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1、临床常见细菌鉴定的思路,细菌鉴定的指南,一、培养特性1、温度2、气体3、营养要求4、PH5、湿度,细菌鉴定的指南,二、生长特性1、生长速度2、菌落特征3、液体培养基的生长特性 三、细菌的形态与染色 四、生理及生化特性 五、血清学诊断 六、致病性试验：动物接种,细菌的分类及鉴定步骤,细菌的分类单位 由高到低 分7个层次，界 门 纲 目 科 属 种有的种还分血清型（如沙门菌及志贺菌等）和生物型（如流感、副流感嗜血杆菌1-8生物型等）还有噬菌体分型（如伤寒沙门菌、铜绿等）。,细菌鉴定步骤,1、首先必须分离有单个菌落的纯培养 2、革兰氏染色，先确定是G-b，G+b，G+c，G-c 3、如为G-b，G-
2、c先做氧化酶试验，如为G+c或G+b先做触酶，根据结果，选择最少几项关键性鉴定试验。,G+c(动力、触酶、O/F),w/- F,+ O/-,+ F,+/- - F,微 球 菌,气 球 菌,链 球 菌,葡 萄 球 菌,革兰阳性球菌 之葡萄球菌,一、革兰阳性球菌，排列成葡萄状，触酶（+） ：首先做血浆凝固酶试验、甘露醇、尿素及对新生霉素的敏感性，如果确定不了，再加做麦芽糖、蔗糖、蕈糖、木糖、硝酸盐，同时结合菌落颜色和溶血情况。,几种常见葡萄球菌的鉴定,凝固酶 甘露醇 尿素 新生 金葡 + + - S 中间 + - - S 表皮 - - d S 腐生 - + + R 溶血 - d - S,革兰阳性球
3、菌 之链球菌,二、革兰阳性球菌，排列成链状，触酶（-） ： 根据溶血情况，先做七叶苷 6.5%NaCl 肉汤。,溶血：1、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽S为化脓性链球菌2、 - - 微混，加做CAMP+为B群链球菌（无乳链球菌）3、 - - 沉淀生长，加做杆菌肽R，为溶血性链球菌（非A、B）4、 + 沉淀生长，加做杆菌肽R，为咽峡链球菌（草链中的一种）,革兰阳性球菌之链球菌, 溶血：1、 -或+ - 沉淀生长，为草链2、 - - 混浊生长，加做胆汁溶菌试验+，菊糖+，Optochin S，为肺炎链球菌,不溶血或 溶血：1、 + - 混浊生长，为D群链球菌2、 + + 混浊生长，为肠球菌,革兰阳
4、性球菌,如D群链球菌和肠球菌要进一步鉴定：,D群链球菌乳糖+ -牛链 马肠链,肠球菌山梨醇 + -棉子糖 甘露醇+ - + -粪肠球 禽肠球 屎肠球 坚忍肠球,革兰阳性球菌之绿色气球菌,绿色气球菌是一种条件致病菌，它可引创面感染、败血症等。 绿色气球菌在血平板上生长灰色、光滑、有 溶血的菌落。革兰染色为G+C，排列呈四联状。 绿色气球菌生化反应试验 +% 试验 +% 试验 +%触酶* 0 麦芽糖 100 阿拉伯糖 48硝还* 0 蔗糖 100 棉子糖 19七叶苷 * 100 乳糖 90 木糖 106.5%NaCl * 100 果糖 100 山梨醇 0葡萄糖* 100 蕈糖 90甘露醇* 86
5、水杨苷 76*为确诊试验,革兰阳性球菌之溶血孪生球菌,本菌染色多变，可以染成阴性，呈单个或成双、短链排列。血板上35度培养24h形成较大的菌落，呈水滴状，易融合生长，48h后菌落周围出现宽大的透明溶血环，有自溶现象，类似肺炎链球菌的菌落。肉汤培养中呈混浊生长，6.5%高盐肉汤中能生长。生化反应：触酶-，氧化酶-，分解葡萄糖、果糖；不分解乳、麦、菊、蔗、阿拉伯糖、甘露醇、卫矛醇；七叶苷-，靛基质-。对青、氯霉素敏感，对丁胺卡那耐药。,革兰阳性球菌之马红球菌,马红球菌是马、猪和牛的致病菌，近来发现本菌也可引起艾滋病、血液病和肾移植病人的肺部感染。,本菌为革兰阳性无动力杆菌，为多形态，有时呈杆状，有
6、时呈球状。在血平板上35 24-48h，可长出淡桔红色到粉红色的粘液样大菌落，不溶血。,生化反应：触酶+，氧化酶-，硝还+，靛基质-，枸盐-，明胶酶-，脲酶不定，不分解糖类，可形成类CAMP样反应。,G-c(触酶、氧化酶、 O/F),+ + o,脑膜炎奈瑟氏菌 淋病奈瑟氏菌 其他奈瑟菌,布兰汉菌属 金黄色奈瑟菌,革兰阴性双球菌,氧化酶+脑膜炎 卡他布 淋病双球菌 兰汉菌 奈瑟菌 葡萄糖 + - + 麦芽糖 + - - 硝还 - + - DNA酶 +,G-b(动力、氧化酶、触酶、O/F),- + + -,莫 拉 菌 属,+ + + -,- + + fw-,- + + -,+ + + 0/f,-
7、+ + f,+ + + F,- - + O/-,- - - F,+ + +,+ - + -,嗜 血 杆 菌,黄 色 杆 菌,莫 拉 菌 属,假 单 胞 菌,巴 斯 德 菌,弧 菌 属,不 动 杆 菌,产 碱 杆 菌,军 团 菌 属,弯 曲 杆 菌 属,邻 单 胞,气 单 胞,+ +/- - F,肠 杆 菌 科,革兰阴性杆菌之嗜血杆菌,嗜血杆菌为G-小杆菌，在巧克力平板上生长灰色、透明的小菌落，似露滴状，有时呈球杆菌，有时呈丝状，一般情况下在血平板上不生长。,氧化酶（弱+），在血平板和MH上同时做卫星试验，两种平板上均阳性，为副流杆菌嗜血杆菌，血平板上阳性、MH上阴性，为流感嗜血杆菌。,注：杜克
8、嗜血杆菌是软性下疳的病原菌，72h后才生长细小的菌落，阴道分泌物培养时要注意。,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,涂片为革兰阴性杆菌，做氧化酶试验。1、氧化酶- 做全套生化 克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、葡萄糖、甘露醇、IMViC、硝酸盐,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,致病性大肠埃希菌 克氏双糖、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、IMViC、山梨醇。,迁徙生长，可能为变形杆菌 克氏双糖、尿素、苯丙氨酸、葡萄糖酸盐、甘露醇、靛基质、麦芽糖。,灰凸的菌落，染色为典型的阴性球杆菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、丙二酸盐、42。,灰黄色菌落 可能为嗜麦芽窄食假单胞菌
9、同氧化酶+ 生化试验。,革兰阴性杆菌手工鉴定的主要生化试验,2、氧化酶+全套生化 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、乙酰胺。可疑气单胞菌 克氏双糖、葡萄糖、甘露醇、靛基质、枸橼酸盐、硝酸盐、七叶苷、赖氨酸、蔗糖、VP（25）。可疑弧菌 同气单胞菌生化试验，另加不同浓度的NaCl。,肠杆菌科,肠杆菌科为一大群革兰阴性杆菌，氧化酶阴性. 多数菌种为周毛菌，能运动，少数无鞭毛，不能运动。 绝大多数菌种在普通营养琼脂上生长良好。 发酵葡萄糖，还原硝酸盐。 临床常见的10多个菌属，30多个种。,肠杆菌科与其他科细菌的区别,试验 肠杆菌科 弧菌科 非发酵菌葡萄糖发酵 F F O/- 氧化酶 - + +* 形态 杆状 弧形或杆状态 杆状 鞭毛 周毛或无 单毛 单毛、丛毛、 周毛或无* 不动杆菌和嗜麦芽窄食假单胞菌除外。,肠杆菌科的初步分类,肠杆菌科初步分类 菌属 苯丙氨酸 葡萄糖酸盐 埃希菌属 志贺菌属 沙门菌属 枸橼酸杆菌属 爱德华菌属 耶尔森菌属 克雷伯菌属 + 肠杆菌属 + 沙雷菌属 + 哈夫尼亚菌属 + 变形杆菌属 + 摩根菌属 + 普罗维登斯菌属 + ,
