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1、高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸的含量【摘要】目的建立以高效液相色谱法测定热毒平颗粒中绿原酸含量的方法。方法色谱柱为YMC公司ODS-A柱(150mm4.6mm,5m);流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液(1090),流速为1.0mL/min,检测波长为327nm。结果绿原酸的检测浓度在0.08480.848g范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999);平均回收率为102.60%,RSD=1.69%(n=6)。结论本法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。【关键词】热毒平颗粒;绿原酸;高效液相色谱法;含量测定热毒平颗粒由金银花、生石膏、玄参、地黄等中药制成,具有清热解毒之功效,用于治
2、疗流感、上呼吸道感染及各种发热等症1。绿原酸为该制剂主药金银花的主要有效成分,具有明显的抗炎、杀菌、抗病毒的作用2。笔者采用高效液相色谱(HPLC)法测定该制剂中绿原酸的含量,方法简便、快速,可用于热毒平颗粒的质量控制。1仪器与试药SP8800高效液相色谱仪(美国光谱物理公司);分析之星色谱工作站;紫外FOCUS检测器。绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号110753-200413);热毒平颗粒(天津中新药业隆顺榕制药厂,批号0602001、0602002、0602003)。乙腈为色谱纯,磷酸为分析纯,水为纯净水。2方法与结果2.1色谱条件及系统适应性试验色谱柱:YMC公司ODS-A柱(
3、150mm4.6mm,5m);流动相:乙腈-0.2%磷酸水溶液(1090);流速:1.0mL/min;柱温:室温;检测波长:327nm;进样量:10L。理论板数按绿原酸峰计应不低于3000,分离度1.5。色谱图见图1。2.2溶液的制备2.2.1对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品4.24mg,置于50mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,配成浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液,10以下保存。再精密量取4mL置10mL量瓶中,加50%甲醇溶解并稀释至刻度,制成含绿原酸0.0339mg/mL的对照品溶液。2.2.2供试品溶液的制备取本品7g,精密称定,研细,混匀,取约0.5g,
4、精密称定,放入具塞锥形瓶中,精密加入50%甲醇25mL,称定重量,密塞,超声处理(功率250W,频率33kHz)30min,放冷,再称定重量,用50%甲醇补足减失的重量,摇匀,以0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。2.2.3阴性对照溶液的制备按处方取除金银花的各味药材,按制法制得样品,再按2.2.2项下方法,制得阴性对照溶液。2.3标准曲线的建立精密吸取绿原酸浓度为0.0848mg/mL的对照品储备溶液1、2、4、8、10mL,置10mL量瓶中,加50%甲醇稀释至刻度,摇匀,在上述色谱条件下测定,以峰面积对浓度进行线性回归,得回归方程为:Y=55799416X-28478.3(r=
5、0.9999)。结果表明,绿原酸检测浓度在0.08480.848g范围内与峰面积呈良好线性关系。2.4精密度试验精密吸取对照品溶液10L,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积。结果RSD=0.52%,表明本方法精密度良好。2.5稳定性试验取同一批号(0602001)样品,按照2.2.2项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件分别在0、1、2、4、6、8h进样,测定绿原酸峰面积。结果RSD=0.64%,表明供试品溶液在8h之内稳定。2.6重复性试验取同一批号(0602001)样品精密称取0.5g,共6份,按照2.2.2项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件测定每份样品中绿原酸含量。结果绿原酸的平
6、均含量为1.190mg/g,RSD=0.88%,表明方法重复性良好。2.7加样回收率试验精密称取绿原酸对照品适量,配制成0.0124mg/mL的对照品储备溶液,取同一批号(0602001)样品,研细,混匀,取0.25g,精密称定,共6份,精密加入绿原酸对照品储备溶液各25mL,按照2.2.2项下方法制得供回收率用供试品溶液,按上述色谱条件测定,计算回收率。结果平均回收率为102.60%,RSD=1.69%。结果见表1。表1加样回收率试验结果(略)2.8样品含量测定取本品3批,按照2.2.2项下方法制备供试品溶液,按上述色谱条件进行测定,结果见表2。表2样品中绿原酸含量测定结果(略)3讨论取绿原
7、酸对照品的甲醇溶液,在190650nm波长范围进行扫描,在327nm波长处有较大吸收,与2005年版中华人民共和国药典中金银花的测定波长一致,故测定波长选定为327nm。以多种比例乙腈-0.2%磷酸溶液(1585、1387、1090)试验选择流动相3-5,当比例为1090时,绿原酸峰分离度大于1.5,保留时间为6.967min,主峰与杂质峰分离良好,同时无干扰峰,基线平直。【参考文献】1WS3-B-3965-98,中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第22册)S.2毕跃峰,田野,裴姗姗,等.金银花中裂环环烯醚萜苷类化学成分研究J.中草药,2008,39(1):18-21.3国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)S.北京:化学工业出版社,2005.153.4刘冰,王蓉华,徐永波.HPLC法同时测定银黄胶囊中绿原酸、黄芩苷含量J.中国药事,2006,20(5):303.5孟品佳,孙毓庆.高效液相色谱法分离金银花成份及测定绿原酸含量J.药物分析杂志,1990,10(1):58.
