2013透射电镜原理

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1、考研经济学n经济学(Economics)是一门研究人类行为及如何将有限或者稀缺资源进行合理配置的社会科学。 n微观经济学(Microeconomics)又称个体经济学,是相对于宏观经济学而言。微观经济学主要以单个经济单位(单个的生产者、单个的消费者、单个市场的经济活动)作为研究对象,分析单个生产者如何将有限的资源分配在各种商品的生产上,以取得最大的利润;单个消费者如何将有限的收入分配在各种商品的消费上,以获得最大的满足。同时,微观经济学还分析单个生产者的产量、成本、使用的生产要素数量和利润如何确定;生产要素供应者的收入如何决定;单个商品的效用、供给量、需求量和价格如何确定等等。考研的代价1、时

2、间(3个月) 生活费800元32400元2、精力紧张、刻苦!3、少挣的钱 (3个月)工资2500元37500元 4、资料、辅导班费用、报名费等 2000元共计:11900元读研的代价1、学费、书费、住宿费24000+1000+1300元2、生活费 800元12月3年28800元3、少挣的钱 2500元12月3年90000元4、付出的精力!共计:133000(157000)元读研的收获1、找工作的敲门砖学位、论文 2、社会关系和老师的关系、和同学的关系3、研究能力日后做好工作的基础(奖学金)4、做好人、做好事的人生观、价值观神经生物学研究中心实验室 校形态学科研实验中心n 实验室介绍:n 实验室

3、学习介绍:实验室组成:n实验室人员:n实验拥有两个实验区,约3500平方米面积n实验室及设备: 形态学实验室: 免疫组化实验室切片室显微成像摄影室电镜及电镜制样室分子生物学实验室: 核酸实验室 蛋白实验室细胞培养室 行为学实验室小动物手术室、观察室洗涤消毒室研究生学习室n 为何要学习实验技术n 如何学好实验技术进实验室工作的注意事项:l 做好人做有公德的人、做聪明的人;l 做好事做好人好事、做好实验、做好学问;l 注意安全注意物理安全、化学安全 ! 医学电子显微镜技术本课程所用教材:超星图书馆l实用电子显微镜技术 作者:邵淑娟,杨佩,许广沅等出版时间:2007.12l实用电子显微镜技术 作者:

4、付洪兰编著 出版时间:2004.7l生物医学电子显微镜技术 作者:程时 彭学敏 出版时间:1997年07月第1版本课程考核试题: 试用你所了解的电子显微镜技术为研究手段,撰写一份研究项目设计书,请详述取材方法及注意事项。本课程要求: 实验课不允许缺席。The Resolution ScaleAntony van Leeuwenhoek (1632-1723) 发 现微生物的第一个人。他利用自制的显微镜发现 了微生物世界。 Robert Hooke (1635-1703) 提出了光的波动 说 ,特别是致力于光学仪器的创制 。用自己制造 的显微镜观察植物组织,于1665年发现了植物细 胞(实际上看

5、到的是细胞壁),并命名为“cell”, 至今仍被使用。 Ernst Abe (1840-1905) 阐明几何光学的“正弦 条件”,确定了可见光波段上显微镜分辨极限,为 迄今光学设计的基本依据之一Ernst Ruska (1906-1988) 1931年发明了第 一台电子显微镜。因此获1986年获诺奖。 电子显微镜有何用途:n 用于临床病理诊断n 用于科学研究l 上世纪60年代、70年代是国际上诊断电镜发展的黄金时代,越来越多的疾病通过电镜检查而得到确诊,越来越多的病理学家认识到了电镜诊断的价值,电镜逐渐成为病理诊断的一个基本工具,欧美国家中几乎所有大的医疗中心及医院都将电子显微镜用于疾病的研究

6、和诊断。l 电子显微镜在肾活检诊断、疑难肿瘤的病理诊断、感染性疾病(病毒性,细菌性等)、代谢性疾病(贮积性疾病)、细胞外物质沉积性疾病(如淀粉样变性)、组织细胞增生症(郎格罕细胞增生性疾病)、纤毛运动不能综合征等特殊疾病的诊断中公认起着重要的作用。CADSIL(cerebral artosomal dominant arteriopath with subcortical infarcts and leukoencephalopathy) 即是伴有皮质下梗死和白质脑病的常染色体显性遗传性脑动脉病,是一种遗传性小动脉疾病,位于 19号染色体上的Notch3基因突变所致的遗传性脑小血管疾病,表现为

7、皮质下缺血事件,并导致进行性痴呆伴假性球麻痹。 临床表现 :1. 多在3545岁发病,多无高血压史,常有家族史。 2. 患者反复出现皮质下梗死及腔隙性梗死的症状体征,可 伴有头 痛,痴呆,假性球麻痹,抑郁和尿便失禁。 3. CT或MRI显示皮质下或脑桥的梗死灶。 4. 脑或者皮肤活检可见特征性血管壁变厚,血管平滑肌中层细胞嗜锇颗粒沉积(GOM),检测基因突变可以确诊。镜下见血管内皮细胞及周细胞和平滑肌细胞中部分线粒体肿胀,小动脉血管增厚。 36537照片中见可疑GOM小体。结论:符合CADASIL皮肤改变。l 病毒性疾病的诊断离不开电镜,电子显微术是确定各种病毒形态结构最有用的工具,可观察病毒

8、,或感染细胞内病毒的大小、形态、排列及其复制组装、成熟的过程以及某些有包膜病毒的芽生成熟的部位和病毒包涵体的形态特征。n 电镜对下列肿瘤的鉴别诊断可起到重要作用: 区别癌、黑色素瘤和肉瘤; 区别腺癌和间皮瘤; 在前纵膈肿瘤中可区别胸腺瘤、胸腺类癌、恶性淋巴瘤和生殖细胞瘤; 在小圆细胞瘤中可区别神经母细胞瘤、胚胎性横纹 肌瘤、Ewing氏肉瘤、恶性淋巴瘤和小细胞癌; 在软组织梭形细胞瘤中可区别纤维肉瘤、恶性纤维组织细胞瘤、平滑肌肉瘤和恶性神经鞘瘤; 区别梭形细胞癌和癌肉瘤。n 电镜诊断用得最多的是肾脏活检和肌肉活检。对肾脏病的诊断,通常将光镜、免疫荧光光镜和电镜观察三者结合。电镜观察对于肌病的诊

9、断有很重要的作用。n 依靠电镜诊断的肾小球疾病有:薄基底膜肾病、纤维丝样肾小球肾炎、免疫管状肾小球病、致密物沉 积病、肾淀粉样变及纤维性肾小球病、Fabry病(电镜下显示上述细胞包含无数圆或卵圆形层状小体(这些小体被称为“斑马小体”或“髓鞘脂影”) )、Alport综合征(特征性的病理改变,GBM广泛增厚、或变薄以及致密层分裂为其典型病变)等n需电镜观察 协助光镜和免疫荧光诊断的一些疾病有:胶原肾小球病、轻链重链沉积病、脂蛋白肾病、急性感染后肾小球肾炎、膜增生性肾小球肾炎等。n此外,电镜观察对一 些疾病病理改变的分期有决定性价值:膜性肾病、狼疮性肾炎等(尤其在多靶点治疗某些类型的狼疮性肾炎时,

10、需电镜观察分辨其组织类型)。 在某些肾病的诊断中电镜起着决定作用:l遗传性肾炎。此病肾小球的组织学改变无特殊,唯电镜检查方能作出准确诊断,例如肾小球薄基底膜病。光镜检查无助于对此病的诊断,电镜检查是唯一能够明确此病的手段;lFarbry氏病。此病的嗜锇颗粒和板层小体只有在电镜下才能观察到;l肾淀粉样变及纤维性肾小球病。此类疾病在电镜下见到类淀粉纤维由无分枝的周期性细纤维组成(直径810nm,肾淀粉样变)或微管状纤维结构(直径约20nm,纤维性肾小球病),因而可作出肯定的诊断。FEI -Tecnai G2 Spirit TWINTecnai G2 Spirit TWINH-600透射电镜的工作原

11、理光学显微镜电子显微镜发光源灯泡电子枪光源可见光、紫外光电子束透镜玻璃透镜电磁透镜真空系统空气真空成象色彩彩色单色样品要求无需脱水需脱水光镜显微镜与电子显微镜的比较有效放大倍数n光学透镜的分辨本领主要取决于照明源的波长。半波长是光学显微镜 分辨率的理论极限。可见光的最短波长是390nm,光学显微镜的最高 分辨率是200nm。n人眼的分辨本领是大约0.2mm,把200nm的光学显微镜的最高分辨率放 大到0.2mm让人眼能分辨的放大倍数是1000倍。这个放大倍数称之为 有效放大倍数。光学显微镜的分辨率在200nm时,其最大的有效放大 倍数是1000倍。n光学显微镜的放大倍数可以做的更高,但是,高出

12、的部分对提高分辨率没有贡献,仅仅是让人眼观察更舒服而已。所以光学显微镜的放大 倍数一般最高在1000-1500之间。如何提高显微镜的分辨率n顺着电磁波谱朝短波长方向寻找,紫外光的波长在13-390nm之间,比 可见光短多了。但是大多数物质都强烈地吸收紫外光,因此紫外光难 以作为照明光源。nX射线具有更短的波长。但是,迄今为止还没有找到能使X射线改变方 向、发生折射和聚焦成象的物质,也就是说还没有X射线的透镜存在 。因此X射线也不能作为显微镜的照明光源。n除了电磁波谱外,在物质波中,电子波不仅具有短波长,而且存在使 之发生折射聚焦的物质。所以电子波可以作为照明光源。1926年,德 国物理学家Bu

13、sch奠定了利用磁场作为电子透镜的理论础。1932年, Knoll及Ruska,第一次成功地得到了电子放大的像。同年, Ruska用 静电透镜研制成功了电子显微镜,简称电镜。 电子束的主要特征定义:电子具有波动性和粒子性,电子束是真空中相对集中的、高速运动的电子流。性质: l 电场或磁场中高速运动的电子会受力发生弯曲,而改变运动方 向,受力方向服从右手定则,当电磁场满足轴对称条件,电子做螺旋状运动,最后被聚焦。l 电子穿透力极弱,100kV以下的电子束,标本厚度不超过100nm。l 电子束为不可见光,通过激发荧光来显像。l 高能电子束具有放射性,可激发出x射线。样 品入射电子 Auger电子

14、阴极发光 背散射电子二次电子X射线透射电子 电磁透镜 n 电子波和光波不同,不能通过玻璃透镜会聚成像。但是轴对称的非均匀电场和磁场则可以让电子束折射,从而产 生电子束的会聚与发散,达到成像的目的。用静电场构成 的透镜称之“静电透镜”;把电磁线圈产生的磁场所构成的 透镜称之“电磁透镜”。 电磁透镜n电子在磁场中运动,当电子运 动方向与磁感应强度方向不平 行时,将产生一个与运动方向 垂直的力(洛仑兹力)使电子 运动方向发生偏转。n图5-3是一个电磁线圈。当电子 沿线圈轴线运动时,电子运动 方向与磁感应强度方向一致, 电子不受力,以直线运动通过 线圈;当电子运动偏离轴线时 ,电子受磁场力的作用,运动

15、 方向发生偏转,最后会聚在轴 线上的一点。电子运动的轨迹 是一个圆锥螺旋曲线。电磁透镜n短线圈磁场中的电子运动显示了电磁透镜聚焦成像的基本原理。实际电磁透镜中为了增强磁感应强度,通常将线圈置于一个由软磁材料(纯铁或低碳钢)制成的具有内环形间隙的壳子里(如图)。 电磁透镜n此时线圈的磁力线都集中 在壳内,磁感应强度得以 加强。狭缝的间隙越小, 磁场强度越强,对电子的 折射能力越大。为了使线 圈内的磁场强度进一步增 强,可以在电磁线圈内加 上一对磁性材料的锥形环 (如图所示),这一装置 称为极靴。增加极靴后的 磁线圈内的磁场强度可以 有效地集中在狭缝周围几 毫米的范围内。电磁透镜的组成l 极靴 中空的锥形体,最重要的部件之一;l 线圈 绕在极靴外,通电后可产生磁场;l 屏蔽外壳 防止外部磁场干扰,增加导磁率,产生强磁场,使焦距更小,放大更大;电磁线圈与极靴n 电磁透镜成像n光学透镜成像时,物距L1、像距L2和焦距f三者之间满足如下关系:(5-8)n电磁透镜成像时也可以应用式(5-8)。所不同的是,光学透镜的焦 距是固定不变的,而电磁透镜的焦距是可变的。电磁透镜焦距f常用 的近似公式为:(5-9)n式中是K常数,Ur是经相对论校正的电子加速电压,(IN)是电磁透 镜的激磁安匝数。n由式(5-9)可以发现,改变激磁电流可以方便地改变电磁透镜的焦 距。而

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