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1、性病实验室检查 班后业务学习,地点：行政楼5楼会议室 时间：2014年11月23日,性传播疾病实验室 相关检查,一、梅毒、淋病、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、生殖器疱疹、软下疳、细菌性阴道病； 二、各性病的实验室检测的检测方法及临床意义；,概述,历史上：（传统） 把通过性活动传染的疾病称为性病 （Venereal diseases, VD） 主要指: 梅毒(syphilis) 淋病(gonorrhea) 性病肉芽肿 软性下疳四种 又称经典性病,概念更新,上世纪年代以来发现 许多病原体也可以通过性生活传播 概念有了大幅度的更新 迄今为止大约已发现余种性病 同时： 四种性病大都有了明确诊断手段及治疗方
2、法，明显地得到了抑制,性病的发病“顺位谱”，有了变化，鲜为人知的性病提前，而久为人知的性病占到了后位 1970年，世界卫生组织把旧名称“性病”改为“性传播疾病”。 （Sexually transmitted diseases, STD）,性病（VD）： 是指通过性交传染的、具有明显生殖器损 害症状的全身性疾病。4种 性传播疾病（STD）： 是指通过性接触可以传染的一组传染病,在 我国,人们简称为性病 。包容20余种,病毒,生殖器疱疹 单纯疱疹病毒(HSV) (主要由HSV-2引起) 生殖器CMV感染 巨细胞病毒(CMV) 乙型肝炎 乙型肝炎病毒(HBV) 甲型肝炎 甲型肝炎病毒(HAV) 尖锐
3、湿疣 人乳头瘤病毒(HPV) 生殖器传染性软疣 传染性软疣病毒 获得性免疫缺陷综合征(AIDS)人类免疫缺陷病毒(HIV),非细菌性微生物,性病性淋巴肉芽肿 (CTL型引起) 非淋菌性尿道(宫颈) 炎 沙眼衣原体(CTDK型引起) 解脲支原体（UU） 人型支原体(MH) 生殖道支原体(GU) 梅毒 梅毒(苍白)螺旋体(TP),细菌,淋病 奈瑟淋病双球菌(NG) 腹股沟肉芽肿 肉芽肿荚膜杆菌(DG,CBG) 软下疳 杜克雷嗜血杆菌（HD) 细菌性阴道炎 加特纳嗜血杆菌(GV) 志贺氏菌属 痢疾志贺氏菌感染 弯曲杆菌病 弯曲杆菌 B群链球菌 阴部感染及阴道病 细菌性阴道病 某些阴道厌氧菌,真菌,由
4、白色念珠菌/拟酵母菌： 念珠菌性阴道炎 念珠菌性龟头包皮炎 外阴阴道真菌感染 表浅部真菌： 股癣,原虫 ： 滴虫性阴道炎 尿道炎（阴道毛滴虫） 阿米巴病（溶组织阿米巴原虫） 蓝氏贾第鞭毛虫感染 体表寄生虫： 阴虱病（阴虱） 阴部疥（疥螨）,让患者能接受 社会性很强的疾病,我国重点防治的性病,艾滋病(AIDS) 梅毒(syphilis) 尖锐湿疣(condyloma acuminatum) 淋病(Gonorrhea) 生殖器疱疹(genital herpes) 非淋菌性尿道炎(NGU) 软下疳(chancroid) 性病性淋巴肉芽肿(lymphogranuloma Venereum),STD的诊
5、断： 病史接触史 临床表现 实验室检查 STD监测和疗效判断的重要依据 实验室检查,性病实验室检查特点,诊断技术种类较多（形态学、微生物学、免疫学、分 子生物学等许多检测方法） 临床检验工作中不确定性（需借助图谱病原体形态 典型和不典型，可借助书籍资料篇幅有限 疾病的社会性（健康、精神、经济、家庭和声誉）,性病实验室诊断原则,慎重：不能盲目滥用各种非标准检测方法、注重社会效益 和客观条件， 新技术：对待新技术一定要科学比对，慎重使用,梅毒,一、梅毒的临床分期,后天梅毒 ： 一期梅毒 二期梅毒 三期梅毒(晚期梅毒) 先天梅毒（胎传梅毒）,梅毒一期皮损-硬下疳,梅毒二期皮损,梅毒晚期损害,二、梅毒
6、的实验室诊断,1.检查病原体的试验 2.检测抗体血清学检查,检查病原体的试验,1.暗视野显微镜检查法（WHO推荐） 2.Fontana-Tribondean镀银染色法（难、敏感性差） 3.单克隆免疫银光法（DFI）-PCR,暗视野显微镜下见纤细螺旋状微生物，长约414 m，宽约2 m，814个规则的螺旋，折光性强，运动缓慢，有规律。 螺旋有三种活动方式，旋转式， 蛇形式，伸缩式。,暗视野显微镜检查临床意义,1.可确证梅毒-直接检查到梅毒螺旋体 2.对早期现症梅毒检测最好的方法（一期、二期梅毒皮损或淋巴节结、孕妇羊膜穿刺） 需要仪器设备：暗视野显微镜,选择试验注意事项,1.清洁皮损表面 用生理盐
7、水清洁，不能用消毒液 2.取材-渗出液、尽量避免出血（降低阳性率） 3.口腔溃疡要谨慎 4.阴性结果不能排除梅毒可能性-取材不当、皮损致数量不足、近期使用抗生素、损害接近自然消退等,梅毒血清学检查,【原理】当机体感染梅毒螺旋体后，经过一定潜伏期，在血清中产生一定数量的抗类脂质抗体（非特异性的反应素）和抗密螺旋体抗体（特异性免疫球蛋白），主要是IgG抗体，因此，可以用各种免疫学的方法来检测反应素或抗体，协助梅毒的诊断。,两组试验： 1.非梅毒螺旋体抗原血清学试验 2.梅毒螺旋体抗原血清学试验 两组试验的目的都是检测抗体 非梅毒螺旋体抗原血清学试验（抗-脂质抗体-非特异性） 梅毒螺旋体抗原血清学试
8、验（抗-梅毒螺旋体抗体-特异性）,非特异性梅毒的血清学初筛试验,方法： 1.性病研究实验室试验VDRL 2.不加热血清反应素试验USR 3.快速血浆反应素环状卡片试验RPR 4.不加热甲苯胺红血清试验TRUST,1.性病研究实验室试验（venersal disease research laboratory test，VDRL)： VDRL试验所用抗原是从牛心中提取心磷脂加上卵磷脂和胆固醇，梅毒螺旋体在破坏组织的过程中，体内释放一种抗原性心磷脂，它刺激机体产生反应素，这种反应素与牛心中提取的心磷脂在体外有抗原抗体反应。,实验步骤： 将待检血清先灭活，吸取0.5ml血清滴入玻片的圆圈中，使血清涂
9、布扩散到整个圆圈。用1ml注射器装上专用针头取一滴抗原试剂加入圆圈内。用转动器或手转动玻片4min，每分钟约180次左右，立即判断结果。 *试验时应用已知阳性血清对照。,结果判定： “”阴性:仅见微小颗粒，液体浑浊。 “+”弱阳性:肉眼见小的块状物或者用放大镜见到块状物，液体浑浊。 “+“阳性:肉眼见大的或中等大的块状物。,VDRL玻片定量试验： 将待测血清用生理盐水在小试管中作6个稀释度，原倍血清、1:2、1:4、1:8、1:16、1:32，每个稀释度样本取0.5ml加于玻片圆圈中，按定性的方法测定和判断结果。,2. 不加热血清反应素试验（unheated serum reagin test
10、，USR）： 该试验用改良的VDRL抗原，稀释后离心沉淀，于沉淀中加入EDTA（二胺四乙酸二钠）氯化胆碱可起化学“灭活“作用，所以血清不必灭活，抗原不必每天配制，在48冰箱中保存6个月。,(1) USR玻片定性试验 方法： 吸取50l血清放入反应板圈内，并均匀涂布整个圈。 将USR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加1滴抗原液。 将反应板置旋转器旋转4min，(1805)r/min。 立即用肉眼或显微镜观察结果。 本实验应用已知阳性血清作阳性对照。,结果判定： 根据凝集反应絮状物大小判断阳性程度 强阳性(34+)： 大或中等大小的絮状物，溶液清亮。 阳性(2+)： 絮状物比较小，悬液
11、较清亮。 弱阳性(1+)： 絮状物比较小，均匀分布，液体混浊。 可疑()： 抗原颗粒较粗一般属于阴性反应。 阴性()： 抗原颗粒均匀，针状细小。,（2）USR定量试验 正反应板圆圈内加入50l等渗盐水(一般做6个滴度，有必要者应继续稀释)。 吸取50l血清加到第一孔混匀后，再吸取50l至第二孔稀释，依此作倍比稀释(1:21:64)，最后所稀释的圆圈内应弃去50l 每个圆圈加1滴抗原混匀，将反应板置旋转器旋转4min，(1805)转/min。观察结果同定性试验。 记录出现1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。,3. 快速血浆反应环状卡片试验（rapio plasma reagin card
12、 test，RPR) 原理与USR试验基本相同，其优点是RPR抗原中加入了活性碳颗粒，试验在特制的白色纸卡上进行，因此，容易判断结果，肉眼即可观察，不需显微镜，血浆也可进行检测。,(1) RPR定性试验 吸取50l血清或血浆放在白色卡片圈内，并均匀涂布整个圈内(每张卡片有10个或12个反应圈)。 将RPR抗原轻轻摇匀，用标准针头吸取抗原，每个标本中加1滴抗原。 将卡片置旋转器旋转8min，(1005)转/min。 立即在明亮光线下观察结果。,结果判定： 阳性：圆圈内出现小至大的黑色絮状物为阳性，不分其阳性的程度。必要时可以依絮状物的大小和多少，用“+”号表示。 阴性：圆圈内仅见碳颗粒集于中央一
13、点或均匀分散为阴性。,(2) RPR定量试验 在纸卡圆圈内加入50l等渗盐水(一般做6个滴度，超过者应继续稀释)。 吸50l血清或血浆系列稀释(1:21:64)，最后所稀释的圆圈内应弃去50l。 滴加1滴抗原混匀，旋转时间、速度、观察结果同定性试验。 记录出现1+阳性反应的最高血清稀释倍数，即抗体效价。,4.甲苯胺红不加热血清试验（TRUST） 【原理】 TRUST试验原理与RPR试验原理相同，差别在于TRUST抗原中加入甲苯胺红染料颗粒代替碳颗粒作为指示物，使阳性结果出现红色絮状凝集现象，阴性结果甲苯胺红颗粒聚集于中央一点或均匀分散。,【方法】 TRUST试验方法同RPR试验。 【结果】 T
14、RUST试验结果判断同RPR试验。,【注意事项】 1实验环境适宜温度为2329；抗原应保存在4冰箱；应防止冻结，以免破坏；实验前抗原恢复到室温。 2校准针头，RPR、TRUST等抗原(用9号针头)为601滴/ml，USR抗原(用12号针头)为451滴/m1。一般试剂盒内已有配套专用针头。 3用旋转式摇床，不用平衡式振荡仪。 4试验完毕，立即观察结果。,5为防假阴性，试验最好用纯血清。 6初筛试验阳性特别是初诊患者，应做确证试验以排除生物学假阳性。 7避免出现“前带”现象，对可疑者应将血清稀释后测定。 8定性试验阳性都必须做定量试验，阳性者需了解抗体效价的高低，以便监视疾病活动情况和观察疗效。定
15、量试验还可排除“前带现象“。,四种初试验筛方法的比较,四种初筛方法,原理：相同 目的：相同 临床意义：相同 不同：方法学上改良,四种初筛方法,原理： 当人体感染梅毒螺旋体4周10周左右后，血清中可产生一定数量的抗类脂质抗原的非特异性反应素抗体(主要是IgM和IgG) 目的： 检测 抗-脂质抗体,四种初筛方法,方法： 定性法-意义局限 定量抗体的效价滴度（倍比稀释） 通过看化验单可判别定量或定性 阳性 原倍、1：2/1：4/1：8/1:64,梅毒初筛试验定性定量,阴性 原倍 1：2 1：4,梅毒血清学初筛实验临床意义,1.辅助诊断梅毒 初筛实验有较高的敏感性和特异性 2.观察滴度变化可用于疗效观察 3.鉴别早期或晚期梅毒（前滴度快后慢） 4.鉴别先天性梅毒（被动出生3-4月转阴，不降反升） 5.发现复发或再感染病人复发或再感染时 血清阳转或滴度上升，定量试验2次结果，滴度上升2个稀释度以上（ 1:21:8以上 ）才可判断为上升，要排除技术性因素，相同的实验方法才能进行滴度比较 6.梅毒的筛查试验,注意事项,假阳性 ： 1生理性 孕妇0.4% 2胶原性或自身免疫性病 麻风、系统红斑狼疮 3某些急性发热病 后 风疹、疟疾
