微生物的实验室培养

《微生物的实验室培养》由会员分享，可在线阅读，更多相关《微生物的实验室培养（35页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。

1、高二年级 生物,专题二 微生物的培养与应用,课题1 微生物的实验室培养,倒平板技术,3、微生物的接种技术,纯化大肠杆菌,平板划线法 稀释涂布平板法,科赫的稀释划线分离培养法,连续划线法,分区划线法,分区划线法,分区划线法划线分离时平板分4个区，故又称四分区划线法。其中第4区是单菌落的主要分布区，故其划线面积应最大。为防止第4区内划线与1、2、3区线条相接触，应使4区线条与1区线条相平行，这样区与区间线条夹角最好保持120度左右。先将接种环蘸取少量菌在平板上1区划3-5条平行线，取出接种环，左手关上皿盖，将平板转动6070度。灼烧接种环，待在平板边缘上冷却后，再按以上方法以1区划线的菌体为菌源，

2、由1区向2区作第2次平行划线。第2次划线完毕，同时再把平皿转动约6070度，同样依次在3、4区划线。划线完毕，灼烧接种环，关上皿盖，倒置于37恒温箱中培养24h后，在划线区观察单菌落。,系列稀释操作,菌落是鉴定菌种的重要依据。,细菌的菌落,有鞭毛细菌： 无鞭毛细菌：,有荚膜细菌： 无荚膜细菌：,大肠杆菌在伊红美蓝培养基上形成深紫色，并带有金属光泽的菌落。,菌落光滑,S型 菌落粗糙,R型,大而扁平，边缘波状或锯齿状。 较小较厚，边缘整齐。,1、临时保藏：,接种到固体斜面培养基，菌落长成后置于4冰箱保存。,2、长期保存：,甘油冷冻管藏法,5、菌种的保存,微生物的类群,病毒界,原核生物界（如细菌、放

3、线菌等）,原生生物界,真菌界（如酵母菌、霉菌等）,细胞壁 细胞膜 细胞质(核糖体、质粒等) 拟核,一般结构,特殊结构,荚膜、鞭毛、芽孢,细菌的结构,牛肉膏蛋白胨固体培养基配方,牛肉膏 5.0g 蛋白胨 10.0g NaCl 5.0g 琼脂 20.0g 将上述物质溶解后，用蒸馏水定容至1000ml。,培养基的配制,培养基的配制,牛肉膏蛋白胨培养基,1. 计算 2称量 3溶化 4灭菌 5倒平板,二、微生物需要的营养物质,微生物的化学组成,碳源 氮源 生长因子 无机盐 水,微生物需要的营养物质,二、微生物需要的营养物质,培养基的配制,人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。

4、 固体培养基 液体培养基 天然培养基 合成培养基 鉴别培养基 选择培养基,根据培养基的物理性质分 固体培养基 用于微生物的分离、计数、鉴定 半固体培养基 观察微生物的运动,鉴定菌种 液体培养基 常用于工业生产,三、培养基的种类,理想的凝固剂应具备以下条件： 不会被微生物分解利用； 不会因高温灭菌而受到破坏； 在微生物生长的温度范围内保持固体状态； 对微生物及操作人员均无毒害作用； 透明度好、凝固力强； 价格低廉，配制方便。,培养基的种类,常用的凝固剂琼脂 主要成分是硫酸半乳聚糖 熔点为96 凝固点为40 透明度强。,根据培养基的化学成分分 合成培养基成分明确,常用于分类,鉴定 天然培养基成分不

5、明确,常用于工业生产,培养基的种类,天然培养基和合成培养基的优劣点： -天然培养基 -优点：具有营养丰富、原料易得、配制方便、价格低廉、培养微生物效果好等。 -缺点：是培养基中营养成分以及微生物对各种营养物质的需要量难以确定，实验结果的重复性差。 -合成培养基 -优点：营养成分含量准确，因而实验的可重复性强。 -缺点：配制烦琐、成本较高、微生物生长缓慢。,培养基的种类,根据培养基的用途分 选择培养基在培养基中加入某种化学物质,以抑制不需要的微生物的生长,促进所需要的微生物的生长。,鉴别培养基在培养基中加入某种指示剂或化学药品,用以鉴别不同种类的微生物。,培养基的种类,选择培养基,加入青霉素的培

6、养基 加入高浓度食盐的培养基 不加氮源的无氮培养基 不加含碳有机物的无碳培养基 加入青霉素等抗生素的培养基,分离酵母菌、霉菌等真菌,分离金黄色葡萄球菌,分离固氮菌,分离自养型微生物,分离导入了目的基因的受体细胞,目的要明确 -根据所培养的微生物的种类、培养的目的配制,培养基的配制原则,培养微生物的种类自养还是异养 培养目的用于生产还是用于科学研究,营养要协调 -注意各种营养物质的浓度和比例,最重要为碳源和氮源的比。 如：谷氨酸生产中 C:N=4:1，菌体数谷氨酸； C:N=3:1，菌体数谷氨酸。,培养基的配制原则,pH要适宜 细 菌： pH 6.57.5 放线菌： pH 7.58.5 真 菌：

7、 pH 5.06.0,培养基的配制原则,1、消毒和灭菌的区别？ 2、常用的消毒方法有哪些？ 3、常用的灭菌方法有哪些？ 4、请判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 A.培养细菌用的培养基或培养皿。 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管。 C.接种环、接种针。 D.实验操作者的双手。,无菌技术,消毒,使用较温和的物理或化学方法仅杀死物体表面或内部一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。,灭菌,使用强烈的理化因素杀死物体内所有的微生物，包括芽孢和孢子。,一、无菌技术,常用的消毒方法,1、100煮沸5-6min 2、巴氏消毒法： 70-75 下煮30min或 80 下煮15min 3、用75%酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒 4、氯气消毒水源 5、紫外线消毒 ,一、无菌技术,1、灼烧灭菌 2、干热灭菌： 160-170 下加热1-2h。 3、高压蒸汽灭菌： 100kPa、121 下 维持15-30min。,常用的灭菌方法,一、无菌技术,A.培养细菌用的培养基或培养皿 B.玻棒、试管、烧瓶和吸管 C.接种环、接种针 D.实验操作者的双手,灭菌,灭菌,灭菌,消毒,一、无菌技术,二、基本操作程序,1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存,