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1、实验五培养基的配制与灭菌 一、实验目的1. 了解配制微生物培养基的基本原理；2. 掌握配制、分装培养基的方法；本实验通过常用的细菌培养基的配制，从而了解常规的配制培养基的过程；3.学会各类物品的包装、配制和灭菌。二、概述培养异养细菌最常用的培养基是牛肉膏蛋白 胨培养基（普通培养基）。培养基的种类很多， 根据营养物质的来源不同，可分为天然培养基、 合成培养基和半合成培养基等。多数培养基配制 是采用一部分天然有机物作碳源、氮源和生长因 子的来源，再适当加入一些化学药品，就叫半合 成培养基，其特点是使用含有丰富营养的天然物 质，再补充适量的无机盐配制十分方便，能充分 满足微生物的营养需要，大多数微生
2、物都能在此 培养基上生长。本实验配制的培养基就属此类。三、主要内容本实验除了配制培养基以外，还必须准 备各种无菌物品，包括培养皿、移液管的包 装，稀释水的准备等。1. 玻璃器皿的准备(1)培养皿的包装 (2)移液管的包装(3)棉塞的制作2. 稀释水（或生理盐水*）的配制(1)90mL蒸馏水250mL 的锥形瓶中，并放入约30颗玻璃珠，塞上棉塞后包扎。(2)9mL蒸馏水试管（18mm180mm，共4管）中，塞上棉塞后将4支试管包在一起。*生理盐水：质量浓度8.5g/L NaCl溶液3. 培养基的配制(1)牛肉膏蛋白胨培养基的配方：水100mL 琼脂2.0g NaCl 0.5g 蛋白 胨1g 牛肉
3、膏 0.5g pH 7.27.4本实验配120mL培养基。灭菌条件：121（相对蒸汽压力 0.103 MPa，1520min。(2)配制过程：a.称量：取少于总量的水于烧杯中，按配方 称取各种药品，逐一加入水中。b.加热溶解：将烧杯放在石棉网上，用文火加 热，并注意搅拌，待所有药品溶解后再补充水分之 所需要量。c.调节pH：一般刚配好的培养基是偏酸性的， 故要用1mol/L NaOH 调pH 至7.27.4。应缓慢加 入NaOH，边加边搅拌，并不时地用pH 试纸测试。d.分装：分装锥形瓶，分装试管（图13-9）。图13-9 培养基的分装 图13-10 斜面培养基的搁置图13-13 HVE-50
4、型高压灭菌 器图13-11 卧式高压蒸汽锅内部结构图e.加棉塞、包装后灭菌（见教材灭菌过程）。f.灭菌：因微生物学实验一般都要求对所研究 的实验材料进行无自然杂菌的纯培养，所以，实验 中所用的材料、器皿、培养基等都要经包装灭菌后 才可使用。现以HVE-50型高压灭菌器（图13-12）为 例，介绍其操作步骤：加水至水位；依次码放物品；打开电源，盖上盖子；预置灭菌温度和时间；加热-灭菌；结束，待显示器上温度下降至约90时，可打开盖子取物。关上电源。g.斜面的制作：灭菌后如需制成斜面培养基， 应在培养基冷却至5060时，将试管搁置成一定 的斜度，斜面高度不超过试管总高度的1/21/3（ 图13-10）。四、实验材料、器皿加压蒸汽灭菌器、培养皿、试管、移液 管、锥形瓶、烧杯、量筒、药物天平、玻棒 、玻璃珠、石棉网、角匙、铁架、表面皿、 pH试纸和棉花等；牛肉膏、蛋白胨、NaCl、 NaOH和琼脂等。五、注意事项使用煤气、各种玻璃器皿等，更要注意 安全。
