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1、流式细胞学在血液病理中的应用流式细胞学在血液病理中的应用 汝昆 中国医学科学院 血液病医院病理中心 血液病理血液病理 l 诊断策略：? l 综合多种诊断方法和技术? l 结合临床? l 鉴别诊断? l 诊断方法： l 病史 l 形态学 l 流式细胞学 l 遗传学 l 分子生物学 定义定义 l 流式细胞检查通过光学的方法对细胞的成分和 结构进行定量分析。 要求要求： l 必须是: l 细胞处于悬浮状态 l 质量稳定的单克隆抗体 l 可以是: l 活细胞或固定后的细胞 分析能力分析能力： l 密度: l 105 107 细胞/ml l 可以高达108 l 速度: l 可以达到50,000 even
2、ts/sec l 一般是1,000 to 5,000 CD45/SS SS/CD45 如何鉴定异常细胞群如何鉴定异常细胞群 l 正常细胞 l 抗原表达具有一致性和可重复性 l 抗原的表达方式与细胞成熟过程相关 l 肿瘤细胞 l 正常抗原的表达可以增加或减少 l 成熟性抗原的表达具有不同步性 l 异常抗原的表达 l 同一抗原在流式上表现为集中和同步的表达方式 CD makers l T cell (Tiny): l CD2, CD3, CD5, CD7 l CD4, CD8 l cCD3 l B cell (Big) l CD19, CD20, CD22, CD24 l CD79a l Myel
3、oid (3rd) l CD13, CD33 l MPO l Monocyte (4th) l CD4, CD14, CD24, CD64 l Blast l CD34 l TdT l CD117 (c-kit) l Mature Lymphocytes: l Kappa and lambda l Plasma cells: l C-kappa and c-lambda l CD138 (specifi c) and CD38 (sensiQve) 急性白血病（不能分型），请结合临床。 幼稚细胞幼稚细胞 原始（母原始（母）细胞细胞 l 原始细胞是由形态和功能来定义的： l AML is 20%
4、 blasts in blood or bone marrow l 原始细胞包括： l 干细胞 l 组细胞 l 早幼粒细胞 Promyelocytes l 幼稚单核细胞 Promonocytes l 原始淋巴细胞 (B and T) 原始细胞原始细胞 B-ALL Markers pro-B-ALL Common ALL pre-B-ALL TDT + + + CD34 + +/- +/- HLA-DR + + + CD10 - + + CD19 + + + CD20 - -/+ + CD22 + + + CyCD79 + + + CyIg - - + SmIg - - - B-ALL T-AL
5、L ! !“#“! $#%!“!2!1!2!2!1!4!4!2!2! T-ALL AML 分类： l 史前期：形态学 l FAB分类 1976：形态学+细胞化学+分化特点 l FAB分类-修订版 1985：M6， M3， M4eo l WHO 2001: 遗传学 l WHO 2008: 分子生物学 c-KIT D816突变 KIT 突变在突变在t(8;21) AML中的负中的负 面影响面影响 Blood 2006, 107:1791-9 Leukemia 2006, 20:965-70 基因 阳性率 临床意义 预后 与其他遗传 异常相关性 KIT 5% 预后因素 差 t(8;21) inv(1
6、6)/t(16;16) FLT3 20-40% 预后因素 差 - NPM1 30% 对疾病进行临 时性的定义 良好 （如 果没有 FLT3突变） M4, M5 CD34 - CEBPA 10% 对疾病进行临 时性的定义 良好 M1，M2 CD7+ WHO 2008 新界定的突变新界定的突变 AML-M3 AML-M3v DDx of M3 HLA-DR CD117 CD34 CD13 CD33 PML-RARA S type 急性早幼粒细胞白血病急性早幼粒细胞白血病(APML) l 急诊病人：易发DIC l 具体有效的治疗方案：维甲酸 l 预后良好 l 典型的免疫表型： l CD34 和 HL
7、A-DR 阴性 l CD56+ 在20%病人中阳性，预后不良 l 染色体易位： l PML-RARA l 40% 病人可伴有其他遗传学异常 l APML 伴 RARA 变异型易位 l 形态学与典型病例类似 l t(11;17)(q23;q12) ZBTB12-RARA, 维甲酸治疗无效 l t(11;17)(q13;q12) NUMA1-RARA (nuclear matrix associated gene) l t(17;17)(q11;q12) STAT5B-RARA,维甲酸治疗无效 l t(5;17)(q35;q12) NPM1-RARA,维甲酸治疗有效有效 APML的少颗粒的少颗粒
8、(细颗粒细颗粒) 变型变型 l 独特的形态学特征? l 少颗粒, 仍可见到Auer小体. l 双叶核, 与单核细胞相似? l 高白细胞数，倍增时间快? CD13 CD33 CD34 CD64 CD14 急性髓系单核白血病急性髓系单核白血病 （M4） Myeloperoxidase Non-specific esterase AML-M5 AML-M6 AML-M6 AML-M7 Acute leukemias of ambiguous lineage l Acute undiff erenQated leukemia l Mixed phenotype acute leukemia with
9、t(9;22)(q34;q11.2) BCR-ABL1 l Mixed phenotype acute leukemia with t(v;11q23) MLL rearranged l Mixed phenotype acute leukemia, B/myeloid, NOS l Mixed phenotype acute leukemia, T/myeloid, NOS l Mixed phenotype acute leukemia, NOS-rare types l Other ambiguous lineage leukemias l NK-cell lymphoblasQc le
10、ukemia/lymphoma B-myeloid Down综合征相关的髓系增殖症?综合征相关的髓系增殖症? l 短暂髓系造血异常 (短暂骨髓增殖异常) l 出生后前三个月自发缓解? l 表达 CD34, CD117, CD13, CD33, CD41, CD61 l 不表达 MPO, CD15, CD14 l 20-30% 的病例在 1-3 年内进展为AML. l Down 综合征相关的髓系白血病? l 表达 CD117, CD13, CD33, CD61 l 不表达 MPO, CD15, CD14 l 50% 的病例 CD34-; 30% 的病例 CD41- l 预后: l DS AML 且无 GATA1 突变的预后良好，采用 DS 特异的治疗方法 l DS AML 伴GATA1突变者预后较正常AML患儿预后差. Hairy cells 多学科的综合诊断多学科的综合诊断 l 诊断策略：? l 综合多种诊断方法和技术? l 结合临床? l 鉴别诊断? l 诊断方法： l 病史 l 形态学 l 流式细胞学 l 遗传学 l 分子生物学 M I G M 济南 2014年8月22-24日 http:/ 1800-205-9607 第三届第三届 血液病理血液病理诊断高峰断高峰论坛
