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1、密级 密编号文件名称 Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪操作、维护、维修及校准版本 第版编订人 批准人 分发号审核人 复制份数 颁布日期1. 目的此 SOP 为 Agilent 1260（Chemstation）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准提供指导。2. 范围此 SOP 适用于仪器管理员和实验人员对 Agilent 1260（Chemstation ）高效液相色谱仪的操作、维护、维修及校准。3. 定义无4. 职责4.1 仪器管理员4.1.1 负责对实验人员进行培训。4.1.2 负责确保实验人员遵循此 SOP 中的规定。4.1.3 负责对仪器的维修及校准。
2、4.1.4 登记仪器的故障检查及处理情况。4.2 实验人员4.2.1 按照此 SOP 中描述的程序进行操作和维护。4.2.2 登记仪器使用情况和日常维护情况。4.2.3 液相色谱仪或程序发生故障时需立即通知仪器管理员。5. 程序5.1 操作步骤5.1.1 查看仪器的校验标志，未经校验的仪器不得使用。5.1.2 检查仪器使用记录登记，了解前一次仪器使用情况及仪器完好情况。5.1.3 开机5.1.3.1 准备好流动相5.1.3.2 打开计算机电源，输入用户名和密码，进入 Windows 2007 画面。5.1.3.3 打开 1260 HPLC 各模块电源。双击桌面上 “HPLC 1260（联机）”
3、图标，出现登录画面，在“登录名”中输入用户名，“密码”中输入密码，点击“确定”。工作站自动与 1260 HPLC 通讯，进入联机工作站画面。切换至“方法和运行控制”界面。本仪器有两名管理员，用气用户名和密码进入系统可增加用户，设定权限。可有多名实验人员，实验人员可进行方法、序列和报告的创建和修改。5.1.4 更换色谱柱安装色谱柱，确保管路管口顶住柱芯，旋紧螺帽。确保色谱柱的方向正确。5.1.5 排气5.1.5.1 把流动相放入溶剂瓶中。5.1.5.2 检查泵密封垫清洗溶剂瓶中的 15%异丙醇是否足量，是否干净。在泵运行前，右键点击系统视图中的四元泵模块，选择“控制”，泵密封垫清洗组件下勾选“定
4、期”，设置“周期”和“开启时间”，点击确定。5.1.5.3 打开排气阀，为各个泵排气，设置泵的参数，右键点击四元泵模块，勾选溶剂 A，设定比例为 100%，流量设为 5.0 mL/min，运行 2 分钟后，依次用同样的方法设置溶剂 B、溶剂 C、溶剂 D。4 个泵排气完成后，每个泵比例设为 25%，流量为 5.0 mL/min，混合脱气 2 分钟，待排气完成后停泵，关闭排气阀。5.1.6 方法，序列及数据路径及文件名的设置。5.1.6.1 进入脱机工作站：双击桌面上“HPLC 1260（脱机）”图标，进入脱机工作站画面。5.1.6.2 方法：文件夹图标“调用方法”选择“仪器名方法”文件夹新建文
5、件夹“项目名”在“项目名”下新建“项目”最后一个文件夹中以当日的日期为文件名。5.1.6.3 序列：文件夹图标“调用序列模板”选择“仪器名序列”文件夹新建文件夹“项目名”在“项目名”下新建“项目”保存序列时以最后一个文件夹中以当日的日期为文件名。5.1.6.4 数据：文件夹图标“调用数据”选择“仪器名数据”文件夹新建文件夹“项目名”在“项目名”下新建“项目”在“项目”文件夹下新建当日检测文件夹在其中新建“日期”文件夹，序列数据名保存为“001，002，.”。（仪器数据存储路径暂时无法更改）5.1.7 新建及调用方法5.1.7.1 新建方法5.1.7.1.1 在联机工作站画面，切换至“方法和运行
6、控制”界面。选择“方法”菜单下的“新建方法”，调用化学工作站的缺省方法 DEF.LC.M。5.1.7.2 设置仪器参数5.1.7.1.2.1 设置进样器：右键点击进样器模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：设置进样量；“针清洗”项下勾选“启用洗针”并设置洗针瓶位置；“停止时间”项下点选“与泵一致/无限制”；其他选项一般采用默认设置。5.1.7.1.2.2 设置四元泵：右键点击四元泵模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：设置流量；“溶剂”项下勾选所用溶剂，并设置溶剂百分比和名称；“停止时间”项下设置采集时间；“后运行时间”是一次运行结束后，到第二次进样前的等候时间，做梯度洗脱
7、时，一定要设置该数值，等待系统中的流动相真正变成下一次进样的初始比例；在“时间表”处设置梯度洗脱程序，规定溶剂比例变化方式，要注意程序时间与“停止时间”和“后运行时间”之间的协调关系；其他选项一般采用默认设置。5.1.7.1.2.3 设置柱温箱：右键点击 TCC 模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：在“温度”项下选择柱温箱左侧及右侧控温模块的控温模式，设置温度；“停止时间”项下点选“与泵一致/无限制”；其他选项一般采用默认设置。5.1.7.1.2.4 设置 DAD 检测器：右键点击 DAD 模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：在“信号”项下勾选需要采集的通道，设置波长、
8、带宽、参比波长和参比带宽，波长一般选择化合物吸收光谱的最大吸收波长处，且大于溶剂的截止波长 20 nm 以上，参比波长设在样品没有吸收处，另外要求参比带宽带宽（样品）狭缝；“光谱”项下选择采集吸收光谱时的参数，存储一般选择“全部”，其他采用默认设置；“停止时间”项下点选“与泵一致/无限制”；“采集期间需要开启灯”项下点选“UV 灯”，如果当前所编辑的方法为冲洗色谱柱的方法或使用 RID 检测器的方法，建议取消 “UV 灯”； 其他选项一般采用默认设置。5.1.7.1.2.5 设置 RID 检测器：右键点击 RID 模块，选择“方法”。在弹出的界面下进行如下设置：“光学设备温度”项下设置检测器温
9、度；“信号极性”设置色谱峰的正负极性，一般点选“正（+）” ；“停止时间”项下点选“与泵一致/ 无限制”；“后运行时间”项下一般点选“关闭”；“分析前自动归零”点选“开启”；“分析后自动循环”用以选择运行结束之后溶剂是否自动循环回收，一般选择“打开”；“自动清洗”项下一般不勾选，因为使用 RID 时一般不使用变化的流动相组分；其他选项一般采用默认设置。5.1.7.1.3 保存方法：从“方法”菜单选择“保存方法”或“方法另存为”保存方法。5.1.7.3 调用方法调用已设置好的方法：选择“方法”菜单下的“调用方法”，选择相应方法文件，如需修改按照 5.1.7.1 进行。5.1.8 新建及调用序列5
10、.1.8.1 新建序列5.1.8.1.1 在联机工作站画面，切换至“方法和运行控制”界面。选择“序列”菜单下的“新建序列模板”，调用化学工作站的缺省序列模板 DEF.LC.S。5.1.8.1.2 命名“首选项”中的序列数据文件夹：从“视图”菜单下选择“首选项”，在“序列”选项卡下的“数据存储”部分选择“专有文件夹创建启用”功能；可在“命名模式”部分规定运行序列所得到的序列数据文件夹的名称。5.1.8.1.3 编辑“序列参数”和“序列输出”：从“序列”菜单下选择“序列参数”，在“序列参数”选项卡下指定数据文件的存储路径，规定数据文件的命名方式；在“序列输出”选项卡下指定序列总结报告的输出方式和模
11、板。5.1.8.1.4 编辑“序列表”：从“序列”菜单下选择“序列表”或点击系统视图中部的样品小瓶图标进入序列表编辑界面。在“样品位置”列输入样品瓶号；“样品名称”列输入样品名称；“方法名称”列点击序列表上方“浏览方法”调用编辑好的方法；“进样量”列输入进样体积；“进样次数”列输入进样次数；“样品类型”列选择样品的类型，包括样品（普通样品）、标准样品、质控样品和空白；其他列一般不用填。5.1.8.1.5 保存序列：从“序列”菜单选择“保存序列模板”或“序列模板另存为”保存序列模板。5.1.8.2 调用序列调用已设置好的序列：选择“序列”菜单下的“调用序列模板”，选择相应的序列文件，如需修改按照
12、 5.1.8.1 进行。5.1.9 样品测定5.1.9.1 单个样品测定：点击菜单栏下方的单个样品瓶图标，“选择运行方法任务”，点击系统视图的“单次样品”，开始单次样品运行，在四元泵模块设置停止时间或点击系统视图的“停止”，停止单次运行。5.1.9.2 序列测定：从“运行控制”菜单选择“运行序列”或点击菜单栏下方的多个样品瓶图标，“选择序列任务”，点击系统视图中部的样品小瓶图标进入序列表界面，点击右下方“运行”，开始运行序列。5.1.10 数据处理5.1.10.1 双击桌面上“HPLC 1260（脱机）”图标，出现登录画面，在“登录名”中输入用户名，“密码”中输入密码，点击“确定”。工作站自动
13、与 1260 HPLC 通讯，进入脱机工作站画面。切换至“数据处理”界面。5.1.10.2 调用数据文件：从“文件”菜单下选择“调用信号”，选择所需数据文件。可以从“文件信息”中查看数据的信息。也可以在调用数据的窗口中指定调用哪一张色谱图。点击“文件”菜单下的“重叠信号”可以在同一个窗口中叠加调用色谱图。5.1.10.3 按要求设置合适的积分事件，保存方法。积分事件将被应用于序列所有数据。5.1.10.4 如果自动积分和利用积分时间表设置积分参数都不能满足对积分的具体要求，使用手动积分工具栏进行积分条件优化。5.1.11 分析报告的打印5.1.11.1 数据结果的打印：数据按 5.1.10 处
14、理完成后，从“报告”菜单选择“设定报告”进入报告参数设置窗口，按要求设置合适的报告参数，从“报告”菜单选择“查看报告文件”或“打印报告”预览报告或打印报告。5.1.11.2 序列总结报告的打印：所有序列数据按 5.1.10 处理完成后，从“序列”菜单选择“序列参数”，在“序列输出”选项卡下按要求设置合适的报告参数，勾选“序列结束后预览”，点击工具栏的“开始序列重处理”图标，在重处理结束后生成序列总结报告，打印。5.1.12 关机5.1.12.1 样品测定完成后，先关 DAD 的 UV 灯，用相应的溶剂充分冲洗系统和色谱柱。5.1.12.2 关泵后退出化学工作站，关闭计算机。5.1.12.3 关
15、闭 Agilent 1260 各模块电源开关。5.1.13 注意事项5.1.13.1 已有方法或队列文件打开时，新建或打开其他的方法或队列文件时，有时会出 现提示信息提示当前的文件被改变，询问是否保存，依需要决定。5.1.13.2 本规程适用于供试品的常规测定，其他方面，则需参考仪器使用说明书按照具 体情况设定操作方法进行测定。5.2 仪器的日常维护及维修5.2.1 仪器的日常维护5.2.1.1 当仪器任何一个模块出现错误信息时，该模块红色提示灯会亮起，同时在工作中系统视图 log 中会记载错误信息的具体内容，可以根据提示进行排查故障。5.2.1.2 在使用仪器之前在日常使用之前，必须确定仪器
16、已经处于冲洗完毕的状态， 如果上一个人未能及时冲洗仪器，可以进行自行的冲洗过程，即：将仪器的 所有通道在过渡性试剂（5%甲醇）及纯的有机相中进行冲洗，每次时间不得 低于 30 min。5.2.1.3 所用的冲洗试剂及流动相必须为未过期的过滤过的溶剂，各流动相有效期：纯有机相 3 个月，纯水 2 天，缓冲盐类 2 周，有机相加水相 1 个月。5.2.1.4 泵头清洗液（15%异丙醇）为一次性试剂，不可以反复使用，并且需要处于 长流动状态。5.2.1.5 当试验过程需要更换不同流动相时，必须将仪器的整个管路在过渡媒介中进 行过渡，一般是能够洗脱掉上个流动相所引进的杂质的稀释剂，过渡时间不 得少于 20 min。5.2.1.6 在试验结束后，必须将色谱柱连接仪器一同冲洗，如果没有特殊说明，冲洗的顺序为 10%甲醇100%甲醇，每次冲洗时间不得少于 30 min，最终使仪器体系处于纯的有机相中，防止体系内部滋生细菌。5.2.1.7 仪器的清洁：如果仪器外表面有污垢，使用软的干布擦干净；如果表面很脏，
