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1、胶回收的心得体会 1. 提高胶回收量的办法： 1) 增加电泳时的上样量。 2) 电泳缓冲液用新鲜配制的。 3) 切胶时尽量只切有条带的胶， 减小切胶体积： 含目的片断很少的胶就不要要了， 不然影响回收率。 4) 把切的两块或多块胶融化后，无论多大的体积都用一个管子，转移到同一个柱子上。 5) 溶胶时所加的溶液可多一点，这样更有利于 DNA 与膜的结合，不过一般不要多余 750ul。 6) 胶回收的关键是通过柱子的溶液的盐浓度、酸碱性（电荷）和疏水性使 DNA 与柱子结合，因此，若电泳缓冲液的 PH 偏高，可在溶胶液中加入 10ul（PH 5.0，3mol/L 的 NaAC）；为了使 DNA 分
2、子更好的拦截在膜上，可以添加 30异丙醇在加热溶解胶后的液体里。 7) 加洗脱液之前，将柱子在室温放置几分钟（大约需 10 分钟），以使乙醇充分挥发。 8) 最后少加些洗脱液，尽量减少回收体积，一般用 30-50l 洗脱液洗脱（不能太少，否则无法浸湿膜反而不利于洗脱）；洗脱液滴在膜中央，以充分洗脱结合在膜上的 DNA。 9) 可以在加入洗脱液之后，可以在 55 度水浴 5 分钟或放在 50 度水浴 10 分钟以上再洗脱，或用封口膜密封 4 度过夜，第二天再离心回收，效果不错。 10) 将离心后的洗脱液加回吸附柱，再次离心。 2. 几种 PCR 产物回收的详方法和步骤 1) 普通胶回收 如果要胶
3、回收，最好还是用试剂盒，方便，回收率也略高，实在要手工回收，可以切胶后加入 3 倍体积 TE，水浴熔化后，酚、酚氯仿抽提干净，乙醇沉淀即可。另外好像还有冷冻法，没作过，不是很清楚。 2) 从低熔点凝胶回收 DNA 纯化 DNA 片段 加与凝胶体积相等的 TE（10mmol/l Tris-H Cl pH8.0，0.1mmol/l EDTA），置 65 水浴 5 分钟保温，使凝胶完全溶解。待放至室温，加等量酚（TE 饱和，TE 封在上层，取下层酚），轻轻混匀（不用混匀），12000rpm，3 分钟离心。反复 1-2 次。取上层液，加 0.1 体积 3mol/L 醋酸钠（pH5.2）和 2.5 倍体
4、积无水乙醇，进行乙醇沉淀。将纯化的 DNA 加适量 TE 溶解，测定含量，备用（可用于目的基因结构分析，探针制备等）。 3) 扩增特异性好的 PCR 回收 如果 PCR 扩增特异性好，只是简单的 PCR 产物纯化回收，可以在 PCR 产物中加入 50ugml 的蛋白酶 K，37 度 1h，酚氯仿抽提一次，氯仿抽提一次，上清加入 0.1 体积的醋酸钠，2.5 体积的无水乙醇沉淀回收。 3. 不需胶回收就可直接连接的方法 1) 低温冷冻析出法 跑电泳时用低熔点的 agarose 胶，跑到一定时候，将目的条带所在的那一段胶切下，尽量切干净，让核酸直接暴露在胶的表面，并且，把底下没有脱氧核酸的那点胶也
5、尽量切掉，然后放入 1.5ml EP管中，然后放在负 75 度冰箱中 1030 分钟，接着 1，300rpm 离心 510 分钟，取 10ul 上清，加入连接体系中。将其余的液体也吸出，储存在另一个管子中，做好标记，放在20 度备用。 2) 酶切后的直接连接 在你酶切后可以直接的加入连接酶和另外的片断进行连接是可以筛选出连接好的片断的. 1.琼脂糖对回收率有一定影响，如果琼脂糖较多，可以增加溶胶液，保证体系盐浓度。影响回收率的因素主要是柱子填料必须在适宜的缓冲环境中（如果用柱子的话）。对于小于的片段回收，可加至 30%异丙醇。 2.如果是用 PAGE 回收，用水或 TE 溶解，枪头捣碎，过夜浸泡，即可。当然你要将 100bp 在胶中位置定好切下。已标记的探针用 X 片，未标记的用 EB。 3.选用回收效率较高的柱子，比如进口的 Qiaquick spin column。 4.参照分子克隆用低熔点胶回收。除低熔点凝胶回收法外，如用一般凝胶可用透析带短暂电泳，离心管低部加玻璃棉，高速离心等方法回收 DNA 片段。
