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1、44文件编号：LABOPMY020第 页，共 页 版本：A/0生效日期：2008-02-01XXXXXX 医院检验科免疫室分析项目作业指导书 Elecsys E 170/E 411硫酸脱氢雄甾酮（DHEA-S）1. 分析原理 采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1步：15l标本与生物素化的抗DHEA-S抗体混匀，形成免疫复合物，数量取决于标本中待测物的浓度。 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒和钌（Ru）标记的DHEA-S衍生物。生物素化的抗DHEA-S抗体上未结合的位点被占据，形成抗体-半抗原复合物，通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过
2、磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。2. 标本要求 血清：按标准常规方法采集。 血浆：肝素、EDTA-K3、枸橼酸钠、氟化钠和草酸钾抗凝均可。标本在28度可稳定2天，-20度可稳定2个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。3. 试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，6.5ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物
3、素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。R1：生物素化的兔抗DHEA-S抗体（灰盖），1瓶，9ml。浓度600ng/ml，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.8。含防腐剂。R2：Ru(bpy)32+标记的DHEA-S（黑盖），1瓶，9ml。浓度0.5ng/ml，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH6.8。含防腐剂。校准品：Elecsys DHEA-S定标液（CalSet）,货号03000095质控品：Elecsys 通用质控品（PreciControl Universal）1和2, 货号1731416其他所需材料： Elecsys2010、cobas e411分析仪需要 Elecsys
4、系统缓冲液（ProCell）货号11662988 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号11662970 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号11930346 Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean) ）货号11933159Elecsys 2010反应杯（Assay Cup) 货号11706802 Elecsys 2010吸样头（Assay Tip) 货号11706799 E170分析仪需要 Elecsys系统缓冲液（ProCell M）货号12135019 Elecsys测量池清洗液（CleanCell M）货号12135027 E
5、lecsys系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号03023141 Elecsys反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M)货号12102137 Elecsys废物盒(wasteliner)货号03023150 Elecsys系统清洗液支架(SysClean Adapter M) )货号03027651各种分析仪均适用的材料 Elecsys 系统清洗液（SysClean） 货号112985004. 仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪 仪器校准：每
6、批DHEA-S试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用CalSet定标液定标。 定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： Elecsys2010、E170或cobas e： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 各种分析仪均适用的情况： 根据要求进行标定：如质控结果超出范围时。5. 操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2
7、进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Tests
8、lection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。6. 质量控制 Elecsys 通用质控品（PreciControl
9、Universal）1和2以及其它合适的质控品。各浓度区域的质控至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。7. 计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算DHEA-S含量,单位是mol/l，g/dl或ug/ml 换算方法 mol/l36.846=g/dl g/dl0.02714=mol/l8. 参考范围9. 分析性能 检测范围：0.00327mol/l或0.1001000g/dl 高于检测范围的标本可用低DHEA-S含量的人标本稀释。建议1:5稀释。稀释后的标本DHEA-S含量必须高于1.5mol
10、/l或45g/dl。如内源性DHEA-S可忽略不计，结果应乘上稀释倍数或按以下公式计算： C=c+4(c-D) C=标本中真实的DHEA-S浓度；c=测得的DHEA-S浓度；D=稀释液中DHEA-S浓度10. 干扰因素 该方法不受黄疸（胆红素13mg/dl）、溶血（血红蛋白0.56g/dl）、脂血（脂质2000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。 不受类风湿因子干扰（600U/ml）。 17种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体的干扰。 Elecsys DHEA-S测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。
11、11. 临床意义 DHEA-S属类固醇激素，由前体胆固醇在肾上腺皮质区合成而来。测定DHEA-S是辅助诊断多毛症和女子男性化的重要手段，此外还可用于androgenisation、高催乳素血症、多囊性卵巢综合征的诊断和排除肾上腺皮质产生雄激素的肿瘤。 DHEA-S仅有微弱的雄激素活性，但其代谢产物，如雄烯二酮和睾酮，有较强的雄激素活性，能间接地引起多毛症和女子男性化症。从7岁起DHEA-S升高，30岁后开始又逐步下降。单纯的DHEA-S升高有临床意义。其它可导致DHEA-S过度产生的因素还有遗传性肾上腺皮质酶缺少、肾上腺皮质增生及产生雄激素的肿瘤。 DHEA-S分泌进入血流的速率仅稍高于DHE
12、A，但由于DHEA-S的半衰期约为一天，其浓度要高出1000倍。与其它类固醇激素比较，DHEA-S在体内循环时不与载体蛋白质结合，加上浓度高和变化小，是了解肾上腺皮质雄激素产生情况的良好指标。与睾酮一起，DHEA-S测定是了解多毛症患者体内雄激素水平是否升高的初筛试验中值得选择的方法。约84%的患多毛症妇女雄激素升高。该测定的主要目的是排除产生雄激素的肿瘤（来自于肾上腺皮质或卵巢）。在妇女此类肿瘤产生的DHEA-S高于700g/dl。 Elecsys DHEA-S采用竞争法原理和DHEA-S特异的多克隆抗体。标本中内源性的DHEA-S与钌标记的DHEA-S衍生物相互竞争生物素化抗体上的结合位点。13参考文献编写： 审核： 批准：批准日期： 年 月 日
