《细胞培养技术》由会员分享，可在线阅读，更多相关《细胞培养技术（89页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、 新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞培养技术第4章 细胞培养技术 Technology of Cell Culture细胞生物学与遗传学教研室杨保胜 教授03733029960(O)2010-09-03新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-第四章 细胞培养技术新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞生物学基础研究：细胞结构功能,如信号转导凋亡。 细胞培养
2、药物测试：药物单因素及多因素的影响作用。 淋巴细胞培养技术的应用：检测T、B细胞数量及功能。 细胞用作毒性实验及安全性实验：环境毒物等。 细胞工程学研究手段已基本建立：克隆技术等。 遗传疾病的产前检查：羊水细胞、绒毛细胞培养。 体外培养细胞的转化：肿瘤细胞与癌基因研究。 在杂交瘤技术中的应用：单克隆抗体技术与应用等。 细胞培养在病毒学中的应用：SARS结构与功能等。 细胞培养在现代生物技术中应用 ：如基因分离，基因测 序与表达、基因转移与重组，癌基因研究等。细胞培养技术的应用新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞
3、培养概述细胞培养概述 细胞培养(cell culture):使离体细胞在实验室人 工模拟机体内的条件下，生长发育、分裂增殖的一 项重要的细胞生物学研究技术。动物和植物细胞培养(这里仅讨论动物的细胞 培养)，简称细胞培养。组织培养 细胞培养 器官培养细胞培养是把取得的组织用机械或消化的方法 ，分散成单个细胞悬液，然后进行培养、增殖。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞培养的优点1.活细胞：能长时间、直接观察、研究活细胞的形态、结构、生命活动2.可控制：重复性。可控制-调节条件：各种因素 ：物理、化学、生物等因素3
4、.研究的样本具有均一性：可选择对象：哪一种 类型：上皮？间质？性质：正常？肿瘤？阶段：4.便于观测、检测和记录： 研究观察：倒置生物 显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、流式细胞术、激 光共焦显微镜、免疫组织化学、原位杂交、同位素标 记；记录：摄影照片、缩时电影、电视-新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞培养的优点5.应用广 学科多：对象广：各种动物：低等动物-高等 动物-人类一种动物：不同年龄-不同组织-正常或异常（肿瘤-）6.较经济可提供大量、同时、重复性好的生物学性状相似的实验对象。新乡医学院基础医学院 杨保
5、胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-细胞培养的缺点现在人工模拟体内环境的技术已经很高，但人工 所模拟的条件与体内实际情况，仍不完全相同。 当细 胞被置于体外培养后，生活在缺乏动态平衡的环境中 ，久了，必然发生变化。与体内主要不同：相对孤立、相对单一； 缺乏体内的系统作用、失去神经体液的调节和细胞相 互间的影响。 主要表现：失去原有组织结构和细胞形态；分 化减弱或不显； 细胞趋向单一化。要正确认识体外培养细胞；是一种特定条件下生长 的细胞群体。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学
6、院 杨保胜 E-一、细胞培养基本原理与技术(一)细胞在体外生长的条件体外培养的细胞需要合适的环境和必需的条件才 能生存和繁殖。1.细胞的营养需要 血浆或血纤维蛋白原凝块中 （早期），或在组织提取液等中生长。现知需要一些 基本营养物质及生长因子等物质。基本营养物质 包括：氨基酸(12种必需AA) 、维生素、碳水化合物及一些无机离子。促生长因子等物质 除基本营养物质外，培养 细胞还需要促细胞生长因子等物质(如EGF,IGF,IL等) 才能正常生长、增殖。血清中含多种，但也有些组成 不明，对细胞有害的成分。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基
7、础医学院 杨保胜 E-2.细胞的生存环境 细胞生存并繁殖的生理学能接 受限度内的物理化学特性，包括温度、气相及pH等。温度：人及哺乳动物体外培养细胞的理想温度 是35 37 。高温比低温对细胞的影响更为明显。 当温度为25 35 ，细胞生长很慢； 4 下能存活 数天(不低于0 )，196 (保护剂)。 4142 下 1h损伤严重， 43 以上则多数细胞将死亡。气相及pH：5CO2+95%空气， 大多数细胞适 于在pH7.2 7.4下生长。渗透压：260 320mmol/L的渗透压适于大多数 细胞。培养细胞生长的条件 新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E
8、-mail: 基础医学院 杨保胜 E-3. 无污染及无毒无毒是培养细胞的必需条件。包括与细胞直接 接触者和间接接触者（器皿和材料）。污染包括细菌等微生物（细菌、霉菌、支原体 ）的污染。即使使用抗菌素仍是细胞培养中要非常 注意的问题。污染的另一问题是不同细胞类型的交叉污染。 对不同细胞系操作时，应避免使用同一瓶培养液。培养细胞生长的条件 新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-合适的环境和必需的条件1营养需要2环 境 要 求3无毒及无污染培养细胞生长的条件新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院
9、 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品无菌室孵育室洗涤消毒 灭菌室观察室准备室贮藏室细胞培养 实 验 室操作间缓冲间更衣间细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌 操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品1.常用设备和用品超净工作台：组织 细胞培养技术与其他一般实 验室工作的主要区别在于要 求保持无菌操作，避免微生 物及其他有害因素的影响。 目前，超净工作台的广泛使 用，很大程度上方便了组织 细胞培养工作，并
10、使一些常 规实验室有可能用于进行细 胞培养。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品1.常用设备和用品CO2培养箱:提供进行细 胞培养时所需要的一定量的CO2( 浓度为5),易于使培养液的pH保 持稳定，适用于开放或半开放培 养。由于这种培养方法培养器皿 内部与外界相通,培养箱内空气必 须保持清洁,应定期以紫外线照射 或酒精消毒。同时培养箱应放置 盛有无菌蒸馏水的水槽,防止培养 液蒸发,使箱内相对湿度始终保持 为100。新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保
11、胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品1.常用设备和用品倒置显微镜冰箱离心机电热干燥箱水纯化装置新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品1.常用设备和用品高压蒸汽消毒装置过滤除 菌装置细胞冷冻装置其他 移动式 臭氧空 气消毒 机 新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-仪 器细胞冷冻储存器：常 用液氮容器。新型的细胞 冷冻储存器可通过先进的 电子控制器实现冻存自动 化并监测液氮水平和
12、样品 温度；可配备先进的报警 系统，分别警报液氮液面 、温度、电池、电压、电 源等失常情况：同时具备 热气体旁路系统，防止高 于-130的暖空气进入液 氮罐，从而更有效地保护 样品，防止升温。 新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-(二)培养细胞常用设备和用品2.培养器皿培养瓶培养皿多孔培养板离心管移液管和吸管其他玻璃器皿新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-冻存管1.2ml 2ml， 5ml新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与分子 生物学技术基础医学院 杨保胜 E-mail: 基础医学院 杨保胜 E-离心管5ml， 10ml ，15ml 50ml细胞刮新乡医学院基础医学院 杨保胜 上页细胞与
