5009.33-2010食品中硝酸盐、亚硝酸盐的测定

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1、 中华人民共和国国家标准中华人民共和国国家标准 GB 5009.332010 中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部中 华 人 民 共 和 国 卫 生 部 发布 2010-03-26 发布 2010-06-01 实施 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 National food safety standard Determination of nitrite and nitrate in foods GB 5009.332010 I 前 言 本标准代替 GB/T 5009.33-2008 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 。 本标准与 GB/T 5009.33-2008 相比，主要变

2、化如下： 第一法中增加粉状婴幼儿配方食品的淋洗条件； 删除第三法示波极谱法，增加“乳及乳制品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定”作为第三法。 本标准所代替标准的历次版本发布情况为： GB 5009.33-1985、GB/T 5009.33-1996、GB/T 5009.33-2003、GB/T 5009.33-2008。 GB 5009.332010 1 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定 1 范围 本标准规定了食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定方法。 本标准适用于食品中亚硝酸盐和硝酸盐的测定。 第一法 离子色谱法 2 原理 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，采用相应的方法提取和净化，以氢氧化钾溶液为

3、淋洗液，阴离子 交换柱分离，电导检测器检测。以保留时间定性，外标法定量。 3 试剂和材料 3.1 超纯水：电阻率18.2 Mcm。 3.2 乙酸（CH3COOH） ：分析纯。 3.3 氢氧化钾（KOH） ：分析纯。 3.4 乙酸溶液（3 %） ：量取乙酸（3.2）3 mL 于 100 mL 容量瓶中，以水稀释至刻度，混匀。 3.5 亚硝酸根离子（NO2-）标准溶液（100 mg/L，水基体） 。 3.6 硝酸根离子（NO3-）标准溶液（1000 mg/L，水基体） 。 3.7 亚硝酸盐（以 NO2-计，下同）和硝酸盐（以 NO3-计，下同）混合标准使用液：准确移取亚硝酸根 离子（NO2-）和硝

4、酸根离子（NO3-）的标准溶液各 1.0 mL 于 100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，此溶 液每 1 L 含亚硝酸根离子 1.0 mg 和硝酸根离子 10.0 mg。 4 仪器和设备 4.1 离子色谱仪：包括电导检测器，配有抑制器，高容量阴离子交换柱，50 L 定量环。 4.2 食物粉碎机。 4.3 超声波清洗器。 4.4 天平：感量为 0.1 mg 和 1 mg。 GB 5009.332010 2 4.5 离心机：转速10000 转/分钟，配 5 mL 或 10 mL 离心管。 4.6 0.22 m 水性滤膜针头滤器。 4.7 净化柱：包括 C18柱、Ag 柱和 Na 柱或等效柱。 4

5、.8 注射器：1.0 mL 和 2.5 mL。 注：所有玻璃器皿使用前均需依次用 2 mol/L 氢氧化钾和水分别浸泡 4 h，然后用水冲洗 3 次5 次，晾干备用。 5 分析步骤 5.1 试样预处理 5.1.1 新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分 法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。 5.1.2 肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。 5.1.3 乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪) ：将试样装入能够容纳 2 倍试样体积的 带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直

6、到使试样均一化。 5.1.4 发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。 5.1.5 干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热 量。 5.2 提取 5.2.1 水果、蔬菜、鱼类、肉类、蛋类及其制品等：称取试样匀浆 5 g（精确至 0.01 g，可适当调整试 样的取样量，以下相同） ，以 80 mL 水洗入 100 mL 容量瓶中，超声提取 30 min，每隔 5 min 振摇一次， 保持固相完全分散。于 75 水浴中放置 5 min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤 后，取部分溶液于 10 000 转/

7、分钟离心 15 min，上清液备用。 5.2.2 腌鱼类、腌肉类及其它腌制品：称取试样匀浆 2 g（精确至 0.01 g） ，以 80 mL 水洗入 100 mL 容 量瓶中，超声提取 30 min，每 5 min 振摇一次，保持固相完全分散。于 75 水浴中放置 5 min，取出放 置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤后，取部分溶液于 10 000 转/分钟离心 15 min，上清液备 用。 5.2.3 乳：称取试样 10 g（精确至 0.01 g） ，置于 100 mL 容量瓶中，加水 80 mL，摇匀，超声 30 min， 加入 3 %乙酸溶液 2 mL，于 4 放置 20 min，

8、取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤， 取上清液备用。 5.2.4 乳粉： 称取试样 2.5 g （精确至 0.01 g） ， 置于 100 mL 容量瓶中， 加水 80 mL， 摇匀， 超声 30 min， 加入 3 %乙酸溶液 2 mL，于 4 放置 20 min，取出放置至室温，加水稀释至刻度。溶液经滤纸过滤， 取上清液备用。 5.2.5 取上述备用的上清液约 15 mL，通过 0.22 m 水性滤膜针头滤器、C18柱，弃去前面 3 mL（如果 氯离子大于 100 mg/L，则需要依次通过针头滤器、C18柱、Ag 柱和 Na 柱，弃去前面 7 mL） ，收集后面 洗脱液待测。

9、固相萃取柱使用前需进行活化，如使用 OnGuard II RP 柱（1.0 mL） 、OnGuard II Ag 柱（1.0 mL） 和 OnGuard II Na 柱（1.0 mL）1，其活化过程为：OnGuard II RP 柱（1.0 mL）使用前依次用 10 mL 甲 醇、15 mL 水通过，静置活化 30 min。OnGuard II Ag 柱（1.0 mL）和 OnGuard II Na 柱（1.0 mL）用 10 1给出这一信息是为了方便本标准的使用者，并不表示对该产品的认可，如果其他等效产品具有相同的效果，则可使用 这些等效的产品。 GB 5009.332010 3 mL 水通

10、过，静置活化 30 min。 5.3 参考色谱条件 5.3.1 色谱柱：氢氧化物选择性，可兼容梯度洗脱的高容量阴离子交换柱，如 Dionex IonPac AS11-HC 4 mm250 mm（带 IonPac AG11-HC 型保护柱 4 mm50 mm）1，或性能相当的离子色谱柱。 5.3.2 淋洗液 5.3.2.1 一般试样：氢氧化钾溶液，浓度为 6 mmol/L70 mmol/L；洗脱梯度为 6 mmol/L 30 min，70 mmol/L 5 min，6 mmol/L 5 min； 流速 1.0 mL/min。 5.3.2.2 粉状婴幼儿配方食品： 氢氧化钾溶液， 浓度为 5 mm

11、ol/L50 mmol/L； 洗脱梯度为 5 mmol/L 33 min， 50 mmol/L 5min，5 mmol/L 5 min；流速 1.3 mL/min。 5.3.3 抑制器：连续自动再生膜阴离子抑制器或等效抑制装置。 5.3.4 检测器：电导检测器，检测池温度为 35 。 5.3.5 进样体积：50 L（可根据试样中被测离子含量进行调整） 。 5.4 测定 5.4.1 标准曲线 移取亚硝酸盐和硝酸盐混合标准使用液，加水稀释，制成系列标准溶液，含亚硝酸根离子浓度为 0.00 mg/L、0.02 mg/L、0.04 mg/L、0.06 mg/L、0.08 mg/L、0.10 mg/L、

12、0.15 mg/L、0.20 mg/L；硝酸根 离子浓度为 0.0 mg/L、0.2 mg/L、0.4 mg/L、0.6 mg/L、0.8 mg/L、1.0 mg/L、1.5 mg/L、2.0 mg/L 的混合 标准溶液，从低到高浓度依次进样。得到上述各浓度标准溶液的色谱图（图 1） 。以亚硝酸根离子或硝 酸根离子的浓度（mg/L）为横坐标，以峰高（S）或峰面积为纵坐标，绘制标准曲线或计算线性回归 方程。 图 1 亚硝酸盐和硝酸盐混合标准溶液的色谱图 5.4.2 样品测定 分别吸取空白和试样溶液 50 L，在相同工作条件下，依次注入离子色谱仪中，记录色谱图。根据 保留时间定性，分别测量空白和样

13、品的峰高（S）或峰面积。 6 分析结果的表述 试样中亚硝酸盐（以 NO2-计）或硝酸盐（以 NO3-计）含量按式（1）计算： GB 5009.332010 4 1000 1000)( 0 = m fVcc X （1） 式中： X 试样中亚硝酸根离子或硝酸根离子的含量，单位为毫克每千克（mg/kg） ； c测定用试样溶液中的亚硝酸根离子或硝酸根离子浓度，单位为毫克每升（mg/L） ； c0试剂空白液中亚硝酸根离子或硝酸根离子的浓度，单位为毫克每升（mg/L） ； V试样溶液体积，单位为毫升（mL） ； f试样溶液稀释倍数； m试样取样量，单位为克（g） 。 说明：试样中测得的亚硝酸根离子含量乘以

14、换算系数 1.5，即得亚硝酸盐（按亚硝酸钠计）含量； 试样中测得的硝酸根离子含量乘以换算系数 1.37，即得硝酸盐（按硝酸钠计）含量。 以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。 7 精密度 在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对值差不得超过算术平均值的 10 %。 第二法 分光光度法 8 原理 亚硝酸盐采用盐酸萘乙二胺法测定，硝酸盐采用镉柱还原法测定。 试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙 二胺偶合形成紫红色染料，外标法测得亚硝酸盐含量。采用镉柱将硝酸盐还原成亚硝酸盐，测得亚硝酸 盐总量，由此总量减去亚硝

15、酸盐含量，即得试样中硝酸盐含量。 9 试剂和材料 除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为 GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。 9.1 亚铁氰化钾（K4Fe(CN)63H2O） 。 9.2 乙酸锌（Zn(CH3COO)22H2O） 。 9.3 冰醋酸（CH3COOH） 。 9.4 硼酸钠（Na2B4O710H2O） 。 9.5 盐酸（1.19 g/mL） 。 9.6 氨水（25 %） 。 9.7 对氨基苯磺酸(C6H7NO3S） 。 GB 5009.332010 5 9.8 盐酸萘乙二胺(C12H14N22HCl） 。 9.9 亚硝酸钠（NaNO2） 。 9.10 硝酸钠（NaN

16、O3） 。 9.11 锌皮或锌棒。 9.12 硫酸镉。 9.13 亚铁氰化钾溶液(106 g/L)：称取 106.0 g 亚铁氰化钾（9.1） ，用水溶解，并稀释至 1000 mL。 9.14 乙酸锌溶液(220 g/L)： 称取 220.0 g 乙酸锌（9.2） ，先加 30 mL 冰醋酸（9.3）溶解，用水稀释至 1000 mL。 9.15 饱和硼砂溶液(50 g/L)： 称取 5.0 g 硼酸钠（9.4） ，溶于 100 mL 热水中，冷却后备用。 9.16 氨缓冲溶液（pH 9.69.7） ：量取 30 mL 盐酸（9.5） ，加 100 mL 水，混匀后加 65 mL 氨水（9.6） ， 再加水稀释至 1000 mL，混匀。调节 pH 至 9.69.7。 9.17 氨缓冲液的稀释液：量取 50 mL 氨缓冲溶液（9.12） ，加水稀释至 500 mL，混匀。 9.18 盐酸(0.1 mol/L)： 量取