算： 式中：X：试样中总皂甙量（以人参皂甙Re计），g/100g；A1：被测液的吸光度值；
6、A2：标准液的吸光度值；C：标准管人参皂甙Re的量，gV：试样稀释体积，mLm：试样质量，g计算结果保留二位有效数字。此方法选自保健食品检验与评价技术规范（2003年版）附录C粗多糖的测定C.1 试剂C.1.1 浓硫酸C.1.2 无水乙醇C.1.3 5%本分溶液C.1.4 80%乙醇溶液C.2 分析步骤C.2.1 试样处理：取本品50.0mL，加热浓缩至约10.0mL，放冷，加入40mL无水乙醇，3000转/分离心5min，弃去上清液，残渣用80%乙醇洗涤，离心（重复此过程2次），用水溶解残渣，定容20mL。此液即为样品处理液。C.2.2 标准曲线： 取葡聚糖标准溶液：0、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50mL，用水定容为1.0mL，加入0.5mL苯酚溶液，10mL浓硫酸，混匀，放置至室温，于L=1cm，波长=485nm测定吸光度，绘制 标准曲线。C.2.3 样品测定 取样品处理液0.5mL于具塞比色管中，以下同标准曲线操作。测定吸光度。C.3 计算和结果表示： X（mg/ml）=（C20020/10/0.5）/201000式中：X：试样中粗多糖含量，mg/mL；C：从标准曲线上查出的含量（g）4
