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1、第十章 风湿病与免疫性疾病的实验诊断 第十一章 肿瘤的实验诊断,检验科免疫室 史晓敏,第十章 风湿病与免疫性疾病的 实验诊断,免疫系统 immune system,人体的防卫系统 监视自己 抵御外侵,免疫性疾病 immuno diseases,自身免疫性疾病 (autoimmune diseases)* 变态反应性疾病 (allergic diseases)* 免疫缺陷性疾病 (immunodeficiency diseases) 移植排斥 (transplantation rejection) ,教学内容 contents,目前临床常用的与免疫性疾病相关的一般检查项目及免疫功能试验 自身免疫
2、性疾病、变态反应性疾病的特异检查项目及其在实验诊断中的应用,第一部分,一般检查 及免疫功能试验,免疫性疾病,一般检查血常规、尿常规、肝肾功能、血沉、C反应蛋白 免疫功能试验 体液免疫细胞免疫,免疫球蛋白定量（掌握） 克隆性免疫球蛋白的分类与鉴定（熟悉）免疫球蛋白轻链测定（熟悉） 补体测定（熟悉） 冷球蛋白测定（了解）血液淋巴细胞免疫表型分析（熟悉） 细胞因子测定（了解）,免疫球蛋白 immunoglobulin, Ig,概念 B细胞经抗原刺激后分化为浆细胞后所产生的一类具有抗体活性及化学结构与抗体相似的球蛋白。 分布 血液、体液、外分泌液及某些细胞的胞膜上。 功能与病原微生物发生免疫反应，清除
3、抗原物质，保持自稳,免疫球蛋白结构示意图,免疫球蛋白的分类,根据重链的不同分为五大类： IgG （） IgA （） IgM（） IgD（） IgE（）,IgG,血清中含量最高和最主要的Ig，占Ig的70-80。 是再次免疫应答的主要抗体，对各种病毒、细菌、寄生虫等都具有抗体活性。 它是唯一能够通过胎盘的Ig。,IgA,分为二种：血清型与分泌型 血清型主要由肠系膜淋巴组织的浆细胞产生，在血液中循环。 分泌型由呼吸道、消化道、泌尿生殖道等的粘膜固有层中的浆细胞产生，通过外分泌腺导管分泌至唾液、乳液、泪液、气管和胃肠道分泌液中。 分泌型IgA通过阻止微生物穿过粘膜在防御病毒和细胞感染方面起重要作用。
4、,IgM,是分子量最大的Ig,占Ig的5-10%。 当机体受到抗原刺激后最先产生的Ig，水平增高说明有近期感染。 是极为有效的凝集和溶解细胞的因子，天然血型抗体(抗A、抗B)、冷凝集素等均属此类。,IgD,仅占血清Ig的0.02-1%，它的生理功能尚未完全了解。,IgE,为血清中含量最少的一种Ig (0.002%)，是一种亲细胞性抗体，与变态反应、寄生虫病等有关。,免疫球蛋白的定量检测,适应症了解体液免疫功能 标本类型血液、尿液、脑脊液、浆膜腔积液 参考区间血清 IgG 6.94-16.18 g/LIgA 0.68-3.78 g/LIgM 0.60-2.63 g/L 速率散射比浊法IgE 10
5、0 IU/mL 荧光免疫法,临床意义 血清Ig增高见于：慢性感染、慢性肝病、自身免疫病、多发性骨髓瘤、过敏性疾病等。 血清Ig减低见于：体液免疫缺陷病、联合免疫缺陷病、免疫抑制剂长期治疗后、肾病综合征等。 尿液Ig增高提示：肾小球受损 脑脊液Ig增高提示：中枢感染性疾病,免疫球蛋白的单克隆/多克隆鉴定,适应症1.定量检测发现某一类Ig异常增高2.血清蛋白电泳出现M蛋白（monoclonal protein） 标本类型血清、尿液 参考区间无单克隆性Ig或轻链区带出现（免疫固定电泳）,临床意义单克隆性Ig出现主要见于免疫增殖性疾病，如多发性骨髓瘤、重链病、轻链病、原发性巨球蛋白血症等。,免疫球蛋白
6、的轻链测定 Light chain,轻链产生的原因轻链分为和两型，正常人血清无游离的轻链，当重链和轻链合成不平衡时会出现过多的轻链游离于血清和尿液中 标本类型血清、尿液（晨尿或24小时尿液） 临床意义增高见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症等,补体测定 Complement,是一组具有酶活性，不耐热，功能上连续反应的糖蛋白，是抗体发挥溶细胞作用的必要补充条件，故称为补体。 目前临床多检测补体成分中的C3、C4 C3、C4增高见于急性炎症、传染病早期、某些肿瘤；降低见于急性肾小球肾炎、SLE、RA等。狼疮性肾炎时，C3含量减低，当病情好转时，含量恢复正常。 注意：检测必须用新鲜血清标本,免疫功能试验体
7、液免疫细胞免疫,免疫球蛋白定量（掌握） 克隆性免疫球蛋白的分类与鉴定（熟悉） 免疫球蛋白轻链测定（熟悉） 补体测定（熟悉） 冷球蛋白测定（了解）血液淋巴细胞免疫表型分析（熟悉） 细胞因子测定（了解）,淋巴细胞免疫表型分析,淋巴细胞免疫标志主要包括：T细胞免疫标志：CD3（共同）CD4（TH）CD8（Tc/Ts）B细胞免疫标志：CD19NK细胞免疫标志：CD16、CD56*CD: cluster of differentiation,淋巴细胞免疫表型分析,应用流式细胞术(flow cytometry， FCM) 计数带有不同CD标记的淋巴细胞的绝对数以及百分比 应用 免疫缺陷病等的辅助诊断与鉴别
8、 造血干细胞移植后免疫重建 移植后免疫监测 恶性肿瘤放化疗的疗效观察,第二部分,免疫性疾病相关的 特异检查项目,自身免疫性疾病 Autoimmune disease，AID,概念由于过度而持久的自身免疫反应导致组织器官损伤并引起相应器官病变或临床症状的一类疾病。 血清学特点出现多种自身抗体并且滴度较高 常用的自身抗体检查项目,常用的自身抗体检查项目,抗核抗体 掌握 抗双链DNA抗体 熟悉 抗可提取性核抗原抗体 熟悉 抗中性粒细胞胞浆抗体 了解 抗心磷脂抗体 了解 类风湿因子 掌握,Definition,Traditional 抗细胞核内抗原的抗体 modern抗细胞内所有核酸或核蛋白的抗体,抗
9、核抗体 antinuclear antibody, ANA,1. 抗DNA抗体2. 抗组蛋白抗体3. 抗非组蛋白抗体4. 抗核仁抗体: PM-Scl ，RNA多聚酶 5. 抗其他细胞成分抗体：线粒体，中心体，肌动蛋白 ,抗双链DNA(dsDNA)抗体 抗单链DNA(ssDNA)抗体 抗左旋DNA(z-DNA)抗体,总组蛋白抗体(AHA) H1 , H2A , H2B , H3 , H4,抗ENA抗体: nRNP , Sm , SSA , SSB , Scl-70 , Jo-1 , PCNA , Ku , Mi-1 , Mi-2 , RANA 抗着丝点抗体(ACA),Classification
10、,系统性红斑狼疮 (SLE) 活动期 非活动期 药物诱导的红斑狼疮 (DIL) 混合性结缔组织病（MCTD、Sharp综合征） 类风湿性关节炎 (RA) 进行性系统性硬化症 (pSS) 多发性肌炎及皮肌炎 (PM or DM) 干燥综合征 (SS) 慢性活动性肝炎 (CAH) 溃疡性结肠炎 (UC) 其它风湿病 正常人,95100 80100 100 100 2040 2050 8595 3050 7080 3040 26 5-10,ANA的阳性率 (%),Clinical Significance,Screening Diagnosis Activity estimate Therapy m
11、onitoring,Clinical Significance,of autoimmune diseases,Laboratory examination of ANA,间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence , IIF)酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay , ELISA)放射免疫法(radioimmunoassay , RIA)免疫双扩散法(agar gel double immunodiffusion , ID or DID)免疫印迹法(immunoblotting , IB),Test Methods of
12、ANA,Test Principle of IIF,基质制备容易抗原谱完整特异性高,IIF,gold standard of ANA testing,阳性,实 验 室,临 床,间接免疫荧光法,ELISA 免疫双扩散法 免疫印记法,阴性,筛查,分型,Relevance of disease to ANA,细胞核：均质型（homogeneous pattern, H)斑点型（speckled pattern, S)：又称核颗粒型着丝点型（centromere pattern）核点型（nuclear dots, ND)核膜型（membranous pattern, M) ：又称周边型核仁型（nucl
13、eoli pattern, N) 细胞浆：胞浆型 分裂期细胞阳性：纺锤体、中心粒、中间体等,Common immunofluorescence patterns,Homogeneous pattern,EUROIMMUN,HEP-2细胞,猴 肝,靶抗原,dsDNA核小体组蛋白,SLE 60-90%SLE 58-71%97-99% DIL,相关疾病,Coarse speckled pattern,EUROIMMUN,HEP-2细胞,猴 肝,靶抗原,U1-nRNPSm,MCTD, Sharp syndrome95-100%SLE 5-30%,相关疾病,Fine speckled pattern,E
14、UROIMMUN,HEP-2细胞,猴 肝,靶抗原,SS-ASS-B,SS 40-80% SLE 30-40% PBC 20% Neonatal lupus 100%SS 40-80% SLE 10-20%,相关疾病,Centromere pattern,EUROIMMUN,HEP-2细胞,猴 肝,Progressive systemic sclerosis , limited form80-95%,Nuclear dots,EUROIMMUN,HEP-2细胞,猴 肝,Primary biliary liver cirrhosis , 10-30%,Membranous pattern,HEP-
15、2细胞,猴 肝,Chronic active autoimmune hepatitis,Nucleoli pattern,猴 肝,HEP-2细胞,Progressive systemic sclerosis , diffuse form Polymyositis/dermatomyositis/overlap syndrome,常见风湿病的抗核抗体谱阳性率,How to read an inspection report of ANA,positive or negative fluorescence pattern titer antigen reference range,Inspection report of ANA,Whats Titer ?,陽性 陽性 陽性 陽性,抗双链脱氧核糖核酸抗体 （抗dsDNA抗体）,检测方法IIFELISA,抗双链脱氧核糖核酸抗体 （抗dsDNA抗体）,临床意义： 1、SLE诊断标准之一 2、抗dsDNA抗体与SLE疾病活动密切相关，用于监视SLE病情变化，药物治疗效果观察等 3、如果健康人血清中检测到抗dsDNA抗体，其中85%的人在5年内发展为SLE,
