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1、2018-07-23,微生物及无菌 基础知识培训,简单的说，微生物就是微小的生物。是一群个体微小、结构简单、肉眼不能直接看到，必须借助光学显微镜或电子显微镜放在几百倍、几千甚至几万倍才能看到的微小生物。,微生物的概念,微小生物,个体 微小,结构 简单,肉眼不能看到,借助 显微镜,微生物的分类,病毒,立克次体,支原体,细菌,放线菌,螺旋体,真菌,微生物的五大共性,分布广种类多,体积小面积大,吸收多转化快,生产旺繁殖快,适应强易变异,微生物生长所需营养物质,影响微生物生长的因素,微生物的生长繁殖周期,菌落的概念,单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细
2、胞集团，这就是菌落,生长 繁殖,形态 构造,母细胞 为中心,子细胞 集团,肉眼 可见,芽孢,某些细菌（杆菌），在其生活的某一阶段可于细胞浆内形成圆形或卵圆形的特殊结构称为芽孢。芽孢对干燥、热和化学药品的抵抗力较强。,灭菌的概念,用物理或化学方法杀灭传播媒介上所有的微生物，使其达到无菌。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）,无菌的概念,是指物体或任一介质中没有活的微生物的存在，即无论用何种方法，检不出活的微生物,灭菌保证水平,灭菌保证水平 （SAL） 灭菌处理后单位产品上存在活微生物的概率，通常表示为 10-n ，本规范规定为 10 -6 ，即经灭菌处理后，每件物品中有菌生长的概
3、率是 1/106 。 F0=8为残存概率法 F0=12为过度杀灭,举例说明,例如: 1,000,000个细菌 死亡率为90%每分钟 1st min.- 900,000 / 100,000 2nd min.- 90,000 / 10,000 3rd min.- 9,000 / 1,000 4th min.- 900 / 100 5th min.- 90 / 10 6th min.- 9 / 1 7th min.- 0,无菌药品的概念,是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。,无菌药品分类,1. 采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品。 2. 部分或全部工序采用无菌生
4、产工艺的为非最终灭菌产品。,两种灭菌方式比较,无菌操作的概念,指在操作中，采用或控制一定条件，尽量避免产品污染微生物的一种操作方法程序。为此目的，所用的一切物品、环境，均应事先灭菌，操作也应在无菌操作室中进行,无菌意识,常用的灭菌方法,干热 灭菌,湿热 灭菌,化学 灭菌,过滤 灭菌,辐射 灭菌,1、干热灭菌,干燥 条件,160170 24小时；,180200 0.51小时；,250 1小时。,135145 35小时；,2、湿热灭菌,高压蒸汽（纯蒸汽）灭菌法是最为可靠的灭菌方法，一般为121，20分钟或115，60分钟，使用时需将空气排尽。,气体灭菌法,利用环氧乙烷或甲醛杀微生物的一种方法。,液
5、体灭菌法,是用药液杀灭微生物的方法。通常使用的有乙醇（酒精）、甲酚、苯酚水或福尔马林水等。常用于气体、热不稳定的药品溶液或原料的除菌。,化学灭菌,4、过滤灭菌,过滤灭菌法,即用筛除或滤材吸附等物理方式除去微生物,是一种常用的灭菌方法。对不耐热液体,过滤是唯一实用的灭菌方法。 过滤法不是将微生物杀死，而是把它们排除出去。 过滤法的最大缺点是不能滤除病毒。,5、辐射灭菌,紫外线灭菌法 是利用照射紫外线杀灭微生物的一种方法。 波长：200300nm； 高度：1M； 使用寿命；2000h;,消毒的概念,用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但
6、不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。,防腐的概念,防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法,污染,污染的定义：当一个产品存在有不需要的物质时，它即受到污染。 污染的形式：尘粒污染、微生物污染 传播媒介：空气、水、表面、物料、人。,03,衣着,02,水滴,01,人的头发和皮肤,途径,04,化妆品和珠宝手饰,途径,途径,途径,01,人及其活动产生大量的尘埃粒子污染洁净室。,02,03,04,人身上携带的各种微生物污染洁净室。,手是一个重要的污染源。,口腔、鼻腔、头发也是污染源。,为什么说人是洁净室最大的污染源?,8003500个/m3,空气中,107个/ml,污染水,140万个/cm2,头皮
7、上,440万个,两手上,38亿个/g,指甲垢,臭男人,1000个以上/min,男性,750个以上/min,女性,不穿洁净服,穿洁净服,10300个/min,静止,1501000个/min,稍动,9002500个/min,行走,70700个/次,咳嗽,40006万个/次,喷嚏,人是洁净室最大的污染源，占90%左右。,洁净厂房设计规范 GB 50073-2013,所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。,行为规范,1、不要将个人的手机手表首饰佩饰带入洁净区 2、不要化妆或者使用容易造成洁净区污染的护理用品 3、工作服（手套/头罩/眼罩/鞋套）必须有效阻挡人体污染物 4、不得用手开关门，要
8、用背部或者肘部，最好是非接触式 5、任何操作应尽可能轻缓，幅度要小，避免对气流的扰动 6、手指接触培养皿取样，手消毒 7、生产操作时候，不得落手接触药品，身体任何部位应尽可能绕开产品上空 8、打开或者盖上培养皿是不得使身体任何部位经过上空 9、触摸屏操作或者按键操作应使用手指背部 10、物品洒落地上不要拣起来使用 11、工作服尽量不接触墙面、设备，任何时候不得接触地面 12、接触药品前必须手消毒 13、尽可能不要讲话 14、站姿、坐姿、操作动作一定要轻柔缓慢,尘粒,需要对环境中尘粒及微生物数量进行控制的房间（区域），其建筑结构、装备及其使用应当能够减少该区域内污染物的引入、产生和滞留,微生物,
9、控制,数量,洁净区的概念,悬浮粒子,微生物,控制原则,39,控制尘粒及微生物的意义,微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1m以下者处于悬浮状态，10m以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。所以也要对尘粒进行控制。,控制尘粒及微生物的意义,自100多年前出现注射用药至今，非肠道所用医用制品中的热原对人体的危害即热原反应已经人所共知;大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了712m的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血
10、栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如果污染了细菌，轻则局部红肿化脓，重则引起全身细菌性感染。,控制尘粒及微生物的意义,注入人体的注射剂中含有热原量达1g/kg就可引起不良反应，发热反应通常在注入1小时后出现，可使人体产生发冷、寒颤、发热、出汗、恶心、呕吐等症状，有时体温可升至40以上，严重者甚至昏迷、虚脱，如不及时抢救，可危及生命。该现象称为“热原反应”。,败血症流行事件,山东欣弗注射剂,黑龙江刺五加注射剂,国内外染菌注射剂致死事件,2008,2006,1970,历史药害事件回顾,什么是热原,发展历程,1876年,1921年,1876年从腐肉中分离出一种不带活菌而能致热的物质,当时称之为
11、热原。,1921年以后,逐渐认识到这些药液之所以引致发热,系因被微生物污染因微生物代谢产物所致。,1942年,1942年美国把热原家兔试验法收载入药典后,发现霉菌,立克次氏休、病毒、酵母菌也能产生热原。,国内GMP可以接受的观点是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。,国内,欧洲药典委员会副主席,业内,医药工业普遍接受控制内毒素等于控制热原。,严格地讲，不是每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。,各方看法,目前国内外仍未有统一的认识，但从国内外文献报道中，一个共同的意见，都普遍认为：它是指细菌内毒素的脂多糖。,热原的概念,系指能引起恒温动物体温异常升高的致热物
12、质，是微生物在生长繁殖过程中产生的一种能引起恒温动物体温异常升高的内在的毒素。,细菌毒素分类,一类为外毒素：它是一种毒性蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是革兰氏阳性菌。 一类为内毒素：是革兰氏阴性菌的细胞壁的一种脂多糖和微量蛋白结合的复合物。它的特殊性不是细菌或细菌的代谢产物，而是细菌死亡或解体后才释放出来的一种具有内毒素生物活性的物质。内毒素主要的化学成分是脂多糖中的类脂A成分。,革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。 细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。 常见的革兰氏阳性菌有
13、：葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、白喉杆菌、破伤风杆菌等；-对青霉素敏感。 常见的革兰氏阴性菌有：大肠杆菌、痢疾杆菌、肺炎杆菌、霍乱弧菌、百日咳杆菌。,革兰氏染色反应,致热能力,最强:革兰氏阴性杆菌的产物; 其次:革兰阳性杆菌类; 较弱:革兰阳性球菌; 霉菌、酵母菌、病毒也能产生热原。,热原分类,外热原（包括细菌性热原(由微生物产生的)和化学性热原） 内热原（包括内源性高分子热原和内源性低分子热原）。 外热原由微生物所产生。,01,外热原,包括细菌性热原(由微生物产生的)和化学性热原,02,内热原,内热原（包括内源性高分子热原和内源性低分子热原）,热原分类,+,01,+,02,+,03
14、,+,04,+,05,热原的性质,不挥发性,耐热性,水溶性,不耐强酸碱、 强氧化剂,过滤性,输液器,01,制药用水,02,原辅料,03,容器 用具,04,管道 设备,05,制备 过程,热原的污染途径,06,热原的常用消除方法,高温法: 18034h、20060min或2503045min或6501分钟等可使热原彻底破坏。（药典为250摄氏度至少1小时。） 因此耐热物品如玻璃制品、金属制品、生产过程中所用的容器和其它用具以及注射时使用的注射器等，均可采用此法破坏热原。,热原的常用消除方法,酸碱法: 热原能被强酸、强碱、强氧化剂破坏。玻璃容器及用具如配液用玻璃器皿、输液瓶等可用重铬酸钾硫酸清洁液或
15、稀氢氧化钠处理，破坏热原.,热原的常用消除方法,超滤法 热原分子量为1106左右，体积较小，约15nm，可以通过一般滤器和微孔滤膜，但采用超滤法如用孔径小于1nm的超滤膜可除去绝大部分甚至全部热原。,热原的常用消除方法,吸附法 热原在水溶液中可被活性炭、石棉、白陶土等吸附而除去。由于活性炭性质稳定、吸附性强兼具助滤和脱色作用，故广泛用于生产，但应注意吸附药液所造成的主药的损失。,热原的常用消除方法,蒸馏法 : 热原能溶于水但不挥发，但可随水蒸气的雾滴进入注射用水中，因此制备注射用水时，原水中的热原可经蒸馏除去，但需多次蒸馏，并加有隔沫装置，单次蒸馏往往效果不理想。,热原的常用消除方法,其它 包
16、括离子交换法、凝胶滤过法、反渗透法等。,常用消毒剂,消毒剂分类,酚、醇、醛、酸、碱及其相应的盐类、氧化剂与卤素类、表面活性剂类、重金属类等。- HUGO（1978）国际消毒剂权威组织,高效,高效消毒剂：可以杀灭一切微生物，包括细菌、真菌、细菌芽孢、病毒的消毒剂。 依据消毒效果和实用性依次为过氧化物（过氧乙酸、过氧化氢）、醛制剂（甲醛、戊二醛）、强酸制剂（盐酸、磷酸）、强碱制剂（烧碱）等。,中效,中效消毒剂是指除对有芽孢的细菌和多数亲水病毒无效外 ，能杀死细菌繁殖体、真菌和大多数病毒的消毒剂。 酚制剂、氯制剂、碘制剂、醇制剂等。,低效,低效消毒剂：指可杀灭多数细菌繁殖体、部分真菌和亲脂病毒，但不能杀灭细菌芽孢、结核杆菌以及某些真菌和亲水病毒的消毒剂。季铵盐类，如洗必
