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1、免疫学检测技术,诊断疾病、研究发病机制、监测病情、评价疗效,测抗原、抗体； 免疫细胞数目、功能,体外抗原抗体结合反应的特点及影响因素,一、抗原抗体反应的特点,高度特异性 抗原抗体结合具有可逆性 抗原与抗体比例合适 抗原抗体反应的2个阶段：,1.高度特异性 抗原表位与抗体高变区间的互补结合,静电引力 范德华引力 氢键 疏水作用力,抗原抗体结合力示意图,2.抗原抗体的可逆结合,抗原抗体结合力,可逆性:抗原抗体为分子表面的非共价结合， 形成的复合物不牢固，一定条件下可解离为 游离抗原和抗体。,抗原抗体反应的可逆性,抗体分子一个抗原结合部位与一个相应抗原表位之间的结合强度 ，取决于二者空间构型互补的程
2、度,亲和力(affinity),抗原抗体的亲和性示意图,Ag-Ab结合的带现象,适宜的浓度和比例,第一阶段：特异性结合阶段，反应快，不可见 第二阶段：反应可见阶段，反应慢，出现凝集、 沉淀和细胞溶解等现象,抗原抗体反应的阶段性,二、AgAb反应的影响因素,AgAb浓度与比例影响最大 电解质 0.85NaCl 温度 37 酸碱度 PH68,抗原抗体反应的类型,凝集反应（agglutination reaction) 沉淀反应(precipitation reaction) 免疫标记技术,（一）凝集反应(agglutination),直接凝集反应 颗粒性Ag直接与待检Ab，反应出现的凝集现象。 玻
3、片法 如: ABO血型鉴定,颗粒性Ag 与相应 Ab结合后，出现肉眼可见 的凝集物。,单向免疫扩散(singlel agar immunodiffusion) 双向免疫扩散(double agar immunodiffusion),（二）沉淀反应 可溶性Ag 加相应Ab在电介质参与下，出现沉淀物。,原理示意图,Ab,Ag,模拟图,染色标本图,1.抗原抗体双向自由扩散 2.24小时出结果 3.呈现沉淀线或弧,免疫标记技术,按检测现象分为: 放射免疫技术 荧光免疫技术 酶免疫技术 化学发光免疫技术 金免疫技术,用荧光物质、放射性核素、酶或化学发光物质等标 记抗原或抗体，进行抗原抗体反应后，通过检测
4、标记 物对抗原或抗体进行定性、定位或定量分析,荧光素 ：异硫氰酸荧光素（黄绿色荧光）、藻红蛋白、 罗丹明（红色荧光）,放射性同位素： 125I、131I,酶：辣根过氧化物酶、硷性磷酸酶,免疫荧光检测法（IFA）,放射免疫检测法（RIA）,酶免疫检测法（EIA）,免疫标记技术,1. 酶免疫测定法(enzyme immunoassay，EIA),原理: 酶催化底物的高效性与Ag-Ab反应的特异性相结合，催化酶底物显色，判断结果。既可定性也可定量，其敏感度高。 (ng-pg/ml),标记酶: (HRP)；底物:邻苯二胺(OPD)， 二氨基联苯胺(DAB)。,酶联免疫吸附实验， 是应用酶标记的抗体（或抗原）在固相支持物表面检测未知抗原 （或抗体）的方法。,酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA),待测A,待测 B,待测 C,底物,显色:颜色的深浅与血清中抗体的量 成正比,包被乙肝 Ag,一抗: 人抗病毒抗体(IgG),二抗: 羊抗人IgG抗体-辣根过氧化物酶,酶联免疫吸附试验（ELISA）,金标记,
