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1、 第三章 消毒灭菌与病原微生物实验室生物安全李文姝基本概念消毒（disinfection）：杀死物体上或环境中的病原微生物、并不一定杀死细菌芽胞或非病原微生物的 方 法。灭菌（sterilization）：杀死 物体上所有微生物的方法(包括芽 孢)。清洁（cleaning）：除去尘埃和污秽以减少微生物数量的方法。无菌（asepsis）：不存在活菌的意思。 无菌操作：防止细菌进入人体或其他物品的操作技术。 防腐（antisepsis）：体外防止或抑制细菌生长繁殖的方法。消毒灭菌例：外科手术 无菌操作内服抗生素 抑菌接种环火焰烧灼 无菌火化 灭菌局部皮肤75%酒精擦拭 消毒一、消毒灭菌的方法常用的
2、消毒和灭菌方法可分为物理和化学两种方法(一) 物理灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法滤过除菌法干燥与低温抑菌法热力灭菌原理： 破坏菌体蛋白质与核酸，使其肽 链断裂，蛋白质 变性凝固，核酸解链崩解, 导致细菌死亡。种类： 常用热力灭菌法种类方法效果用途干热焚烧用焚烧炉燃烧灭菌废弃污物、尸体烧灼火焰烧灼灭菌接种环，试管口干烤红外线干烤箱，热空气160-170C 2h电磁波热效应灭菌灭菌玻璃器皿等耐高温的物品医疗器械湿热煮沸法100C，5-10分钟，沸水消毒饮水和食具高压蒸气灭菌法高压蒸气灭菌器103.4Kpa121.3C15-20分钟灭菌耐高温耐湿物品巴氏消 毒法种类效果用途湿热巴斯德创用，61.1- 6
3、2.830分钟， 71.7 30秒钟（常 用） 消毒（杀死病 原菌，不破坏 营养成分）牛奶，酒类方法流通蒸气 法100 蒸气1530 分钟消毒（杀死细菌 繁殖体，不杀死 芽胞）不耐高温、高压物品间歇灭菌 法反复多次流动蒸气灭菌不耐高温、高压物品湿热效力大于干热原因 （1）湿热中细菌菌体蛋白较易凝固变性（2）湿热的穿透力比干热大（3）湿热的蒸汽有潜热效应高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器辐射杀菌法紫外线（ ultraviolet ray,UV): 260nm-266nm（最佳杀菌波长）杀菌原理：使DNA上相邻的T碱基通过共价键结合成二聚 体，干扰DNA复制与转录，导致细菌死亡特点： 穿透力弱适用范围：
4、适于空气和物体表面消毒电离辐射 如 ： -ray，-ray机理: 干扰DNA 合成、破坏细胞膜、酶系统紊乱等 适用物品：不耐热的物品（食品、药品及医疗用品）微波（microwave) 机理：热效应适用物品：非金属物品、食品滤过除菌法（filtration）机理：用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去, 以达到除菌目的 器具：滤菌器（filter）适用物品：不耐高温物品（血清、毒素、抗生素）以及 空气等的除菌 干燥与低温抑菌法在低温状态下真空抽去水分冷冻真空干燥法：用途：保存菌种（二）化学消毒灭菌法消毒剂杀菌机理：1.使菌体蛋白变性和凝固 酚、醇、酸硷、醛类，重金属盐类（高浓度）2 .干扰细菌
5、的酶系统（酶失活） 氧化剂、重金属盐类（低浓度） 3. 损伤细菌细胞膜 酚类（低浓度）、表面活性剂按杀菌能力又可将消毒剂可分消毒剂类型种类杀菌机理范围 高效消毒剂含氯消毒剂次氯酸钠等酶失活和氧化饮用水、地面等 过氧化物类过氧化氢等酶活性丧失物品表面和皮肤 醛类甲醛、戊二醛蛋白、核酸变性器械 环氧乙烷环氧乙烷蛋白、核酸变性医疗器械 中效消毒剂含碘消毒剂碘酊、碘伏氧化、沉淀蛋白皮肤、体温计等醇类乙醇或异丙醇蛋白变性皮肤、体温计等 低效消毒剂季铵盐类新洁尔灭表面活性剂地面、皮肤等 氯己定氯己定表面活性剂皮肤黏膜等高锰酸钾高锰酸钾氧化餐具、水果等类别 作用机制 常用种类 酚类 蛋白变性，细胞膜损伤 石
6、炭酸 醇类 蛋白变性 乙醇（70%-75%） 氧化剂 氧化、蛋白沉淀 高锰酸钾、过氧乙酸碘酒 重金属盐 氧化、蛋白酶变性 红汞、硫柳汞 表面活性剂改变细胞膜通透性 新洁尔灭 染料 干扰氧化、抑制繁殖 龙胆紫 烷化剂 菌体蛋白质及核酸烷基化 甲醛、烷氧乙烷常用消毒剂的种类（按化学成分）常用消毒剂的应用种类使用浓度用途 石炭酸3%5%地面、器具表面、皮肤消毒乙醇70%75%皮肤、体温计消毒 高锰酸钾0.1%皮肤、尿道、蔬菜、水果消毒红汞2%皮肤、粘膜、小创伤消毒硫柳汞0.1%皮肤消毒、手术部位消毒 过氧乙酸0.2%0.3% 塑料、玻璃器材消毒碘酒2.0%2.5% 皮肤消毒 新洁尔灭0.41.6%手
7、术洗手、浸泡手术器械龙胆紫2%4%浅表创伤消毒生物灭菌法抗生素 Antibiotic细菌素 Bacteriocin 噬菌体 Bacteriophage 二、消毒灭菌的应用医疗器械物品的消毒灭菌 室内空气的消毒灭菌 手和皮肤的消毒 黏膜的消毒 病人排泄物和分泌物的消毒灭菌 病人污染物品的消毒 饮水的消毒 环境的消毒根据消毒或灭菌对象，选择合适的消毒灭菌方法消毒剂微生物环境性质浓度作用时间种类数量有机物 温度酸硷度三、影响消毒灭菌效果的因素第四节第四节 病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全生物安全（生物安全（biosafetybiosafety）是生物技术安全）是生物技术安全（ saf
8、ety of biotechnologysafety of biotechnology）的简称。的简称。狭义狭义 指指现代生物技术现代生物技术的研究、开发、应的研究、开发、应 用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和用及转基因生物可能对生物多样性、生态环境和 人类健康产生潜在的危害。人类健康产生潜在的危害。广义广义 指指与生物有关的各种因素与生物有关的各种因素对社会、对社会、 经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在经济、人类健康及生态环境所产生的危害或潜在 风险。风险。病原微生物所致的安全问题，如病原微生物病原微生物所致的安全问题，如病原微生物 实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大
9、实验室的安全隐患、生物武器、生物恐怖、重大 传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最传染病的暴发流行等，也是人类社会所面临的最 现实的生物安全问题。现实的生物安全问题。病原微生物实验室生物安全的核心是病原微生物实验室生物安全的核心是防扩散防扩散和和防防 感染感染。关于关于病原微生物实验室生物安全病原微生物实验室生物安全，我国法令包我国法令包 括对括对病原微生物病原微生物的的分类管理，分类管理，对对实验室实验室的的分级管分级管 理理，实验室感染的控制以及监督和法律责任等。实验室感染的控制以及监督和法律责任等。 一、病原微生物的分类一、病原微生物的分类根据传染性、感染后对个体或者群体的危害根据传
10、染性、感染后对个体或者群体的危害 程度，病原微生物分为四类：程度，病原微生物分为四类：第一类第一类 是指能够引起人类或者动物是指能够引起人类或者动物非常严重疾非常严重疾 病病的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消的微生物，以及我国尚未发现或者已经宣布消 灭的微生物。灭的微生物。第二类第二类 是指能够引起人类或者动物是指能够引起人类或者动物严重疾病严重疾病， 比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动比较容易直接或者间接在人与人、动物与人、动 物与动物间传播的微生物。物与动物间传播的微生物。 第三类第三类 是指能够引起人或动物疾病，但一般情是指能够引起人或动物疾病，但一般情 况下对人、动物或环
11、境况下对人、动物或环境不构成严重危害不构成严重危害，传播风，传播风 险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且险有限，实验室感染后很少引起严重疾病，并且 具备有效治疗和预防措施的微生物。具备有效治疗和预防措施的微生物。第四类第四类 是指在通常情况下不会引起人或动物是指在通常情况下不会引起人或动物 疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。疾病的微生物。如小鼠白血病病毒等。第一类、第二类统称为第一类、第二类统称为高致病性高致病性病原微生物。病原微生物。二、病原微生物实验室的分级二、病原微生物实验室的分级级别处理对象一级对人体、动植物或环境危害较低，不具有对健康成 人、动植物致病的致病因子。二级对人体、动
12、植物或环境具有中等危害或具有潜在危 险的致病因子，对健康成人、动植物和环境不会造 成严重危害，具有有效的预防和治疗措施。三级对人体、动植物或环境具有高度危险性，主要通过 气溶胶使人类传染上严重的甚至是致命的疾病，或 对动植物和环境具有高度危害的致病因子。通常有 预防治疗措施。四级 对人体、动植物或环境具有高度危险性，通过气溶 胶途径传播或传播途径不明或未知的危险的致病因 子。没有预防治疗措施。一、二级实验室一、二级实验室不得不得从事高致病性病原微从事高致病性病原微 生物实验活动。生物实验活动。三级、四级实验室从事高致病三级、四级实验室从事高致病 性病原微生物实验活动。性病原微生物实验活动。从事
13、高致病性病原微生物相关实验活动应从事高致病性病原微生物相关实验活动应 当有名以上的工作人员共同进行。在同一个当有名以上的工作人员共同进行。在同一个 实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从实验室的同一个独立安全区域内，只能同时从 事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。事一种高致病性病原微生物的相关实验活动。 应有健全安全保卫制度应有健全安全保卫制度 。 实验室工作人员实验室工作人员应掌握实验室技术规范、操作应掌握实验室技术规范、操作 规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符规程、生物安全防护知识和实际操作技能。应有符 合要求的防护用品，应建立健康档案；进行预防接合要求的防护用品，应建立健
14、康档案；进行预防接 种。种。实验室应有科学、严格的实验室应有科学、严格的管理制度管理制度，定期对实，定期对实 验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应验室设施设备、材料等进行检查、维护和更新，应 对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环对废水、废气以及其他废物进行合理处置，防止环 境污染。境污染。 生物安全生物安全三、实验室感染的控制以及三、实验室感染的控制以及 监督和法律责任监督和法律责任 实验室实验室感染感染控制工作控制工作包括定期检查实验室的生物安包括定期检查实验室的生物安 全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安全防护、病原微生物菌（毒）种和样本保存与使用、安 全操作、
15、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等全操作、实验室排放的废水和废气以及其他废物处置等 实施情况。实施情况。 实验室发生实验室发生高致病性病原微生物高致病性病原微生物泄漏泄漏时，预防、控时，预防、控 制措施制措施包括包括：封闭封闭被病原微生物污染的实验室或可能被病原微生物污染的实验室或可能 造成病原微生物扩散的场所；造成病原微生物扩散的场所；开展流行病学开展流行病学调查调查； 对病人进行隔离对病人进行隔离治疗治疗，对相关人员进行医学，对相关人员进行医学检查检查；对对 密切接触者进行医学密切接触者进行医学观察观察；进行进行现场消毒现场消毒；对染疫对染疫 或者疑似染疫的或者疑似染疫的动物动物采取隔离、扑杀等措施。采取隔离、扑杀等措施
