《[医学]第五章体内药物分析》由会员分享，可在线阅读，更多相关《[医学]第五章体内药物分析（37页珍藏版）》请在金锄头文库上搜索。
1、第5章体内药物分析Biopharmaceutical analysis*1 体内药物分析生物样品的种类、采集和制备 血液(血浆、血清)体现药物浓度和治疗作 用之间的关系最常用的生物样本生 物 样 品脏器组织体液血液、尿液、唾液、毛发、乳汁、 精液、脑脊液、泪液、胆汁、 胃液、胰液、淋巴液、粪便等第一节 常用体内样品的制备与贮藏 Date2 体内药物分析（一）样品的采集1血样血样浓度与作用点的浓度密切相关，可以反映 靶器官的浓度。 血细胞血浆（plasma）血小板 血清（serum）血细胞测定血样中平均分布于细胞内和细胞 外的药浓抗凝自然全血血液Date3 体内药物分析血样主要应用于：u 药物动
2、力学u 生物利用度u 临床治疗药物浓度监测第三章 生物样品与样品制备 第一节 生物样品的种类采集 血样的应用Date4 体内药物分析2尿样目的：药物剂量回收，药物清除率，生物利 用度和，预测药物代谢过程、类型体内药物清除主要是通过尿液排出，药物以原型、相及相代谢物等多种形式排出特点：浓度高，易于收集，体内代谢研究， 应水解分离Date5 体内药物分析3唾液一些药物的唾液药浓(S)与血浆游离药浓(P)密切相关，因此： TDM中利用对S的测定代替对P的监测 药代动力学的研究收集方法 离心 收集Date6 体内药物分析（二）样品的贮藏1血样（血浆、血清）及时分离冷藏， -70加入稳定剂NaF2尿样尿
3、中水、无机盐、尿素等细菌的生长， 4 保存加入防腐剂 a1%甲苯 b饱和氯仿 cpH改变3唾液：同血样Date7 体内药物分析第二节 体内样品分析的前处理（一）预处理的目的（一）预处理的目的存在形式的多样性 游离 结合 代谢 物浓度低，杂质多（分离浓缩）出现浑浊和沉淀与试剂起反应影响色谱柱寿命Date8 体内药物分析（二）处理方法选择的一般原则1药物理化性质pKa 亲脂性 挥发性 溶解度 光谱特 征 稳定性2浓度范围 灵敏的方法3测定的目的 定性 定量 母体 代谢4生物样品的种类5样品处理与分析方法的选择 专一性 灵敏性Date9 体内药物分析（三）生物样品去蛋白处理1加入与水能混溶的有机溶剂
4、及中性盐甲醇 乙腈 甲醇1:2 乙腈1:1.5（NH4）2SO4 NaCl2加入酸性沉淀剂三氯醋酸 高氯酸 苦味酸等 使蛋白质分子的阳离子形成不溶性盐而，pH低 于等电点Date10 体内药物分析3组织酶消化法加入酶使蛋白质水解优点：平衡条件下进行，可避免反应和降解可改善对蛋白结合率强的药物的回收率不产生乳化4其他 加热 超滤 Date11 体内药物分析（四）生物样品中缀合物水解1酸水解 2酶水解-葡萄糖醛酸苷酶 芳基硫酸酯酶 混合酶pH4.5-7.0 373溶剂解某些药物的硫酸酯，往往加入率取溶剂时发 生分解，同时提取有机溶剂中Date12 体内药物分析（五）生物样品的萃取1液-液萃取（1）
5、优点：与杂质分离 简便浓集 提取率高（2）提取率：在有机相与水相中的溶解度的比值分配系数，一般少量多次，对生物样品一般一次萃取， 70%重现性Date13 体内药物分析（3）影响提取率的因素 pH 碱性药物在碱性pH 酸性 酸性pH 提取溶剂 相似相溶原理 沸点低，不影响检测,性质稳定，不起化学反应 离子强度 加入中性盐 增加离子强度，与水结合强，便于有机溶剂提取 Date14 体内药物分析（4）离子对提取对于离子性特强，水溶性极大的药物，可采 用离子对提取原理应用阴离子：COOH+ SO3H- 反离子 四丁基铵阳离子：NH2+ 反离子烷基或芳基磺酸盐（5）提取技术一般在试管中进行,有机相与水
6、相比1:1或 2:1Date15 体内药物分析（6）乳化问题措施轻缓振摇含有分散度大或不溶物应过滤掉避免在高pH条件下，从水中提取药物避免使用易发生乳化的溶剂萃取剂水中加入少量NaClDate16 体内药物分析破乳方法机械法加入少量高级脂肪醇 改变表面张力改善混合溶剂比例，增加分散相分数（7）药物的吸附玻璃容器吸附 1%三甲一氯硅烷 10%二甲二氯硅烷血浆 Date17 体内药物分析2液固萃取固相萃取solid phase extraction SPE针管式 抽空减压 加压 过滤Date18 体内药物分析（1）固相萃取步骤固相选择 样品1ml 1ml规格固相 125ml 3ml规格固相固相处理
7、反相C18 固定相的610倍体积甲醇洗柱，使溶剂化； 610倍水缓冲服液冲洗达分离状态上样分离 用适当的弱溶剂洗涤 洗去杂质，通N2干燥固相洗脱待测物 改变pH或极性 Date19 体内药物分析（2）影响固相萃取的因素 流速 流速快，按触不充分，样品流失 回收率低柱处理 510mlmin-1洗脱 0.21mlmin-1（300mg25mlmin-1（300mg） 装样 过载 突破性试验已知浓度样品液 小体积上柱洗脱回收百分率 加大体积洗脱回收百分率 绘图 当回收率下降时为过载 Date20 体内药物分析（六）生物样品的组分浓集（六）生物样品的组分浓集（七） 衍生化处理GC衍生化HPLC衍生化D
8、ate21 体内药物分析第三节 体内样品分析方法与方法验证一、分析方法灵敏度灵敏度专专专专属性属性光光谱谱谱谱法法+ + +刚刚刚刚开始开始应应应应用用较较较较多双波多双波长长长长 ，导导导导数数色色谱谱谱谱法法+HPLC GCHPLC GC免疫法免疫法+免疫交叉反免疫交叉反应应应应，重，重现现现现性性 差差根据药物理化性质，结构特征，药物浓度 ，干扰成分大小，实验目的Date22 体内药物分析二、分析方法的设计依据方法的建立原始方法改进创新创立方法Date23 体内药物分析1做好文献总结2充分了解药物特征及体内状况pH、亲脂性、溶解度、极性、光谱特征、 药动学参数、体内代谢情况3明确测定目的
9、、要求目的药浓监测药代动力学研究母体药物和代谢物4结合实验室条件 设备条件 预处理方法Date24 体内药物分析三、分析方法的建立1纯品进行测定确定线性范围、灵敏度、反应条件（pH、t、T ） 2空白样品测定确定空白样品是否有干扰 3以水代替空白样品，加标准液后测定了解提取率、检测浓度确定萃取条件、pH、挥发浓缩等 4空白样品加入标准液测定标准曲线建立 回归方程 回收率 5实验样品测定 Date25 体内药物分析四、分析方法的评价可行性和可靠性1准确度 accuracy 测定结果与真实性的差异用回收率表示 接近100% 相对恒定Date26 体内药物分析绝对回收率 也称萃取回收率、提取回收率测
10、定血浆样品中药物浓度/相同浓度的标准液 =绝对回收率考虑3个浓度（高、中、低） 分布在标准曲线 成上、中、下一般要求绝对回收率在70%一般方法 HPLC内标内标法时注意：药物与内标用各自外标法测定 回收率应相近，差值10%Date27 体内药物分析 相对回收率方法回收率药物系列浓度+血样标准曲线取高、中、低三浓度加入到空白血浆中， 处理后测定，与加入标准量相比，得方法回收 率，测定值15%，定量限20%注意问题：a加入药量与实际测定值相近b加入物与实际存在状态相近c空白试验 与已确定方法进行比较Date28 体内药物分析2精密度precision标准差SD相对标准性偏差RSD不大于15%，定量
11、限不大于20% 日间精密度日内精密度Date29 体内药物分析3灵敏度（sensitivity） 检测的最小量（1）检测限（LOD）从背景中检测到的最小药物浓度：S/N3的 绝对量LOD=3N/S （N噪间 S被测物信号/单位重量 ）N=1mm 取2gml样品，20l进样 峰高 度30mmLOD=4ngDate30 体内药物分析（2）定量限(LOQ) 在一定精密度和准确度前提下求得最低检测量，通常以标准曲线最低点作为一定量限，也 可S/N=10作为定量限，实际测定时，满足35个半衰期浓度，或Cmax1/101/20Date31 体内药物分析（3）最低检测浓度可以进行定量测定的某一药物的最低浓度
12、 ，它与样品体积大小等因素有关最低检测浓度=LOQ/进样体积体内浓度检测限=仪器浓度检测限稀释度1ml0.1ml 体内检测限=仪0.11ml10ml 体内检测限=仪10Date32 体内药物分析20世纪60年代 临床药理学与生物药剂学的建立70年代初 体内药物分析在国外开始建立70年代末 血药浓度监测广泛用于临床 80年代 体内药物分析学科雏形基本形成体内药物分析的发展概况Date33 体内药物分析国内发展概况：在70年代末受到关注1979年有“体内药物分析刍议”一文的提出1981年在“中国药学会药物分析第一次学术会议”大会学术报告，引起了广泛的关注和兴趣80年代中期，一些高等医药院校开始为本科生、硕士研究生开设体内药物分析课程Date34 体内药物分析学科热点问题& 游离型血药浓度测定方法研究& 血中游离型药物浓度（F）与总浓度（T）的比率（F/T）及唾液与血液游离浓度的比率（S/P）以及它们之间的相关性的研究& 代谢物的监测与研究Date35 体内药物分析& 对映体的监测与研究 & 体内微量元素的测定与研究& 方便、快捷的样品制备方法与样品直接进样分析的研究& 分析新方法、新技术的联用研究& 体内药物分析方法的质量控制研究*36 体内药物分析*37 体内药物分析
