细胞融合和单克隆抗体

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1、杂交杂交细胞细胞灭活的病毒等手段灭活的病毒等手段小鼠骨髓瘤细胞小鼠骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞经免疫经免疫的小鼠的小鼠提取杂交瘤杂交瘤细胞细胞第一次筛选第一次筛选用特定的选 择性培养基第二次筛选第二次筛选能产生特定抗体、培养条件能产生特定抗体、培养条件 下能无限增殖的杂交瘤细胞下能无限增殖的杂交瘤细胞体外培养体外培养注射到小鼠腹腔注射到小鼠腹腔提取单克隆抗体提取单克隆抗体单单 克克 隆隆 抗抗 体体 的的 制制 备备 过过 程程整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞（多种）第二次需先在多孔培养板上，在每孔只有一个杂交瘤 细胞的情况下开始培养，然后再筛选出能产生特异性 抗体

2、的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的，所 以产生的抗体必然是化学性质单一的，特异性强的单 克隆抗体。这里的单克隆确有单个细胞克隆的含义， 只不过克隆的不是B淋巴细胞，而是杂交瘤细胞。 多多 孔孔 筛筛 选选 板板例题例题1 1：19751975年，英国剑桥大学分子生物学年，英国剑桥大学分子生物学 实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠实验室的科勒和米尔斯坦，把小鼠 的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨的淋巴细胞（脾细胞）和小鼠的骨髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细髓瘤细胞融合起来，成为杂交瘤细 胞，实现在体外大量生产抗体的目胞，实现在体外大量生产抗体的目 的。实验过程如图所示。的。实验过程如图所示。

3、(1)(1)淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能淋巴细胞能与骨髓瘤细胞融合成一个细胞，两种细胞膜也能“ “融合融合” ” 在一起，说明细胞膜在一起，说明细胞膜 。 (2)(2)单克隆抗体的准确定义应为单克隆抗体的准确定义应为 ( )( )A A一类特殊抗体一类特殊抗体 B B无性繁殖系无性繁殖系 C C单一抗体细胞的无性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的无性繁殖系产生的抗体D D单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体单一抗体细胞的有性繁殖系产生的抗体 (3)(3)杂交瘤细胞繁殖进行的是杂交瘤细胞繁殖进行的是_分裂，其遗传性状分裂，其遗传性状_。 (4)(4)单克隆抗体注入体内后可以自动

4、追踪抗原单克隆抗体注入体内后可以自动追踪抗原( (病原体或癌变细胞等病原体或癌变细胞等) )并并 与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为与之结合，而绝不攻击任何正常细胞，故称为“ “生物导弹生物导弹” ”这是利用了这是利用了 _ _ 。具有一定的流动性具有一定的流动性C C有丝有丝不变不变抗体能与抗原发生特异性结合的特点抗体能与抗原发生特异性结合的特点知识拓展：知识拓展：如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？如何进行杂交瘤细胞的抗体检测及克隆化培养？融合后的细胞经融合后的细胞经选择性培养基选择性培养基培养后，培养后，能存活能存活的的 细胞就是细胞就是杂交瘤细胞杂交瘤细胞。但这些杂交瘤细胞

5、并非都是能但这些杂交瘤细胞并非都是能 分泌所需抗体的细胞，通常用分泌所需抗体的细胞，通常用“ “有限稀释法有限稀释法” ”来选择。来选择。 将杂交瘤细胞稀释将杂交瘤细胞稀释，用，用多孔细胞培养板培养多孔细胞培养板培养，使每孔，使每孔 细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后细胞不超过一个，通过培养让其增殖。然后检测各孔检测各孔 上清液中细胞分泌的抗体上清液中细胞分泌的抗体（常用酶联免疫吸附试验法（常用酶联免疫吸附试验法 ），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔），那些上清液可与特定抗原结合的培养孔为阳性孔 。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细胞，挑选。阳性孔中的细胞还不能保证是来自单个细

6、胞，挑选 阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行阳性孔的细胞继续进行有限稀释，一般需进行3 34 4次次 ，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过，直至确信每个孔中增殖的细胞为单克隆细胞。该过 程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。程即为杂交瘤细胞的克隆化培养。已知细胞合成已知细胞合成DNADNA有有D D和和S S两条途径，其中两条途径，其中D D途径能被氨基嘌呤阻断途径能被氨基嘌呤阻断。人淋巴细胞中有这两种。人淋巴细胞中有这两种DNADNA的合成途径，但一般不分裂增殖。的合成途径，但一般不分裂增殖。鼠骨髓瘤细胞中尽管没有鼠骨髓瘤细胞中尽管没有S S途径，但能不断分裂增殖，将这两种途径，但能

7、不断分裂增殖，将这两种细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂交细胞。请回答：细胞在试管中混合，加聚乙二醇促融，获得杂交细胞。请回答：（1 1）试管中除融合的杂交细胞外，还有）试管中除融合的杂交细胞外，还有 种融合细胞。种融合细胞。（2 2）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出）设计一方法（不考虑机械方法），从培养液中分离出杂种细胞，并说原理。杂种细胞，并说原理。方法：方法： 。原理：原理：培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞培养液中加入氨基嘌呤，收集增殖的细胞加入氨基嘌呤后加入氨基嘌呤后, ,使使D D合成的途径阻断合成的途径阻断, ,所以仅所以仅D D 合成途径的骨髓瘤细胞或彼此

8、融合的细胞就不合成途径的骨髓瘤细胞或彼此融合的细胞就不 能增殖能增殖, ,但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的但杂种细胞则可以利用淋巴细胞中的S S 途径合成途径合成DNADNA而增殖而增殖单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用vv、可用于作为诊断试剂：、可用于作为诊断试剂：vv 有准确，高效，简易、快速的优点有准确，高效，简易、快速的优点vv、可用于疾病治疗、可用于疾病治疗vv、可用于运载药物、可用于运载药物（作为运载对应疾病的药物的（作为运载对应疾病的药物的 “ “生物导弹生物导弹” ”）“ “生物导弹生物导弹” ”单克隆抗体药物单克隆抗体药物根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案。风杆菌抗体的实验方案。