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1、实验一、普通生物显微镜的使用( 一)动、植物细胞、真菌的观察及生物 绘图法一、实验目的： 1.了解普通光学显微镜和体视显微镜的基本构造及功用，并正确掌握使用和维护方法。 2. 观察一些真核细胞的结构，学习基本生物绘图方法。 3. 学习临时装片的制作方法。二、实验原理：（一）、显微镜概述：显微镜是观察细胞的主要工具。根据光源不同，可分为光学显微镜和电子显微镜两大类。前者以可见光（紫外线显微镜以紫外光）为光源，后者则以电子束为光源。（二）、显微镜的发明： 1. 最早由荷兰眼镜商在1600年前后制造的，它的结构简单，放大倍数只有1030倍，可以观察一些小昆虫，如跳蚤等，因而有人称它为“跳蚤镜”。 这
2、种显微镜是用光线照明的，属于光学显微 镜。2. 英国物理学家罗伯特虎克（Robert Hooke，1635 1703）研制出能够放大140倍的光学显微镜，并用它来观察软木薄片，发现了细胞。 3. 1673年有个名叫列文.虎克（Antoni van Leeuwenhoek）的荷兰兰人用自己制造的显显微镜观镜观 察到了 被他称为为“小动动物”的微生物世界。他也被称为微生物的开山祖。4. 1938年，德国工程师鲁斯卡（ Ernest Ruska,1906-1988) 制造出世界第一台透射电子显微镜（TEM）。1952年，英国工程师Charles Oatley制造出第一台扫描电子显微镜（SEM）（三）
3、、显微镜的分辨率:分辨率：也称为分辨力，它是指能把两个物点分辨清楚的最小距离。分辨率数值越高，分辨距离越大，则分辨率越低 。反之亦然。所以，分辨率是以分辨距离来表示 的。其计算公式为:D=0.61入/NA NA=n sina/2式中D为分辨率，A为光波波长，NA为物镜的 数值孔径(镜口率)。 在物镜上，有镜口率(N.A.)的标志，它反应该镜 头分辨力的大小，其数字越大，表示分辨率越高。各物镜的镜口率如下表： 物镜 镜口率(N.A.) 工作距离(mm) 10 0.25 5.4040 0.65 0.39100 1.30 0.11显微镜的总放大倍数=目镜放大倍数物镜放大倍 数公式为: M = K1
4、K2焦点深度: 显微镜调焦到看清标本某一点时， 不仅是这一物点，而且它的上下两侧 也能看清楚的厚度叫做焦点深度。要看到标本的全厚度，必须调节螺 旋仔细地从上到下进行观察。三、材料和仪器： 仪器：普通光学显微镜、体视镜（附显微用品 ：擦镜纸、香柏油、二甲苯、载玻片、盖玻片） 材料与器材：新鲜酵母液、滴管、镊子、培 养皿、标本盒（内有各种装片）四、实验步骤：（一）普通显微镜的使用及维护：I .光学显微镜的构造 普通生物显微镜由2部分构成：光学部分：包括物镜、目镜、光源、聚光器，是显微镜的主体。：机械部分：包括镜筒、镜臂、镜座、镜台(载物台 ）、调节旋钮、物镜转换器等，用于固定材料和观察方便。II
5、.显微镜的使用1. 观察前的准备工作 .显微镜在使用之前应检查一下它的各个部件是 否完整和正常，并对载物台、目镜、物镜以及聚 光器上端透镜进行必要的清洁工作。然后进行调 节。 .观察时要双眼同时睁开，一边观察一边进行记 录或描绘。 .观察时所用的材料、药品和各种器具要预先备 好2. 使用方法：（1）低倍镜的使用：观察任何标本，均需从低倍镜开始。 检查：检查显微镜是否完好。 准备：将显微镜放于前方略偏左，转动粗调旋 钮将载物台下降，旋转物镜转换器使低倍镜正对 通光孔。 对光： 放标本片： 调节焦距计算放大倍数： 错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因： A. 转动调节太快，超过焦
6、点，需重新调节。 B. 物镜未对准通光孔。 C. 标本没放在视野内，需移动标本片寻找观察对象。 D. 光线太强或太弱。尤其观察透明或未染色标本时，应将光线调稍暗些，有利观察。（2）高倍镜的使用： 依照上述操作步骤，先用低倍镜找到清晰物象， 将需要观察的部分移到视野中央， 眼睛从侧面注视物镜，移动转换器，换高倍镜， 看目镜，微调细调旋钮，至看到清晰物象。 错误原因：如按上述操作，依然看不到图象，可能有以下原因： A. 观察的标本不在视野内。应在低倍镜下找到后，移到视野中央，再换高倍镜观察。 B. 标本放反了。 C. 焦距未调好。（3）油镜的使用： 先用低倍镜观察标本情况。 换高倍镜，把需观察的部
7、分移至视野中央。 将聚光器升至最高位置，光圈开至最大。 在盖玻片所要观察的位置滴一小滴香柏油，放于载物台。 把油镜移至工作位置。 慢慢调节粗细调节旋钮，使载物台缓慢上升，同时细心从侧面观察物镜前端与标本之间的距离。先使物镜前端与油滴接触，再慢慢上升载物台，至物镜前端接近而没有碰触到盖玻片为止。（小心损伤油镜或装片） 眼睛从目镜观察，缓慢调节细调旋钮至看清标本 （注意只能下降载物台） 观察完毕，下降载物台，使油镜离开光轴， 及时做好油镜的清洁工作（先用干净的擦镜纸 擦去大部分香柏油，再用二甲苯滴湿的擦镜纸 擦拭两次，最后用干的擦镜纸擦拭一次）。玻片上的油可用“拉纸法”擦去：把一小张 擦镜纸盖在载
8、玻片的油滴上，其上滴一两滴二 甲苯，趁湿把纸往外拉，连续几次，即可擦净 （注意不要使用过多的二甲苯，并及时擦干净 上面的香柏油，以免使装片受损）。注意：如果不出现物象或者目标不理想要重找，A. 在加油区之外重找时应按：低倍高倍油镜程序。B. 在加油区内重找应按：低倍油镜程序，不得经高倍镜，以免油沾污镜头。 3. 显微镜使用后的复原：（1）下降聚光器约1cm，（2）使物镜离开光轴，使通光孔正队两个物镜中 间，提升载物台至原来位置，（3）把载物台上的标本移动器移至适当位置，（4）关闭电源。4、显微镜使用的注意事项（1）持镜时必须是右手握臂、左手托座的姿势，不可单手提取，以免零件脱落或碰撞到其它地方
9、。（2）轻拿轻放，不可把显微镜放置在实验台的边缘，以免碰翻落地。（3）保持显微镜的清洁，光学和照明部分只能用擦镜纸擦拭，切忌口吹手抹或用布擦，机械部分用布擦拭。（4）水滴、酒精或其它药品切勿接触镜头和载物台如果沾污应立即擦净。（5）放置玻片标本时要对准通光孔中央，且不能反放玻片，防止压坏玻片或碰坏物镜。（6）要养成两眼同时睁开的习惯，以左眼观察视野右眼用以绘图。（7）不要随意取下目镜，以防止尘土落入物镜，也不要任意拆卸各种零件，以防损坏。（8）使用完毕后，必须复原才能放回镜箱内。（二）、体视镜的使用体视显微镜又称实体显微镜，它在观察物体时能产生正立的三维空间影像。立体感强，成像清晰和宽阔，又具
10、有长工作距离，并可根据观察物的特点选用不同的反射和透射光照明，是适用范围非常广泛的常规显微镜。 （三）、标本的观察 “5 ”字片：低倍 人血涂片：低倍 高倍 油镜 兔精虫涂片：低倍 高倍 单层扁平上皮：低倍 高倍 动、植物细胞有丝分裂切片：低倍 高倍 日本血吸虫雌雄合抱装片：肉眼 低倍（四）、酵母临时装片的制作1. 滴一滴鲜酵母液于干净的载玻片上，2. 轻轻盖上盖玻片，注意不要产生气泡，3. 低倍、高倍镜下观察。注意：观察时注意光线不要太强，以免影响观察效果。（五）生物学绘图方法：1. 用2H铅笔绘轮廓，用HB铅笔描深，线条要光滑，2. 图及文字部分全部用铅笔，文字用中文楷书，3. 绘图纸上端
11、写清实验名称，中部画图，下部写清所绘图名称、放大倍数，4. 标明图中各部分名称，用直线引线并标在图的右侧，名称较多时，可先标在右侧，再标在左侧，5. 可用光滑黑点表示明暗不同，不可大面积涂黑。五、作业：1. 绘图：绘出你用油镜所观察到的人红细胞视野图。2. 思考题：（1）总结使用显微镜应特别注意的几个问题。（2）从低倍物镜转高倍物镜时应注意哪几点？（3）接物镜上各铭文有何意义？（4）用油镜观察和嗣后的操作步骤。为什么要用香柏油作介质？还有哪些可作介质？（5）镜检时，因光线过亮而成像不清晰，怎么办？（6）为何不能直接用高倍镜观察标本？（7）怎样计算显微镜的放大倍数？放大倍数是对长度还是面积而言的？（8）观察时若发现视野内有异物，如何确定该异物在目镜、物镜、还是在玻片上，如何去除？（9）光学显微镜与体视镜有何不同？（10）制作临时玻片标本时，如何避免产生气泡？
