兽医免疫学常用试剂配方.doc

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1、1常用试剂配方1. 黏片剂 铬明矾明胶1明胶与 0.1铬明矾(硫酸铬钾)等量混合。5060中加热,用纱布过滤。一般载玻片预处理时涂明胶三层,自然干燥。2. 多聚甲醛戊二醛固定液10ml 25戊二醛20ml 10多聚甲醛溶液 (w/v)50ml 0.2M PH7.4PBS20ml 蒸馏水3. DAB 显色液配方3,3二胺基联苯盐酸盐 (DAB) 20mgPBS 50ml30过氧化氢 50ul用 PBS 溶解 DAB,用前加过氧化氢混匀,避光染色4. 0.2MPBS 配方 PH7.3 无钙镁Nacl 8.0gKcl 0.2gNa2HPO4 1.15g (Na 2HPO412H2O 2.9g)KH2

2、PO4 0.2g双蒸水 1000ml5. 0.01M PH7.4 磷酸盐缓冲液 (PBS)先配 0.1M PH7.4 PBKH2PO4 2.61g Na2HPO412H2O 28.94g加蒸馏水至 1000ml用时,取上液 100ml,加 NaCl8.5g,加蒸馏水 1000ml.即为 0.01M PH7.4 PBS6. 盐酸酒精配方70乙醇 100ml盐酸 1ml混匀 7. 清洗液配方(玻片)重铬酸钾:120g 蒸馏水:1000ml 浓硫酸: 200m先将重铬酸钾与水置塑料桶中搅拌溶化,置桶于冷水中,慢慢加入浓硫酸并不断搅拌,溶液透明即可。此液可使用多次,至颜色变暗绿时,即失去清洁能力,不能

3、再使用。J28. 10中性福尔马林固定液配方 PH7.0甲醛 100mlKH2PO4 4gNa2HPO4 6.5g ( Na 2HPO412H2O 16.4g)蒸馏水 900ml9. 多聚赖氨酸多聚赖氨酸 5g双蒸水 1000ml配制方法:称取多聚赖氨酸,溶于双蒸水充分溶解,此溶液为 0.5%,4保存,也可-20保存备用,多聚赖氨酸可反复冻融效果无明显影响。工作液再稀释 10-50 倍,即工作浓度可为 0.01-0.05%。使用时,将洗净的载玻片放入多聚赖氨酸溶液中浸泡 5min,60烤箱烘烤 1h,或室温过夜自然干燥,装盒备用。10. 枸橼酸钠0.01M 枸橼酸缓冲液:1000ml 蒸馏水中

4、加枸橼酸三钠(C 6H5Na3O7.2H2O)3g,枸橼酸(C 6H8O7.H2O)0.4g使用时配成 3.8%溶液,0.5ml 可溶于 5ml 全血。11. 5%碘酊的配制碘片 2g碘化钾 1g等量纯化水和 95%乙醇加至 40ml 制成酊剂,先将碘化钾 1g 放入大腹瓶中,加水和乙醇等量混合液 20ml 使其溶解后,再将碘片放入纱布囊中悬挂于液面令碘溶解,最后加余量的水和乙醇等量混合液冲洗纱布囊,至含量为40ml。12. 2.5%戊二醛固定液0.2M 磷酸缓冲液 50ml25%戊二醛水溶液 10ml双蒸水加至 100ml(即最终体积为 100ml)(本次采用缓冲液为本实验室 0.2MPBS

5、 缓冲液,而所查 0.2M 磷酸缓冲液配方为:甲液:Na 2HPO4.12H2O 71.64g 加蒸馏水溶解成 1000ml乙液:Na 2HPO4.2H2O 31.21 加蒸馏水溶解成 1000ml按下表混合甲乙两液即得所需 PH 的磷酸缓冲液(50ml):PH 6.4 6.6 6.8 7.0 7.2 7.4甲液(ml)13.3 18.8 24.5 30.5 36.0 40.5乙液(ml)36.7 31.2 25.5 19.5 14.0 9.5磷酸缓冲液对细胞无毒性作用,常用于配制戊二醛固定液,并适于做灌注固定。本缓冲液的特点是固定时容易产生沉淀,并容易生长细菌,不能长期储存。 )13. HE

6、 染色分化液(1) 0.5%盐酸水溶液(体积比)J3盐酸 0.5ml蒸馏水 100ml一般是配 500ml,即 2.5ml 盐酸 + 500ml 蒸馏水(亦可用自来水) 。(2) 0.5%氨水氨水(氢氧化铵) 0.5ml自来水 100ml一般是配 500ml,即 2.5ml 氨水 + 500ml 自来水。14. 油红 O 染液油红 O 1g60%磷酸三乙酯 100ml将溶液水浴加热至 1005min,并不停地搅拌,趁热过滤,待冷却后再过滤一次。该溶液可在冰箱内 4保存,恢复室温,过滤后使用。15. 甘油明胶液明胶 5g甘油 35ml蒸馏水 30ml将明胶溶于蒸馏水中,水浴加热使明胶溶解,再加甘

7、油充分混合,加 1 2 粒石炭酸,冷却后 4保存,用时水浴加热。 16. 苏丹染液苏丹 0.5g60%磷酸三乙酯 100ml将溶液水浴加热至 1005min,并不停地搅拌,趁热过滤,待冷却后再过滤一次。该溶液可在冰箱内 4保存,恢复室温,过滤后使用。17. 苏木素染液改良的哈瑞(Harris)苏木素液A 液: 苏木素 1g 无水酒精 10mlB 液: 硫酸铝钾 20g 蒸馏水 200ml两液分别溶解后混合,加热煮沸后,徐徐加入红色氧化汞 0.5g,此时有大量气泡产生,故容器宜大,以防液体溢出,然后将染液迅速冷却, ,冷却后过滤即可使用,使用前每100ml 加入冰醋酸 6ml,并加入甘油(丙三醇

8、)10ml。18.伊红染液伊红有水溶性和醇溶性,伊红染液一般浓度为 0.25% 1%.0.5%醇溶性伊红染液伊红 B0.5g 95%酒精 100ml将伊红溶于酒精内搅拌,全部溶解后即可使用,染色时间位 13 分钟。19. 2%碘酊配制碘 20g 碘化钾(或碘化钠)15g 70-95%乙醇 500ml 加水至 1000ml取碘与碘化钾,置 1000ml 量杯中,加稀醇,搅拌,溶解后,再加适量的稀醇,使全量成J41000ml。20. 75%酒精配制95%乙醇 75ml 蒸馏水 20ml将水加入乙醇里,带上一次性塑料手套将其混匀,导入瓶内。21. 蛋白甘油蛋清:甘油 = 1:1(体积比)22. 双抗(青霉素及链霉素溶液) 医学微生物学实验指导100 万 U 青霉素 1 瓶 链霉素 100 万 g 1 瓶 无菌三蒸水 40ml将 100 万 U 青霉素 1 瓶和链霉素 100 万 g 1 瓶 ,无菌操作溶于 40ml 无菌三蒸水中,分装于小瓶中置低温(-20)保存.应用时,于 99ml 培养基中加入 1ml 双抗(1%) ,即成为250U 及链霉素 250g。J

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