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1、章丘市人民医院检验科,糖化血红蛋白检测技术,章丘市人民医院检验科 陈锡良,章丘市人民医院检验科,糖尿病现状,在二十一世纪的第一个十年，中国糖尿病患病率翻了近两倍，已成为世界第一糖尿病大国，目前疾病防治形势十分严峻。中国成为糖尿病第一大国， 20岁以上成年人1/10血糖异常。据2010年3月26日新英格兰医学杂志刊登的“中国人群中的糖尿病患病率”的研究论文公布数据显示，目前中国已有超过9400万的糖尿病患者。纪立农教授指出，糖尿病患者人数增速迅猛与中国十年来的城市化进程加快、人民生活水平提高、不健康的生活方式增加而导致的城市“富贵病”人群增多密不可分。这一结论一项覆盖全国14个省市，年龄20岁以
2、上54240人的调查，最终47325人最终完成了调查。此项调查还显示，糖尿病已经开始在20岁至39岁的中国年轻人中流行，这一年龄段的患病率占3.2%，而糖尿病患病前期人数更是达到了9.0%,章丘市人民医院检验科,糖 类 生 化 项 目,检测项目: GLU 葡萄糖1,5-AG 1,5-脱水-D-山梨醇HBA1C 糖化血红蛋白 FMN 果糖胺/糖化血清蛋白NAG N-乙酰氨基葡萄糖苷酶,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,传统上糖尿病的诊断与治疗都是以空腹血糖和口服糖耐量实验为参考指标，但血糖测定只能反映出被测者当时的血糖水平，与被测者的身体状况、用药情况和抽血时间都有关系，波动较大，不
3、能反映出被测者较长时间范围内的血糖情况。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,随着科学技术的进步，基础医学与临床医学的不断发展，对糖尿病的研究越来越深入，对糖化血红蛋白在糖尿病诊断与治疗上的价值越来越明确，为糖化血红蛋白分析仪在临床的进一步推广应用打下了良好的基础。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,对糖尿病及其并发症预防和治疗的两项研究 在20世纪与21世纪之交的这一段时期正是内分泌治疗学上的丰收期，许多项多中心、大样本、随机、对照、平行、队列群组(Cohort)、系列剂量、长疗程的临床试验的结果已经、正在或将被揭晓。最典型的例子是1993年结束的美国1型糖尿病并发症试
4、验(DCCT)及于1998年总结发表的历时20年的英国前瞻性糖尿病研究(UKPDS)。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,血糖控制在DCCT中，强化治疗组(每日注射胰岛素3-4次或用胰岛素泵治疗，每日测血糖数次，按需随时调整剂量)与常规治疗组(每日注射1-2次中、长效或混合胰岛素)相比，在平均疗程6.5年期间，两组糖化血红蛋白(HbA1c)中位数相差1.7%(7.2%比8.9%)，强化治疗组的视网膜、神经及肾脏病变减少50%-70%，大血管病变(心血管原因死亡、心肌硬化和重要周围血管病变)合并统计，减少41%。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,血糖控制在UKPDS研究
5、中，患者被追踪调查了10.0年(中位数)，共有53000病人年，因此这是在2型糖尿病中迄今为止较大的研究。在整个研究过程中，常规治疗组及强化治疗组中患者HbA1c 及空腹血糖水平的持续上升，反映了2型糖尿病病程的自然进展过程，以及b细胞功能的进行性退化。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,在血糖控制上，强化治疗可以产生较为积极的影响。在强化治疗组中，于研究开始后的第一年就已见到有HbA1c水平的显著改善， 并且在整个研究过程中均维持着这种改善。 在10年后，常规治疗组及强化治疗组间，HbA1c水平的绝对差异为0.9%(7.0%vs.7.9%，p0.0001)。,章丘市人民医院检验科
6、,HbA1c及其临床意义,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,糖化血红蛋白的临床意义主要体现在以下几点：1、增高：测定b1c可以了解糖尿病人在23个月的血糖控制情况。此外，用含葡萄糖的透析液作血透的慢性肾衰病人，地中海贫血和白血病病人亦增高。降低：溶血性及失血性贫血，慢性肾衰，慢性持续性低血糖症等。,章丘市人民医院检验科,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,2、糖化血红蛋白不仅可作为糖尿病的病情监测指标，亦可作为轻症、2型、“隐性”糖尿病的早期诊断指标。但不是诊断糖尿病的敏感指标，不能取代现行的糖耐量试验，可列为糖尿病的普查和健康检查的项目。,章丘市人民医院检验科,HbA1
7、c及其临床意义,3、正常人的糖化血红蛋白6.0。如果9时，说明患者存在着持续性高血糖，可以出现糖尿病肾病、动脉硬化、白内障等并发症。因此，临床经常以糖化血红蛋白作为监测指标来了解患者近阶段的血糖情况，以及估价糖尿病慢性并发症的发生与发展情况。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,4、对预防糖尿病孕妇的巨大胎儿、畸形胎、死胎，以及急、慢性并发症发生发展的 监督具有重要意义。 5、对于病因尚未明确的昏迷或正在输注葡萄糖（测血糖当然增高）抢救者，急查糖化血红蛋白具有鉴别诊断的价值。,章丘市人民医院检验科,HbA1c及其临床意义,6、对于糖化血红蛋白特别增高的糖尿病患者，应警惕如酮症酸中毒等
8、急性合并症的发生。 总之，糖化血红蛋白是一项说服力较强、数据较客观、稳定性较好的生化检查，能反应糖尿病患者2个月以内的糖代谢状况，同时与糖尿病并发症尤其是微血管病变关系密切，在糖尿病学上很有临床参考价值。,章丘市人民医院检验科,糖化血红蛋白正常值一般为4.46.2 ，目前糖化血红蛋白控制的理想目标是小于6.5%。无论用什么方法反映血糖的变化，最后都要以糖化血红蛋白的变化作为最终评价一种药物或一个治疗方案在血糖控制上是否有效的指标。是否了解患者糖化血红蛋白控制水平，对临床医生的影响是不同的。1989年在新英格兰医学杂志上发表的一个相关研究中， 240例糖尿病患者被分成两组，每3个月检测一次糖化血
9、红蛋白，其中一组医生不了解患者糖化血红蛋白值，而另一组医生了解。1年后，在医生了解患者糖化血红蛋白值的一组，患者的糖化血红蛋白值从10.1下降到9.5，而另一组患者的糖化血红蛋白值的控制水平没有变化，糖化血红蛋白的下降在这两组间比较，差异有显著性（P90% HbA2 22 - 2.5%* HbF 22 - 1.0%* HbA1a1 22 F-1.6-DP 1.0% HbA1a2 22 G-6-DP 1.0% HbA1b 22 ? 1.0% HbA1c 22 Glucose 4-6%* HbA1d 22 ? - Hb的蛋白质部分叫珠蛋白，它是由两对肽链组成的四聚体。每条肽链各 接合一个血红素，故
10、每分子Hb均含有4条肽链和4个血红素。,章丘市人民医院检验科,Hemoglobin糖化反应,Hemoglobin, chain-NH2+,glucose,快速,慢速,HCOI HCOHI HOCHI HCOHI HCOHI CH2OH,HCN-chainI HCOHI HOCHI HCOHI HCOHI CH2OH,CH2NH-chainI COI HOCHI HCOHI HCOHI CH2OH,Aldimine（Schiff碱) (Labile HbA1c) 不稳定型A1c,Ketoamine（酮胺化合物） (Stable HbA1c) 稳定型A1c,章丘市人民医院检验科,测定方法,(1)离
11、子交换层析 (2)电泳法 (3)亲和层析 (4)免疫分析 (5) 酶法 (6) POCT,章丘市人民医院检验科,离子交换层析,基于电荷差异进行分析。糖化血红蛋白带正电荷比未糖化HB少，分别洗脱，计算峰值。 美国糖化血红蛋白标准化计划（NGSP）使用BIO-REX70阳离子交换树脂HPLC方法作为参考方法。,章丘市人民医院检验科,HPLC (high performance liquid chromatography),基于Hb链N末端缬氨酸糖化后所带电荷不同而建立的.在中性pH条件下,HbA1c携带的正电荷相对较少,因此可通过HPLC法将与其它组分(HbA1c,HbA1b,HbA0,HbA2)
12、区分开.(约有10-20%HbA1c),章丘市人民医院检验科,章丘市人民医院检验科,章丘市人民医院检验科,HbA1c,章丘市人民医院检验科,2、电泳法,1980年代出现，也是基于电荷差异进行分析。方法简单，不受T,PH影响，但时间长，成批测量。 临床已少用。,章丘市人民医院检验科,(3)亲和层析,基于结构不同进行分析。糖化血红蛋白比未糖化HB对m-氨苯基硼酸亲和力强，用山梨醇分别洗脱后，计算峰值。 检测结构为总糖化HB,不受T,尿毒症，SCHIFF BASE的干扰。 室内精密度良好，室间差异大。,章丘市人民医院检验科,4、免疫分析,早在1978年就有介绍，80年代单克隆抗体技术运用后有了快速发
13、展。 精密度，相关性良好。 受到HB变异影响，可用于生化分析仪，不同厂家可比性差。,章丘市人民医院检验科,(5) 酶法,近今年推出在生化分析仪上测定。 用蛋白酶切断HBA1C的B链N末端的糖化二肽，在果糖氨基酸氧化酶作用下，生产H2O2- 精密度好，同HPLC,免疫法有良好相关性。,章丘市人民医院检验科,(6) POCT,利用硼酸亲和原理在颜色反射计上进行检测。 糖化血红蛋白特异性与硼酸结合成蓝色 未糖化HB成红色。通过光强度比例计算HBA1C含量。 便携，快速，精密度准确度稍差，对HB量有较大限制。,章丘市人民医院检验科,主要问题：标准化,1993，美国临床化学协会（AACC)，-NGSP 1995，国际临床化学协会(IFCC),-参考系统。纯度98%的HBA1C,和HBA0.,章丘市人民医院检验科,THANK YOU!,
