《实验六 鸡蛋清中清蛋白的提取与定量测定》由会员分享，可在线阅读，更多相关《实验六 鸡蛋清中清蛋白的提取与定量测定（3页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、实验八：鸡蛋中卵清蛋白的提取和定量测定分 16 组，每组两人一、目的掌握盐析沉淀法提取鸡蛋卵清蛋白的提取和定量测定（考马斯亮蓝 G-250）二、原理沉淀法也称溶解度法。其纯化生物大分子物质的基本原理是，根据各种物质的结构差异（如蛋白质分子表面疏水基团和亲水基团之间比例的差异）来改变溶液的某些性质,( 如 PH，极性离子强度，金属离子等) ，就能使抽提液中有效成分的溶解度发生变化。换句话说就是，不同物质置入相同的溶液，溶解度是不同的；相同的物质置入不同的溶液，溶解度也是不一样的。因此选择适当的溶液就能使欲分离的有效成分呈现最小溶解度，而使杂质呈现最小的溶解度，或者相反，有效成分呈现最小溶解度，而
2、杂质呈现最大的溶解度，然后经过适当的处理，即可达到从抽提液中分离有效成分的目的。盐析法是根据蛋白质再稀盐溶液中，溶解度会随着盐浓度的增高而上升（盐溶） ，但当盐浓度增高到一定数值时，其溶解度又逐渐下降，直到蛋白质析出（盐析） ，盐析导致蛋白质分子表面电荷被中和，水化膜被破坏，最终引起蛋白质分子间相互聚集并从溶液析出。三、实验材料鸡蛋四、实验步骤1.将鸡蛋一端敲一小孔，用吸管吸取卵清蛋白 2.5 毫升，加生理盐水2.5 毫升得到稀释液2.逐滴加入饱和硫酸铵溶液 5 毫升（边加边搅拌）静置 10 分钟，3000 转每分钟离心 10 分，弃沉淀，取上清液。3.再在上清液中加固体硫酸铵，至不能在溶解硫
3、酸铵为止，静置 10分钟4. 置于离心管中以 3000 转每分钟离心十分钟，弃上清液，沉淀用5 毫升生理盐水溶解（粗产品）5. 取 1 毫升粗产品进行稀释，使其吸光值在 0.1-1 之间。6. 用 1 毫克每毫升的标准牛血清蛋白溶液制作标准曲线及测定上述稀释后产品的蛋白含量7.记录结果，数据处理。实验八、鸡蛋中卵清蛋白的提取和定量测定分 16 组，2 人一组，所需仪器：大试管架 16 个带塞比色管 16 组7 支=128 支比色皿 6 套4 个=24 个722 分光光度计 6 台1 毫升移液管 162 支=32 支2 毫升移液管 162 支=32 支5 毫升移液管 162 支=32 支10 毫
4、升带赛试管 162 支=32 支钥匙 6 把吸管 16 支吸耳球 162 支=32 个离心管 162 支=32 支离心机 4 台所需要药品：（1）标准蛋白质溶液：0.1mg/ml（每组需 6 毫升）四个班配 500 毫升。称取 50 mg 牛血清蛋白溶于 0.9%氯化钠溶液 500 毫升。（2）考马斯亮蓝 G-250 染料试剂（每组需 50 毫升）配 3000 毫升棕色瓶保存称考马斯亮蓝 G-250 0.1 克，溶于 95%乙醇溶液 50 ml，再加入 85%磷酸（50g/L）100 ml，用水稀释至 1000 ml，此溶液在室温下可放置1 个月（3）0.9%氯化钠溶液（每组需 8 ml）配 1000 ml（4）硫酸铵饱和溶液（配 500 毫升）（5）硫酸铵固体（6 瓶）
