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1、自身抗体的实验室检测 及临床意义北京友谊医院风湿科 宋淑菊 主要内容n自身抗体的概念n自身抗体的分类n自身抗体的命名n自身抗体的检测方法n常见的自身抗体自身抗体的概念n各种原因造成的机体B细胞产生的针对自身组 织成分的抗体,称为自身抗体(autoantibodies )。n自身抗体可以是生理性的,如针对衰老或死亡 的自体细胞,机体产生少量的自身抗体,以便 被脾、肝及单核吞噬细胞系统的巨噬细胞吞噬 ,维持机体内环境的生理稳定;n自身抗体也可以是病理性的,引起自身免疫病 。自身抗体的分类n按照自身抗原在体内分布的不同可分为:器官/组织特异性自身抗体非器官/组织特异性自身抗体n按照检测自身抗体所用的
2、基质不同可分为:细胞抗体(以游离的细胞为实验基质)o细胞非特异性自身抗体,如抗核抗体o细胞特异性自身抗体,如ANCA、抗血小板抗体、抗红 细胞抗体组织抗体(以动物组织切片为实验基质)自身抗体的命名n以首先被检测到该抗体的患者名字的缩 写命名:如抗Sm、抗Ro、抗La抗体n以相关疾病的名字的缩写命名:如抗Scl -70、抗SS-A、抗SS-B抗体n以抗原的化学性质进行分类命名:如抗 DNA、抗RNP抗体n以抗原的部位进行命名:如抗板层素抗 体、抗核膜抗体。自身抗体的检测方法n对流免疫电泳、免疫双扩散n免疫荧光检测法n免疫印记法n酶联免疫吸附检测法(ELISA)n放射性核素法n酶免疫斑点技术n免疫
3、沉淀法抗核抗体(ANA) 抗dsDNA抗体抗dsDNA抗体抗Sm抗体 抗RNP抗体 抗SSA抗体 抗SSB抗体间接免疫荧光方法金标法免疫双扩散法ANA (anti-nuclear antibodies)抗Sm抗体抗RNP抗体抗SSA抗体抗SS B抗体抗Scl-70抗体抗Jo-1 抗体抗核糖体抗体免疫印记法ENA (extractable nuclear antigen)抗核抗体 (ANA)抗平滑肌抗体 (SMA)抗线粒体抗体 (AMA)间接免疫荧光法自身抗体病人血 清(一抗 )玻片二抗荧光抗 体荧光显微 镜下阅片ANAHep-2细胞dsDAN抗体短膜虫SMA大鼠胃组织AMA大鼠肾组织间接免疫荧
4、光法底物病人 血清金标 记的 抗体dsDNA抗原阴性阳性金标法抗原1:41:161:321:64病人血 清标准抗 体免疫双扩散琼脂板不同分子 量的抗原病人 血清酶标 抗体显色 剂判断结果免疫印记法抗Sm抗体13.5, 28, 29KD抗RNP抗体22, 32,70KD抗SSA抗体52KD抗SS B抗体45, 47KD抗Scl-70抗体68-70KD抗Jo-1 抗体55KD抗核糖体抗体15, 16.5, 38KD间接免疫荧光法n细胞核阳性n核仁阳性n细胞浆阳性n分裂期细胞阳性细胞核阳性n细胞核均质型(Homogeneous):抗 dsDNA、组蛋白抗体、核小体抗体n细胞核周边型(Membrano
5、us):板层素 抗体n细胞核颗粒型(Speckled):n粗颗粒:抗Sm、RNP抗体n细颗粒:抗SSA、SSB抗体抗dsDNA抗体荧光模式: 绿蝇短膜虫 :动基体 均质的或 边缘亮度 增强的荧 光。 Hep-2细胞 :细胞核 的均质型 荧光。抗dsDNA抗体n自身抗原:位于DNA脱氧核糖磷酸框架 上。n临床意义:对系统性红斑狼疮(SLE) 特异性高。抗体滴度与疾病活动性存在 相关性,因此抗体滴度的检测可为监控 治疗提供有用的依据。抗RNP/Sm抗体荧光模式: Hep-2片:细胞 核粗颗粒, 核仁阴性。 肝组织切片: 同上。 荧光法不能区 分抗RNP和 抗体Sm。抗RNP/Sm抗体n自身抗原:抗
6、原RNP和Sm属于一组小核糖核 蛋白(snRNP),由低分子量的RNA和多种蛋 白质组成,RNA中尿苷(U-RNA)含量较高 。n临床意义:高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔 组织病(MCTD)的特征,发生率为95100% 。也可出现于SLE,但总是与抗Sm抗体同时 出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性,发 生率为2040%。抗SSASSB抗体荧光模式 Hep-2片:细 胞核呈细 颗粒荧光 ,核仁不 发光。 肝组织片: 细颗粒荧 光。抗SSASSB抗体n自身抗原:SSA抗原是一个小核糖核蛋白,由 一个RNA分子和两种不同的蛋白质组成。蛋 白质的分子量为52KD和60KD。抗体直接针对 蛋白质的
7、抗原决定簇。SSB抗原是分子量为 48kD的磷酸化蛋白。n临床意义;最常见于干燥综合征(SS),也见 于SLE、原发性胆汁性肝硬化(PBC),偶见 于慢活肝。抗SSA抗体在新生儿红斑狼疮的发 生率几乎为100%。核仁阳性(Nucleolar)n核仁荧光增强,核浆均质型-Scl-70抗 体。 n核仁均质型-PM-Scl及其他抗原抗体。n核仁细颗粒型-原纤维蛋白抗体。n核仁粗颗粒型-RNA多聚酶-1抗体。抗Scl-70抗体 荧光模式: Hep-2片:细胞 核几乎均质 的荧光,核 仁荧光加强 而且也为均 质型,胞浆 无荧光。 肝组织片;细 胞核颗粒或 均质型荧光 ,常见到细 胞核荧光。抗Scl-70
8、抗体n自身抗原:为DNA拓扑异构酶1,分子 量为100KD。在DNA双链的复制和转录 中起作用。n临床意义:2570%的系统性硬化症( PSS)弥漫型患者阳性,局限型硬皮病 患者阴性。细胞浆阳性n胞浆均质型-抗核糖体抗体细颗粒-抗Jo-1抗体 n胞浆颗粒型 粗颗粒-AMA抗体滴状点状-溶酶体抗体核周颗粒-高尔基体抗体n胞浆纤维型 细纤维-波形蛋白抗体环状纤维-原肌球蛋白抗体针状纤维-肌动蛋白抗体抗核糖体抗体荧光模式: Hep-2:胞浆细 颗粒到均质 状、非常致 密的荧光 。 肝组织片:岛 状荧光。 临床意义: SLE的特异 性抗体,与 精神症状有 关。抗Jo-1抗体 荧光模式: Hep-2:胞
9、浆颗 粒到细块状 荧光。 肝组织片:胞 浆中弱荧光 。 自身抗原:组 氨酰tRNA合 成酶。 临床意义:见 于PM,发 生率2535% 。抗线粒体抗体荧光模式: Hep-2:胞浆 内粗的颗 粒型荧光 。 大鼠肾组织 切片:肾 小管明显 荧光,肾 小球荧光 较弱。抗线粒体抗体n自身抗原:位于真核细胞线粒体膜的内 面。线粒体自身抗原为2-氧酸脱氢酶复 合体的亚单位,为一组自身抗原,其中 与PBC有关的包括:n(1)丙酮酸脱氢酶复合体(PDC)n(2)支链2-氧酸脱氢酶复合体( BCOADC)n(3)a-酮戊二酸脱氢酶复合体(OGDC)抗线粒体抗体n临床意义:AMA-M2对PBC具有诊断意义。nAM
10、A亚型与疾病的相关性:nAMA-1:梅毒、干燥综合征nAMA-2:PBCnAMA-3:药物性红斑狼疮nAMA-4:PBC与AIH重叠nAMA-5:SLE、自身免疫性溶血性贫血nAMA-6:异烟肼引起的药物性肝炎nAMA-7:AIHnAMA-8:AIH、闭塞性血栓性血管炎nAMA -9:药物性肝炎nAMA-10:SLE分裂期细胞阳性n染色体阳性-染色体相关抗体,相关疾 病?n纺锤体纤维阳性-纺锤体纤维抗体,如 燕麦细胞型支气管肺癌n中间体阳性-中间体抗体,相关疾病?n细胞两极阳性-中心粒抗体,相关疾病 ?n着丝点阳性-抗着丝点抗体抗着丝点抗体(ACA)荧光模式: Hep-2:细胞核细的 、相同大
11、小的颗 粒荧光,分裂期 颗粒荧光带状位 于细胞中间。 肝组织片:分布于 细胞核的1020 个颗粒,荧光弱 ,易被忽略。抗着丝点抗体n自身抗原:着丝粒中的三种不同的蛋白 质:着丝点蛋白A、B、C,主要抗原为 着丝点蛋白B。n临床意义:对进行性系统性硬化症亚型 (CREST综合征)有诊断意义。阳性率 8095%。还可见于PBC、SS等。器官/组织特异性自身抗体n抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)n抗平滑肌抗体n抗角蛋白抗体n抗肝肾微粒体抗体n抗肝细胞膜抗原抗体n抗可溶性肝抗原抗体n抗肝特异性蛋白抗体抗中性粒细胞胞浆抗体(胞浆型 )cANCAn荧光模式:n猴肝:肝血 窦区粒细胞 强荧光,而 肝细胞阴性
12、 。甲醛固定 的中性粒细 胞:胞浆内 粗大到细的 荧光颗粒。抗中性粒细胞胞浆抗体(胞浆型 )n自身抗原:为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3(PR3) 。该靶抗原为可溶性蛋白,存在于正常中性粒 细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。n临床意义:cANCA可见于多种系统性血管炎 。主要见于Wengeners肉芽肿,约占ANCA阳 性率的8095%。cANCA被认为是活动性 Wengeners肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感 的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。抗中性粒细胞胞浆抗体(核周型 )pANCAn荧光模式:n乙醇固定的 中性粒细胞 :细胞核周 围平滑的带 状荧光,细 胞核阴性。n猴肝:肝血 窦区粒细胞
13、 强荧光,而 肝细胞阴性 。抗中性粒细胞胞浆抗体(核周型 )n自身抗原:主要抗原为髓过氧化物酶(MPO ),其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶,组织蛋 白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。n临床意义:见于多种系统性血管炎。可见于 Wengeners肉芽肿、微多动脉炎、Churg- Strauss综合征、炎性肠病、自免肝、系统性风 湿病(RA、SLE、SS、PM/DM)。抗平滑肌抗体(SMA)荧光模式: 大鼠胃组织,呈 现肌膜、黏膜 肌层和肌膜腺 体间收缩纤维 的明显细胞浆 荧光 。 大鼠肾组织,肾 小管细胞内原 纤维、肾小球 膜细胞及血管 肌层的荧光。抗平滑肌抗体(SMA)n自身抗原:主要的靶抗原为肌动蛋白
14、, 肌动蛋白可以单体(G-肌动蛋白)或聚 合体(F-肌动蛋白)形式存在于微丝中 , F-肌动蛋白自身抗原与自免肝关系密 切,而G-肌动蛋白自身抗原则与酒精性 肝硬化有关。n临床意义:见于自身免疫性肝炎、PBC 、酒精性肝硬化。抗角蛋白抗体(AKA)荧光模式: 大鼠食管, 仅限于上 皮角质层 的较强的 线性分层 的均质荧 光。抗角蛋白抗体(AKA)n自身抗原:丝聚蛋白(filaggrin)为 AKA的靶抗原。n临床意义:见于RA,阳性率3659%, 特异性9599%。还是一个潜在的预后标 志,高抗体滴度可能预示着较严重的RA 类型。抗肝肾微粒体抗体(LKM)有三种荧光模式: LKM-1:肝细胞胞
15、浆 明显荧光,呈细 颗粒到均质状, 肾脏近近端肾小 管有荧光。 LKM-2:门静脉周围 的肝组织荧光比 其他部位强,肾 脏近近端肾小管 有荧光。 LKM-3:肝和肾均为 阴性,灵长类睾 丸间质细胞荧光 明显。抗肝肾微粒体抗体(LKM)n自身抗原:nLKM-1:细胞色素P450 D6,为50KD蛋白。nLKM-2:细胞色素P450同工酶,药物替尼酸的结合部位nLKM-3:UDP葡萄糖醛酸基转移酶,为55KD蛋白。n临床意义:自免肝按血清学分型可分为三型n型:出现ANA、SMA、肝细胞膜抗体(LMA抗体)为特 征。n型:以出现LKM抗体为特征。n型:以出现可溶性肝抗原抗体(SLA抗体)为特征。nL
16、KM-1为型自免肝的血清学标志。LKM-3抗体见于1015 的慢性丁型肝炎患者。抗肝细胞膜抗原抗体(LMA)荧光模式: 肝细胞膜的 线性荧 光。抗肝细胞膜抗原抗体(LMA)n自身抗原:肝细胞膜抗原,可能为26KD 蛋白。n临床意义:为非疾病特异性,最常发生 于病毒性及原发性自身免疫性肝炎型 ,在非肝病患者,其发生率较低。抗可溶性肝抗原抗体(SLA)荧光模式: 猴肝组织上 ,肝细胞 明显荧光 ,呈细颗 粒到均质 溶解状。 大鼠肾组 织为阴性 。抗可溶性肝抗原抗体(SLA)n自身抗原:主要的靶抗原为肝细胞角蛋 白。n临床意义: 型自免肝的血清学标志。抗肝特异性蛋白抗体(LSP)荧光模式: 猴肝细胞明 显的颗粒 状荧光。抗肝特异性蛋白抗体(LSP)n自身抗原:肝特异性膜脂蛋白,为43KD 蛋白。n临床意义:常发生于病毒性及原发性自