透析液细菌内毒素检查

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1、2018年11月15日,博康www.zj-,1,细菌内毒素限量检查讲义 透析用水、透析液 讲 解 董光宴 1、试验条件必备 2、标准要求 3、供试品溶液的制备 4、限量检查 湛江博康海洋生物有限公司,2018年11月15日,博康www.zj-,2,一、试验条件必备 1、经过培训合格的实验人员； 2、实验室条件； 3、必备的实验材料。,2018年11月15日,博康www.zj-,3,3 必备的实验材料 3.1 必备材料 鲎试剂盒：具有国家批准文号，并依法检验合格。 如：湛江博康海洋生物有限公司，卫药准字（88）SJ-04 。,2018年11月15日,博康www.zj-,4,【组成成份】每盒试剂组

2、成,每盒试剂配套试验耗材：无热原试管5ml6支； 无热原试管2ml6支；无热原吸嘴 0.25ml15支。,2018年11月15日,博康www.zj-,5, 实验室要求洁净，无尘埃流通，室内温度要求2025为宜。必要时应在超净工作台操作。,2018年11月15日,博康www.zj-,6, 恒温箱。 旋涡振荡器。 其它器具：消毒棉球，剪刀和封口膜等。,2018年11月15日,博康www.zj-,7,3.2 取样 取样器具必须符合2010年版中国药品检验标准操作规范310页细菌内毒素检查法“3 实验准备”规定：无外源性内毒素。必要时可以用真空采血管（无添加剂）取样。,2018年11月15日,博康ww

3、w.zj-,8,二、复用设备及用水要求 血液透析器复用操作规范5.1.2 水质要求：应定期检测复用用水细菌和内毒素的污染程度。应在血液透析器与复用系统连接处或尽可能接近此处进行水质检测。 内毒素含量不得超过2EU/ml，干预限度为1EU/ml。当达到干预限度时，继续使用水处理系统是可以接受的，但应采取措施，防止系统污染进一步加重。,2018年11月15日,博康www.zj-,9,5 复用设备及用水要求 5.1.3 水质细菌学、内毒素检测时间：最初应每周检测1次，连续2次检测结果符合要求后，细菌学检测应每月1次，内毒素检测应每3个月至少1次。,2018年11月15日,博康www.zj-,10,三

4、、供试品溶液的制备 透析用水需进行稀释。 一般要求供试品溶液的PH值在6.08.0的范围内。对于透析液，需调节PH值，可使用酸性调节剂调节PH值。,2018年11月15日,博康www.zj-,11,四 限量检查 透析用水、透析液已有内毒素检验标准，可直接进行内毒素检查。,2018年11月15日,12,博康www.zj-,1、试剂和样品 鲎试剂盒（生产单位：湛江博康海洋生物有限公司，灵敏度：0.125EU/ml） 细菌内毒素检查用水 细菌内毒素工作标准品（10EU） 透析用水,2018年11月15日,13,博康www.zj-,2、限值的确定 内毒素限值L=1.0EU/ml。,2018年11月15

5、日,博康www.zj-,14,3、计算稀释倍数MVD=L/ =1.0EU/ml/0.125EU/ml =8倍,2018年11月15日,博康www.zj-,15,4、操作方法,2018年11月15日,博康www.zj-,16,透析用水,8倍稀释液,0.2ml,图 示,4.1 供试品溶液的制备,1.4ml,2018年11月15日,博康www.zj-,17,4.2 阳性对照 检验鲎试剂活性及试验有效性。 4.3 阴性对照 检验试验操作及环境是否对试验有污染。,0.25EU/ml,2018年11月15日,博康www.zj-,18,补充：内毒素标准品的正确开启方法,取细菌内毒素工作标准品一支，轻弹瓶壁，

6、使粉末落入瓶底，然后用砂轮在瓶颈上部轻轻划痕，用75%酒精棉球擦拭后启开，启开过程应防止玻璃屑落入瓶内。,正确,（易折点） 错误,2018年11月15日,博康www.zj-,19,注意：1、只能在安瓿的易折点上部开启内毒素，不能沿易折点开启，防止振荡过程中内毒素粘在封口膜上。 2、只能取1ml的细菌内毒素检查用水复溶细菌内毒素工作标准品。,2018年11月15日,博康www.zj-,20,0.25EU/ml,0.2ml,0.2ml,1.8ml,0.6ml,图 示,1EU/ml,10EU/ml,2018年11月15日,博康www.zj-,21,4.4 供试品阳性对照 目的是为了验证透析用水中有内

7、毒素可以被检测出来。,0.25EU/ml/8倍,2018年11月15日,博康www.zj-,22,5 鲎试剂的准备 取规格为0.1ml/支的鲎试剂8支，放在试管架上，排成4列，每列2支。轻弹瓶壁使粉末落入瓶底，用75%酒精棉球擦拭后启开备用，防止玻璃屑落入瓶内。每支加入0.1ml检查用水溶解，轻轻转动瓶壁，使内容物充分溶解。,2018年11月15日,博康www.zj-,23,6 加样 其中2支加入0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶液作为阳性对照; 2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液作为供试品管; 2支加入0.1ml的透析用水8倍稀释液和0.1ml的0.25EU/ml的内毒素标准溶

8、液作为供试品阳性对照; 2支加入0.2ml的检查用水作为阴性对照。,2018年11月15日,博康www.zj-,24,加样结束后，将鲎试剂用医用胶布封口，轻轻振动混匀，连同试管架放入37水浴或适宜恒温器中，试管架保持水平状态，保温60分钟。,2018年11月15日,博康www.zj-,25,7 结果判断 保温60分钟2分钟后观察结果。若阴性对照溶液D的平行管均为阴性，供试品阳性对照溶液B的平行管均为阳性，阳性对照溶液C的平行管均为阳性，试验有效。,2018年11月15日,博康www.zj-,26,若溶液A的两个平行管均为阴性，判供试品符合规定；若溶液A的两个平行管均为阳性，判供试品不符合规定。若溶液A的两个平行管中的一管为阳性，另一管为阴性，需进行复试。复试时，溶液A需做4支平行管，若所有平行管均为阴性，判供试品符合规定；否则判供试品不符合规定。,2018年11月15日,博康www.zj-,27,8 结果记录,2018年11月15日,博康www.zj-,28,湛江博康海洋生物有限公司 讲 解 董光宴 通信地址：广东省湛江市麻章区瑞云南路188号 邮政编码：524094 联系电话：0759-2732555-603 13828262866 企业网址：www.zj- E-mail:,