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1、临床检验学实验课,临床检验学教研室 2011年3月,实验内容,1.毛细血管采血#2.血小板计数(Platelet count)#3.嗜酸性粒细胞直接计数(Eosinophil count, EC)#,实验要求,1、 掌握毛细血管采血的方法，了解不同采血部位对检验结果的影响；2、 掌握PLT计数，E直接计数的原理、方法、 参考范围、注意事项.,毛细血管采血,原理：采血针刺破皮肤毛细血管后使血液自然流出，用一次性的微量吸管吸取血液。,毛细血管采血,操作：,采血针、微量吸管、EPP管 75乙醇、无菌干棉球,注 意 事 项,1. 采血部位的选择： 正常人：皮肤完整，无烧伤、冻疮、发绀、 水肿、炎症；
2、半岁以下婴幼儿：拇指、脚趾或足跟内、外 侧缘采血； 烧伤患者：皮肤完整处。,注 意 事 项,2. 严格无菌技术操作，防止采血部位感 染；做到一人一针一管，避免交叉感染。 3. 皮肤消毒后，待乙醇干后采血。 4. 取血时可稍加挤压，但切勿用力挤压. 5. 进行多项检查时采血的顺序依次为：PLT, RBC,HB,WBC。,方法学评价,血小板计数,原理：血液经稀释液按一定比例稀释和破坏RBC后，充入血细胞计数盘内，在显微镜下计数一定范围内的PLT数量，经过换算求出每升血液中PLT的数量。,器材、试剂、标本,器材显微镜、血细胞计数盘、采血针、b吸管、 小试管等。 试剂10g/L草酸铵稀释液 (草酸铵，
3、EDTA-a2 ） 标本 末梢血,操作步骤,吸取草酸铵 稀释液0.38ml,准确采血20ul， 加入稀释液中,室温静置10min,充池、静置15min,高倍镜下计 数,计 算,正面观,侧面观,血细胞计数盘（改良牛鲍计数盘）,结构：,血小板计数区域,P,细胞计数原则,按一定顺序逐格计数，即呈“弓”字形的移动视野。对压线细胞按数上不数下，数左不数右原则，避免漏数或重复计数。,计算和报告,计算公式：PLT/L=5个中方格内PLT数（N）109/L PLT/L=N51020106 /L 报告方式：PLT:XXX 109/L,注意事项,1、实验器材必须清洁 2、针刺深度应达3mm 3 、适度混匀 4、充
4、池后应静置15min 5、计数应在1h内完成，否则结果偏低 6、光线不要太强 7 、如成簇分布需重新计数,临床意义,1. 参考值 :（100300 ）109/L 2. 病理变化的临床意义：PLT增多:原发性的血小板增多症急性大出血脾切除PLT减少:再生障碍性贫血原发性血小板紫癜弥漫性血管内凝血脾肿大#,嗜酸性粒细胞直接计数,原理：用嗜酸性粒细胞稀释液将血液稀释一定倍数，同时破坏红细胞和大部分其他白细胞，并使嗜酸性粒细胞着色。将悬液滴入计数池，计数一定范围内的嗜酸性粒细胞数，经换算得出每升血液中的嗜酸性粒细胞总数。,器材、试剂、标本,器材显微镜、血细胞计数盘、采血针、b吸管、小试管等. 试剂伊红
5、-丙酮稀释液 标本 末梢血,操作步骤,吸取伊红-丙酮稀释液 0.38ml,准确采血20ul，加入稀释液中,待红细胞溶解,充入两侧计数池，静置23min,低倍镜下计数10个大方格内E数,计 算,计数区域,E,E,E,E,E,E,E,E,E,E,（上）,（下）,计算和报告,计算公式E/L=报告方式E： X.XX 109/L,注意事项,1.时间 ：固定采血时间，排除日间生理变化；操作应在3060min内计数完毕，否则E逐渐被破坏或不易辩认，使结果偏低。 2.混匀：E在稀释液中易发生聚集，要及时混匀。E易于破碎，振荡不宜太猛烈。 3.注意与中性粒细胞区别，中性粒细胞一般不着色或着浅红色，且颗粒较小。,临床意义,1. 参考值 :（0.050.3） 109/L 2. 病理变化的临床意义：E增多：寄生虫病变态反应性疾病皮肤病（湿疹，银屑病等）E减少：长期应用肾上腺皮质激素、急性传染病（伤寒极期）,本次实验顺序,采血,0.38ml plat 稀释液,20 l,20 l,0.38ml E 稀释液,充池,静置35min 低倍镜下计数10个大方格,充池,静置15min, 高倍镜下计数5个中方格,EPP 管,
