《细菌革兰氏染色》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细菌革兰氏染色（16页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 细菌普通染色和革兰氏染色 目的要求a. 掌握细菌涂片标本的制备方法和普 通染色的步骤和关键点 b. 掌握革兰氏染色法的步骤和关键点 c. 识别细菌的革兰氏染色结果并画图 d. 学习无菌操作技术 材料用具 显微镜，擦镜纸，纱布 革兰氏染液 香柏油,自来水,95%酒精; 载玻片,插镜纸,接种环,镊子,酒精灯; 金黄色葡萄球菌,枯草芽孢杆菌,未知 菌12小时的液体培养液 大肠杆菌和酵母菌平板实验步骤n1.涂片n左手持菌液试管,右手 持接种环在火焰中灼烧 ,冷却后从试管中去菌 液一滴,在洁净载玻片 上做一涂膜;n从固体斜面或平板上取 菌时,用无菌接种环取 少量菌体,涂抹均匀于 玻片上预先滴有的一滴
2、自来水中; 实验步骤n2.干燥n在空气中自然干燥或在 火焰快速通过干燥(与 热固定同步进行).n3.热固定n用镊子夹住涂片一端, 在火焰上连续通过几次 ;以载玻片在手背上试 感觉不烫为宜.实验步骤n4.染色n在固定的标本上加结晶 紫染液1-2滴,染色1min, 轻轻滴加水洗; 吸干, 加 半滴水, 盖上盖玻片, 滴 上半滴镜油油镜检。 (到此实际上即为细菌 普通染色)n揭去盖玻片,吸干水, 滴 加1-2滴革氏碘液媒染 1min, 轻轻水洗,吸干。实验步骤n滴加95%乙醇溶液(或 30%丙酮乙醇脱色),轻 轻摇动玻片至液滴无色 ,不要过分脱色(约30秒), 立即轻轻滴加水洗;吸 干。n滴加蕃红染
3、液复染 3min,轻轻滴加水洗;n吸干载玻片背面及标本 周围水渍,滴上半滴水 ，盖上盖玻片,油镜镜 检;实验步骤n5.镜检n注意标本中细菌的 形态, 大小,排列,和颜色.n革兰氏阳性菌为紫 色;n革兰氏阴性菌为红 色;金黄色葡萄球菌(24hrs)染色结果金黄色葡萄球菌(48hrs)染色结果金黄色葡萄球菌(72hrs)染色结果大肠杆菌(24hrs)染色结果讨论n记录并描绘革兰氏染色结果, 注意形状, 排列和颜色, 看看与理论上是否相同;如 不同,分析原因;n分析影响革兰氏染色结果的因素;n酵母菌能进行染色吗?结果如何?为什么?注意事项n干净的载玻片, 合适取菌量, 菌龄, 热固定 ,每一步水洗要彻底而且吸干,和酒精脱色 程度是实验成功的关键n禁止把染液倒入水池中,回收到废液桶中实验三结束，准备实验四n肉汤蛋白胨培养基的配制（按实验指导61页配方琼脂 为2）。400ml/组置500ml三角烧瓶中用封口膜封好 瓶口，用记号笔在瓶上标明培养基名称、组号（如周 次座次，132）、配制时间，高压灭菌。n包平皿10个/包/组、试管4支/包/组、1ml枪头2个/包/组 、5 ml枪头1个/包/组、涂布器1个/包/组，高压灭菌。n洗平皿10个/组。n说明：以上内容全班交叉进行。Thank you!
