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1、常见微生物培养标本的采集,西双版纳州人民医院医学检验科 陈曙明,A proper clinical assessment is essential for optimal use of laboratory services!,正确获取临床微生物检查标本是 保证检查质量与提高病原分离阳性率最基本也是最关键的环节，这包括适宜的取材 时间、适当的取材 部位与适当的 方式获取检查标本。,1. 标本采集的一般原则,（1）采集部位 标本的采集部位以能够反映活动的病程为标准。 如伤寒患者，发病第1周应采集血液，第2周应采 集粪便和尿液，否则影响细菌的检出率。 （2）采集时机 采集时间最好是病程早期、急性期
2、，且必须在 使用抗菌药物之前采集，确保病原菌的检出。 （3）患者的准备 痰标本采集前，患者应该进行口腔清洁（包括 摘假牙、刷牙、漱口等）；尿液采集前，患者应 有足够的憋尿时间（不低于2h）。,4）采集方法 用于厌氧菌培养的临床标本，应尽量用注射器采集抽吸物，一般不要用拭子采集标本（除非是在床边采样并立刻接种）；脓肿部位采集最好不要直接采集脓汁部位，应采集脓腔底部或腔壁组织送检；自然排尿应采集中段尿；皮疹穿刺应采集第一滴血作培用； 血液标本采集应遵循两侧部位、两瓶、两套的原则。,（5）适量采集标本 为避免因标本量少引起的假阴性结果，标本最小采集量固体标本不少于1g，液体标本通常不少于1ml（分枝
3、杆菌及真菌检查不少于10ml）。 （6）无菌操作 采集标本时严格执行无菌操作程序。 （7）标本收集 采集的标本均应盛于惰性、广口、带螺旋帽、容积不小于50ml的无菌容器内送检。,2. 标本运送的一般原则,标本采集后应在1530min内送至实验室，若有延迟也 应在2h内送至实验室，否则会影响病原菌的检出。厌 氧培养标本原则上应在床边接种。标本如延迟送检， 需保存在相应的运送培养基中。怀疑标本中有理化因 素敏感的微生物（包括淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌和 流感嗜血杆菌等苛养型细菌）应立即运送和处理。通 常血液、脑脊液、生殖道、眼或内耳标本不要冷藏保 存。,3. 标本接收与处理的一般原则,有时送到实验室
4、的标本没有按要求选材、采集或运送，检验这些未受控制标本得出的结果，可能会给临床医生提供错误的信息，误导诊断和治疗。因此，实验室必须建立严格的接收或拒收标准，以杜绝没有按要求选材、采集或运送的标本进入检验程序。,不合格标本的拒收标准如下： （1）不正确的运送温度； （2）不正确的运送工具； （3）延长送检时间； （4）标本容器上未贴标签或错贴标签； （5）标本有泄漏； （6）盛标本的容器被压碎或有破裂； （7）标本有明显污染； （8）标本量不足或已干涸； （9）24h内重复送检的标本（血培养除外）； （10）对某种试验不适合的标本（如尿液做支原体培养等）。,我科现在使用的进口血培养瓶,我科现在使
5、用的国产血培养瓶,我科现用的无菌拭子管,我科现用的无菌杯,一、血液及骨髓培养,严格的无菌操作： 1.标准的皮肤消毒程序： a 70%乙醇擦拭静脉穿刺部位等待30S以上。 b 1%-2%碘酊作用30S或10%碘伏60S,从穿刺点向外画圈消毒，至消毒区域直径3cm以上。 c 70%乙醇脱碘：对碘过敏的患者，用70%乙醇消毒60S，待乙醇挥发干燥后采血。,一、血液及骨髓培养,2.采血部位 通常为肘静脉。 疑似细菌性心内膜炎时以肘动脉或股动脉采血为宜。 对疑为细菌性骨髓炎或伤寒病人，在病灶或髂前（后）上棘处严格消毒后抽取骨髓1ml作培养。,一、血液及骨髓培养,3.采血量与接种培养瓶程序 成人通常是81
6、0ml/瓶，儿童15ml/瓶。 对于血培养瓶的接种程序： a 用蝶形针：穿刺后需氧瓶厌氧瓶拔去瓶子再拔蝶形针。 b 用注射器：厌氧瓶需氧瓶拔去注射器 然后轻轻颠倒混匀数次，以防止血液凝固。,一、血液及骨髓培养,4.采血时间、血培养频率、培养瓶的选择 实际操作中采血的原则是尽量在使用抗菌药物之前采集。 一般的病人不同部位采集2套。 一般2周内没有用过抗菌药物的门诊或住院病人用普通瓶，2周内用过抗菌药物的门诊或住院病人用抗生素中和瓶。 需要特别注意的是抽好血后要注明抽血的时间。,一、血液及骨髓培养,采血后该立即常温送检，如不能及时送检请常温下保存不超过24h，切勿冷藏。,二、各种闭锁性的无菌体液培
7、养,闭锁性的穿刺液包括脑脊液、胸水、腹水、心包液、胆汁、关节液及鞘膜液等。一般可以按血培养操作。 需要特别注意的是：血培养瓶中的抗凝物质SPS（聚茴香脑磺酸钠）可能抑制个别细菌的生长，如脑膜炎、淋病奈瑟菌。,三、尿液培养,原则：标本采集应力争在未使用抗生素之 前，注意避免消毒剂污染标本。,三、尿液培养,1. 清洁中段尿：最好留取早晨清洁中段尿标本，嘱咐患者睡前少饮水，清晨起床后用肥皂水清洗会阴部，女性应用手分开大阴唇，男性应翻上包皮，仔细清洗，再用清冲洗尿道口周围；开始排尿，将前段尿排去，中段尿约1020ml直接排入专用的无菌容器中，立即送检，2h内接种。该方法简单易行，是最常用的尿培养标本收
8、集方法，但很容易受到会阴部细菌污染，应由医务人员采集或在医务人员指导下由患者正确留取。,三、尿液培养,2.耻骨上膀胱穿刺：使用无菌注射器直接从耻骨上经皮肤消毒穿入膀胱吸取尿液，是评估膀胱内细菌感染的“金标准”方法，但有一定的痛苦，患者难以接受。主要用于厌氧菌培养或留取标本困难的婴儿尿标本的采集。,三、尿液培养,3.直接导尿：按常规方法对会阴部进行消毒后，用导尿管直接经尿道插入膀胱，获取膀胱尿液，可减少尿液标本污染，准确地反映膀胱感染情况。但有可能将下尿道细菌引入膀胱，导致继发感染，一般不提倡使用。,三、尿液培养,4.留置导尿管收集尿液：利用留置导尿管采集标本时，应先消毒导尿管外部，按无菌操作方
9、法用注射器穿刺导尿管吸取尿液，操作时应防止混入消毒剂，注意不能从尿液收集袋中采集尿液。长期留置导尿管者，应在更换新导尿管24h内留取。,三、尿液培养,采集容器 1.应由不与尿液成份发生反应的惰性材料制成； 2.洁净、无菌、加盖、密封、防渗漏；不含防腐剂和抑菌剂； 3.广口、具有较宽的底部、容积应大于50ml、盒盖易于开启。,三、尿液培养,标本运送标本采集后应及时送检、及时接种，室温下保存时间不得超过2h（夏季保存时间应适当缩短或冷藏保存），4C冷藏保存时间不得超过8h，但应注意冷藏保存的标本不能用于淋病奈瑟菌培养。,四、粪便培养,腹泻、大便每日3次，性状异常，可为稀便、水样便、粘液便、脓血便伴
10、有恶心、呕吐、发热、腹痛等全身不适症；粪便涂片WBC 5个/HP。来自疫区的患者等。,四、粪便培养,用药前自然排便后挑取有脓血或黏液部位的粪便23g,液状粪便取絮状物12ml盛于无菌容器内送检（不超过2小时）。如不能及时送检，应按1:10比例与PH7.0磷酸盐甘油缓冲液混合保存。,四、粪便培养,对于排便困难或婴幼儿可用直肠拭子采集法（Cary-Blair运送培养基）送检（4冰箱保存不超过24小时）。 需要强调的是粪便培养要在抗生素使用之前或抗生素使用3天内采集。,五、呼吸道标本培养,一、上呼吸道标本采集培养 上呼吸道标本包括鼻、鼻咽、口咽拭子标本。在用抗生素之前（最好是晨起）患者用清水漱口后，
11、选无菌、不含抑制剂的预先用生理盐水或营养肉汤蘸湿的拭子直接在感染部位擦拭取样（有假膜或脓液存在的最好从膜底下擦拭）。采集后立即送检，2h。转运拭子不超过24h。,五、呼吸道标本培养,二、下呼吸道标本采集培养 1.痰2.气管吸出物3.气管镜标本,五、呼吸道标本培养,（一）自然咳痰： 1.以晨痰为好，咳痰前，患者用无菌生理盐水或凉开水漱口； 2.指导患者用力咳出深部痰，勿留取唾液和鼻咽腔分泌物。 3.对于自然咳痰有困难的患者，可用雾化吸入45的100g/LNaCl水溶液诱痰或无菌吸痰管抽取气管深部分泌物。,五、呼吸道标本培养,用无菌防漏容器收集标本，贴好标本信息（条码）后，在1h2h内（室温）送至
12、微生物实验室。 注1：若送检标本超过 2h，将导致有临床意义的致病菌数量减少，非苛养的口咽部定植菌过度生长。为防止口咽部 正常菌群的过度生长，可将标本放置 28环境，但培养分离到肺炎链球菌等苛养菌的机会和数量会减少。 注2：若标本延迟送检超过 2h 后未冷藏（超过 2h24h，28），应在报告中说明因延误送检标本，可能对培养结果造成的影响。,六、尿道、生殖道标本培养,一、尿道标本： 患者排尿1h以后采集。先用无菌生理盐水或洁净清水局部清洗，采取从尿道口溢出的脓性分泌物。无脓性分泌物溢出者，男性通过按摩，女性从阴道内压迫尿道或向前按摩使分泌物溢出采集标本。或者无菌拭子尿道内24cm旋转停留20s
13、后取出分泌物送检。,六、尿道、生殖道标本培养,二、生殖道溃疡标本 无菌生理盐水和手术刀清除溃疡面露出溃疡基底，渗出物集聚较明显时用拭子或吸管采集。,六、尿道、生殖道标本培养,三、宫颈、阴道、子宫内膜、输卵管、羊水、组织标本。 四、前列腺、精液标本。 需要注意B群链球菌筛查的阴道口和/或直肠拭子标本。,七、开放性脓液及创伤分泌物培养,在使用抗生素之前 1.先用生理盐水冲洗 2.揭去表面的结痂或表皮，有脓液的去除表 面的脓液。3.用沾湿生理盐水的无菌微生物拭子旋转的 去伤口底部肉芽组织处的脓液或分泌物于30分钟内送检。最长不能超过2小时。,总结,微生物标本的采集： 1、尽量在使用抗生素之前采集标本，如无法 停止抗生素的使用，尽量在下一次使用抗生素之前采集标本。 2、注意无菌操作，尽量去除杂菌的污染。对各种不同部位的采集方法要熟悉。,总结,3、采集好标本后要及时送检。 4、要做好查对工作，务必要做到患者信息、标本类型、采集部位、采集方法、采集时间要标识清楚。,不合格标本,不合格标本,不合格标本,合格标本,唾 液,脓痰,粘液样痰,带血痰,谢 谢！,
