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1、1专题专题 1 1 基因工程基因工程第 1 节 DNA 重组技术的基本工具 1.基因工程的目的是什么，是为了获取目的基因吗？ 不是。是为了获得更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 2.基因工程的产物分别叫什么名称？转基因植物、转基因动物、转基因微生物 3.基因工程是什么技术？DNA 重组技术 4.基因工程的操作对象、操作环境、操作水平转基因植物、转基因动物、转基因微 5.DNA 重组技术需要哪三种工具？ 转基因植物、转基因动物、转基因微 6.限制酶的全称、限制酶是人工合成的，还是自然界原本就有，在哪儿有？ 限制性核酸内切酶、主要分布在原核生物中 7.限制酶作用的对象和作用的具体部位双链 D
2、NA 的磷酸二酯键 8.限制酶是把双链 DNA 分子切割成两个单链，还是切割成两个或若干个双链 DNA 片段 后者者者者者者者者 9.酶都具有专一性，限制酶的专一性体现在哪（限制酶的特点是什么） 识别双链 DNA 分子的一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 10. 限制酶的作用是什么? 切割 DNA 11. 限制酶作用的结果是什么产生两个或若干个 DNA 片段 12. 限制酶切割产生的末端有那两种形式黏性末端和平末端 13. 限制酶识别的核苷酸序列具有反向对称重复排列的特点，通常情况下，在限制酶识别 的序列中存在中轴线。如果限制酶在它识别序列的中心轴线两侧将 DNA 的两条链分别
3、 切开时，产生什么末端？如果限制酶在它识别序列的中心轴线处切开时，产生什么末 端coli DNA 连接酶，4 14. 用同一种限制酶切割不同的 DNA 分子，产生的黏性末端相同吗? 相同 15. DNA 连接酶作用的对象 双链 DNA 片段的磷酸二酯键 16. DNA 连接酶是把 DNA 单链连接成一个 DNA 分子呢，还是把两个或多个双链片段连接成 一个 DNA 分子 后者 17. 基因工程中所用的 DNA 连接酶有哪两种 coli DNA 连接酶，4DNA 连接酶 18. coli DNA 连接酶作用于哪种类型的末端黏性末端 19. 4DNA 连接酶作用于哪种类型的末端coli DNA 连
4、接酶，4DNA 连接 20. 据图判断，将图中单个核苷酸连接起来使用什么酶，将 DNA 片段连接起来使用什么酶， 在图中分别作出标记 oli DNA 连接酶，4D21. DNA 连接酶恢复的是解旋酶切开的键，还是限制酶切开的键_ 22. 一段 DNA 分子能直接送入受体细胞吗_ 23. 被称为“分子运输车”的是什么物质_ 24. 常用的载体是什么_ 25. 关于质粒要明确的知识点 质粒只存在于什么生物体 细菌或酵母菌引物脱氧核苷酸模板DNA 聚合酶作用位置2质粒的化学本质是什么 DNA 质粒是双链还是单链 双链 质粒什么形状 环状 质粒上有基因吗 有 为什么说质粒是裸露的 因为没有蛋白质，只有
5、 DNA 26. 质粒与目的基因构建的重组质粒（又叫做重组 DNA 分子，基因表达载体）在受体细胞 中有哪 2 种存在形式_ 27. 构建重组质粒必须同时使用哪 2 种酶_ 28. 具备哪 4 个条件才能充当“分子运输车” 能在宿主细胞内稳定保存因连接；有标记基因，以便进行筛选；对受体细胞无害。 29. “分子运输车”有哪 3 种_ 30. 天然质粒能直接用作载体吗_ 第 2 节 基因工程的基本操作程序 31. 基因工程四步曲的名称：_ 32. 获取目的基因常用方法有哪三种：_ 33. 目的基因是什么基因：_ 34. 如果对目的基因的碱基序列完全不知，采用哪种方法获取目的基因_ 35. 如果目
6、的基因的核苷酸序列部分已知，采用哪种方法获取目的基因 利用 PCR 技术扩增目的基因 36. 如果基因比较小，核苷酸序列又已知，采用哪种方法获取目的基因_ 37. 构建基因组文库，必须使用哪两种酶：限制酶、DNA 连接酶 38. 构建 cDNA 文库，需要使用哪些酶：反转录酶、DNA 聚合酶 39. 由 mRNA 反转录形成 cDNA 的过程如下图，请在空白处填入恰当的名称： 40. 构建基因组文库时，从生物细胞中提取的物质，和 cDNA 文库提取的物质一样吗不一样，基因组文库构建时，从生物细胞中提取全部 DNA。 41. 为什么 cDNA 文库比基因组文库小（为什么说 cDNA 只保留生物的
7、部分基因） 因为基因表达具有选择性某个时期只有部分基因转录成 mRNA，而不是全部。 42. 如果想知道生物在个体发育的不同阶段表达的基因有什么不同，需要构建哪种基因文 库？_ 43. PCR 技术是什么含义：_ 44. PCR 技术操作的前提是什么：_ 45. 使用 PCR 技术的目的是什么：_ 46. PCR 技术操作的条件是什么：_ 47. PCR 技术操作的环境是什么：_ 48. 在生物体外，95高温下，双链 DNA 断裂成片段还是解旋成单链呢？如果在生物体内， 常温下，使双链 DNA 解旋成单链，怎么操作？ 单链、解旋酶解旋 49. PCR 技术利用什么原理：_反转录酶DNA 聚合酶
8、单链 RNARNA 链单链 DNA双链 DNA核酸酶 HDNA 链杂交双链350. PCR 反应体系的温度降到 5560会出现什么结果：_ 51. PCR 使用的 Taq 酶具有的显著特征是什么：_ 52. DNA 聚合酶在没有模板链和引物的条件下，能把游离的单个核苷酸连接成长链吗？ 不能（DNA 聚合酶是一种模板链指导下的酶） 53. 如果在 PCR 扩增仪中放置一个 DNA 分子，经过 30 次循环，可以产生多少个 DNA 分子 _ 54. 基因工程四部曲的核心步骤是什么 第二步，基因表达载体的构建 55. “将目的基因导入受体细胞” ，它的意思是指目的基因直接导入受体细胞吗 不是，利用基
9、因表达载体将目的基因导入受体细胞 56. 为什么不能将目的基因直接导入受体细胞 目的基因在受体细胞中不能维持稳定，不能复制，不能表达 57. 怎样使目的基因免于被受体细胞的防御系统摧毁 构建基因表达载体 58. 构建基因表达载体的目的是什么 使目的基因在受体细胞中稳定存在，复制和表达 59. 将目的基因插入质粒后，会影响质粒的复制吗？对质粒中原有基因的表达会有影响吗?_ 60. 基因表达载体包括哪几个组成部分_ 61. 启动子是与 RNA 聚合酶结合的识别位点，还是与 DNA 聚合酶结合的识别位点， 是控制 复制的开始，还是控制转录的开始 与 RNA 聚合酶结合的识别位点，是控制转录的开始 6
10、2. 终止子是控制复制的结束，还是控制转录的结束_ 63. 标记基因通常是抗生素基因，还是抗生素抗性基因，它有什么功能 是抗生素抗性受体细胞中是否含有目的基因，从而将含目的基因的细胞筛选出来 64. 基因工程的受体细胞有哪三种，目的基因来源有哪三种 植物细胞、动物细胞、微生物细胞；植物细胞、动物细胞、微生物细胞 65. 如果目的基因来自植物或动物细胞，受体细胞是细菌，那么目的基因能够在受体细胞 中表达的理论依据是什么_ 66. 如果目的基因控制合成的产物是糖蛋白，那么受体细胞不能是细菌，为什么 糖蛋白是在内质网只真核细胞中，细菌中没有，因此不能用细菌产生糖蛋白 67. 受体细胞不同，将目的基因
11、导入受体细胞的方法就不同，如果受体细胞是植物体细胞， 可以采用哪三种方法？ 农杆菌转化法、基因枪法、花粉管通道法 68. 如果受体细胞是动物细胞，采用什么方法？_ 69. 如果受体细胞是细菌等微生物细胞，采用什么方法？_ 70. 动物的受体细胞通常采用受精卵，而不是体细胞；植物的受体细胞，通常是体细胞 （受 精卵也可） ，为什么？ 因为植物的体细胞仍胞全能性有很大的局限性，动物的受精卵全能性最强 71. 80%转基因植物都采用什么转基因方法？_ 72. 农杆菌转化法适用于哪些植物？_ 73. 插入到 T-DNA 中的目的基因以什么方式存在于植物细胞中（在中选择）_4随 Ti 质粒独立存在于植物
12、细胞中 随 T-DNA 整合到植物细胞染色体 DNA 上 74. 早期的基因工程，常用原核生物作为受体细胞，为什么 繁殖快，多为单细胞，遗传物质相对较少 75. 细菌作为受体细胞，必须经过怎样的处理 用 Ca2+处理细胞使细收周围环 A 分子的生理状态，这种细胞称为感受态细胞 76. 重组质粒，是通过显微注射的方法导入受体细胞吗，怎么导入 不是，将基因表于缓冲一定温度下，促进感受态细胞吸收 DNA，完成转化5专题 2 基因工程 第 3 节 DNA 重组技术的基本工具 不是。是为了获得更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。 转基因植物、转基因动物、转基因微生物 DNA 重组技术 DNA 分子、
13、生物体外、分子水平 限制酶、DNA 连接酶、基因载体（载体） 限制性核酸内切酶、主要分布在原核生物中 双链 DNA 的磷酸二酯键 后者 识别双链 DNA 分子的某种特定核苷酸序列，每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸 二酯键断开。 切割 DNA 产生两个或若干个 DNA 片段 黏性末端和平末端 黏性末端和平末端 相同 双链 DNA 片段的磷酸二酯键 后者 coli DNA 连接酶，4DNA 连接酶 黏性末端 平末端和黏性末端，但连接平末端之间的效率比较低。 DNA 聚合酶，DNA 连接酶 后者 不能 载体（基因载体） 质粒 细菌或酵母菌DNA双链环状有因为没有蛋白质，只有 DNA 独立在受体细胞中进行自我复制，整合到染色体 DNA 上，随染色体 DNA 进行同步复制。 限制酶、DNA 连接酶 能在宿主细胞内稳定保存并大量复；有一个或多个限制酶切点，以便与外源基因连接；有 标记基因，以便进行筛选；
